【摘 要】
：
目的:研究肾上腺素能1D受体（alpha-1D-receptor,Adra1d）在恶性黑素瘤（Malignant Melanoma,MM）中的表达情况,分析Adra1d对恶性黑素瘤血管新生、增殖、迁移、侵袭的影响,并探索其作用机制,为阐明黑素瘤的发生发展机制提供新的理论依据,并有望为黑素瘤诊治提供潜在新靶点。方法:1.本研究纳入近20年内保存在南昌大学第一附属医院病理科16例色素痣和16例黑素瘤组
论文部分内容阅读
目的:研究肾上腺素能1D受体（alpha-1D-receptor,Adra1d）在恶性黑素瘤（Malignant Melanoma,MM）中的表达情况,分析Adra1d对恶性黑素瘤血管新生、增殖、迁移、侵袭的影响,并探索其作用机制,为阐明黑素瘤的发生发展机制提供新的理论依据,并有望为黑素瘤诊治提供潜在新靶点。方法:1.本研究纳入近20年内保存在南昌大学第一附属医院病理科16例色素痣和16例黑素瘤组织的蜡块,用免疫组化技术检测Adra1d的表达水平;利用实时荧光定量（RT-q PCR）和蛋白免疫印记（Western-blot）技术检测黑色素瘤细胞系（A375、SK-MEL28、M14）和人永生化角质形成细胞（Ha Ca T）细胞中Adra1d的表达水平;2.采用慢病毒包装技术构建过表达Adra1d（Adra1d OE）和空载（Vector）的载体,感染A375细胞,用嘌呤霉素筛选稳转株,在荧光显微镜下观察荧光转染效率,采用q RT-PCR和Western-blot验证感染后Adra1d的表达水平;为了研究Adra1d对血管新生的作用,本实验采用共培养法,收集过表达Adra1d的A375细胞和空载组A375细胞的培养基作为条件培养基,与人脐静脉内皮细胞（HUVEC）共培养,然后对HUVEC进行体外成管、划痕实验,研究特异性过表达Adra1d的A375细胞通过旁分泌作用对HUVEC成管、迁移的影响;收集两组共培养后HUVEC细胞,提取RNA和蛋白,采用q RT-PCR、Western-blot技术检测血管内皮生长因子（vascular endothlial growth factor,VEGF）、缺氧诱导因子-1α（Hypoxia induced factor 1α,HIF-1α）等血管新生相关指标的表达水平;3.对两组A375细胞分别进行划痕、Transwell以及CCK-8实验,研究过表达Adra1d能否抑制A375细胞的迁移、侵袭以及增殖;4.动物实验:在裸鼠皮下注射过表达Adra1d的和空载的A375细胞,构建皮下瘤模型,用免疫组化技术检测瘤体中微血管密度。结果:免疫组化检测了黑素瘤组织和色素痣组织中Adra1d的表达情况,结果显示Adra1d在黑素瘤中阳性率为25%（4/16）,在色素痣中阳性率为87.5%（14/16）,提示色素痣组织表达水平较黑色素瘤组织明显升高（（P＜0.05））;接着验证了Adra1d在黑素瘤细胞（A375、SKMEL-28、M14）中m RNA和蛋白的表达水平低于Hacat细胞（P＜0.05）,综合分析表明Adra1d在黑素瘤中的表达量明显降低;2.荧光显微镜下观察过表达组和空载组细胞绿色荧光效率均达90%以上,q RT-PCR和Western-blot实验表明过表达组Adra1d表达水平较空载组明显升高（P＜0.05）,提示感染并过表达成功;将过表达和空载的A375细胞的培养基与HUVEC共培养24h,接着对HUVEC进行体外成管和划痕实验,结果显示过表达Adra1d能抑制内皮细胞体外成管,但不能抑制内皮细胞迁移,同时检测到共培养后过表达Adra1d组的内皮细胞表达VEGF、HIF-1α水平较对照组降低,提示抑制内皮细胞分泌VEGF、HIF-1α。3.CCK8结果显示,从24h开始过表达组的OD值显著低于空载组OD值（2h:0.1940±0.005 VS 0.1963±0.012、24h:0.255±0.016 VS 0.275±0.009、48h:0.360±0.018 VS 0.404±0.019、72h:0.736±0.011VS 0.885±0.032）（P＜0.05）,结果提示过表达Adra1d抑制了A375的增殖;迁移实验结果显示过表达Adra1d对A375迁移无明显影响;Transwell侵袭实验显示过表达Adra1d抑制了A375细胞侵袭。4.裸鼠皮下移植瘤模型实验结果显示过表达组的肿瘤体积和肿瘤重量明显低于空载组,对肿瘤进行CD34免疫组化染色,结果显示过表达Adra1d组瘤体微血管密度低于空载组,提示过表达Adra1d能抑制裸鼠皮下瘤生长并且抑制瘤体的血管新生。结论:1.Adra1d在黑色素瘤组织中的表达较色素痣组织低、在A375、SK-MEL28、M14黑素瘤细胞中的表达水平明显低于Hacat细胞;2.过表达Adra1d能抑制内皮细胞成管,且抑制内皮细胞分泌VEGF、HIF-1α,但不能抑制内皮细胞迁移;3.过表达Adra1d抑制A375黑色素瘤细胞增殖、侵袭,不能抑制其迁移;4.过表达Adra1d能抑制裸鼠皮下瘤的生长,降低皮下瘤的微血管密度。
其他文献
目的:1.研究高毒力肺炎克雷伯菌的临床分布、耐药现状及分子流行病学特征。2.研究qnrS1质粒阳性高毒力肺炎克雷伯菌的耐药、毒力及分子流行病学特征。3.研究高毒力肺炎克雷伯菌中qnrS1质粒的适应性代价及流行传播机制。方法:1.收集南昌市某大型三甲教学医院2017年1月至2020年11月临床各种标本分离的肺炎克雷伯菌2746株作为实验菌株,并剔除同一个患者相同部位的重复菌株。应用Vitek 2 C
研究目的达托霉素属于环脂肽类抗菌药物,是一种具有很强杀菌作用的细胞膜活性化合物,主要适用于治疗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌引起的复杂感染。目前金黄色葡萄球菌对达托霉素的耐药机制未明。研究金黄色葡萄球菌对达托霉素的耐药机制既有助于为新药物的开发提供思路,也有助于研究出针对耐药靶点的方案进一步减缓细菌耐药的发展。本研究通过体外诱导金黄色葡萄球菌对达托霉素产生耐药性,对耐药菌株的表型特征及耐药机制进行研究。
目的:近些年来序列型（ST）88金黄色葡萄球菌在亚洲太平洋地区和非洲国家被越来越多地发现和报道。目前关于金黄色葡萄球菌ST88克隆的基因组研究和毒力表型特征分析相对有限。本研究以南昌市某三甲医院收集的ST88型金黄色葡萄球菌为研究对象,进行全基因组测序及毒力表型研究,以阐明ST88菌株的基因型特征和及毒力特征。方法:1.收集南昌市某三甲医院从各类临床标本中分离的非重复金黄色葡萄球菌176株。全基因
第一部分:天竺葵素在体外对小鼠软骨细胞炎症和表型的影响及其机制的研究目的:骨关节炎是中老年人常见的疾病,主要临床表现为关节畸形、疼痛和功能障碍,其发病与软骨细胞外基质的破坏和炎症反应息息相关。炎症和炎症反应是引发和加剧骨关节炎发生发展的关键因素,在这些炎症因子中,白细胞介素-1β（Interleukin-1β,IL-1β）被认为在骨关节炎的病理发展中起到关键作用。核转录因子κB（NF-κB）是一种
背景:急性髓系白血病（acute myelocytic leukemia,AML）是造血干/祖细胞恶变而引起的血液系统恶性肿瘤,发病机制尚不明确。AML患者预后差,五年存活率低于30%。因此,探索新的生物标志物有助于AML患者的临床诊断、预后评估和个性化治疗指导。RNA的选择性剪接（alternative splicing,AS）是形成蛋白质多样性的基本生物过程,但许多非特征性的AS事件被证实参与
目的:探讨质谱技术在检测临床分离的产碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌的应用价值。方法:1.收集南昌某大型三甲医院2016年1月-2019年12月血培养分离获得的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（Carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP）。用VITEK-2 compact进行菌种鉴定及药敏检测。改良碳青霉烯酶灭活试验（Modified carbapenem in
目的:研究RAB17基因在前列腺癌中表达水平的改变以及对前列腺癌细胞功能的影响。方法:通过基因芯片分析和对TCGA（The Cancer Genome Atlas）数据库中前列腺癌转录组数据挖掘,在非配对和配对前列腺癌组织样本中找出表达差异的基因。利用ROC曲线分析、KM（Kaplan-Meier）生存曲线、单因素和多因素COX回归分析其临床相关性。利用HPA（The Human Protein
目的:应用超声无创心肌做功技术评估2型糖尿病（T2DM）左室心肌功能,探讨T2DM伴与不伴高血压（HTN）心肌功能的影响,旨在为T2DM伴与不伴HTN心肌损害的治疗提供依据。资料与方法:选取2020年7月～2021年2月来我院就诊的T2DM患者179例,根据是否伴有HTN病史分为2组,其中单纯T2DM患者（DM组）104例,T2DM合并HTN患者（DH组）75例。同时选取同期健康志愿者68例为对照
研究背景和目的:骨肉瘤是常见于儿童、青少年的来源于骨组织的一种恶性肿瘤,特征是恶性程度高、生长迅速、容易转移,目前骨肉瘤的治疗仍是一项重大挑战。USP10可以将细胞质中的蛋白质进行去泛素化,从而参与调节细胞生长、迁移和凋亡等,进而影响肿瘤细胞的发生发展。YAP1作为Hippo信号通路的重要下游效应器中YAP的亚型之一,在肿瘤细胞增殖、凋亡、自噬和远处转移中扮演着重要的角色。有研究发现USP10和Y
目的:肺血管内皮细胞通透性和肺泡上皮细胞钠水转运系统的改变在体外循环术后肺损伤形成肺水肿的过程中起着重要作用。我们前期研究表明巨噬细胞与肺血管内皮细胞通透性和肺泡上皮细胞钠水转运系统有关,但是具体巨噬细胞是怎么影响肺血管内皮细胞通透性和肺泡上皮细胞钠水转运系统的还有待进一步探讨。因此本实验采用共培养模型探究不同极化类型的巨噬细胞对肺血管内皮细胞通透性和肺泡上皮细胞钠水转运系统带来的变化。实验方法: