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目的:本研究旨在观察去甲斑蝥素（norcantharidin,NCTD）对人卵巢癌SKOV3细胞增殖和细胞凋亡的影响,并探讨去甲斑蝥素是否能增强卵巢癌SKOV3细胞对顺铂（cisplatin,DDP）的敏感性,探讨去甲斑蝥素与顺铂联合用药机制,丰富去甲斑蝥素辅助治疗卵巢癌的科学依据,为临床中西医结合用药提供参考。材料与方法:论文一:1.MTT法检测去甲斑蝥素对SKOV3细胞的生长抑制作用,加入不同浓度（0-100μmol/L）的去甲斑蝥素12h、24h和48h后分别检测去甲斑蝥素诱导的细胞毒性作用。2.在倒置显微镜、荧光显微镜下观察去甲斑蝥素（52μmol/L）以及N-乙酰半胱氨酸（NAC）联合去甲斑蝥素（52μmol/L）处理细胞后SKOV3细胞形态的变化特点。3.流式细胞术检测去甲斑蝥素作用后的SKOV3细胞周期DNA含量和细胞凋亡率,并用荧光探针DCF-DA染色SKOV3细胞后用流式细胞术检测用药后细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）的产生,从而探索凋亡机制。4.免疫印迹法检测Bax、Bcl-2、procaspase-3、cyclin B1、p21蛋白表达变化,探索去甲斑蝥素作用SKOV3细胞的机制。论文二:1.MTT法检测去甲斑蝥素联合顺铂对SKOV3细胞的生长抑作用。2.在倒置显微镜下观察去甲斑蝥素（30μmol/L）、顺铂（10μg/m L）、去甲斑蝥素+顺铂（30μmol/L+10μg/m L）分别作用SKOV3细胞后细胞形态的变化特点。3.流式细胞术检测去甲斑蝥素（30μmol/L）、顺铂（10μg/m L）、去甲斑蝥素+顺铂（30μmol/L+10μg/m L）分别作用SKOV3细胞后的细胞凋亡率。4.荧光显微镜下观察去甲斑蝥素（30μmol/L）、顺铂（10μg/m L）、去甲斑蝥素+顺铂（30μmol/L+10μg/m L）分别作用SKOV3细胞后细胞线粒体的形态变化和分布。5.免疫印迹法检测去甲斑蝥素（30μmol/L）、顺铂（10μg/m L）、去甲斑蝥素+顺铂（30μmol/L+10μg/m L）分别作用SKOV3细胞后procaspase-3蛋白表达的变化。结果:论文一:1.去甲斑蝥素抑制SKOV3细胞生长MTT结果显示,与空白对照组相比,去甲斑蝥素作用后可不同程度地抑制细胞生长并呈时间和浓度依赖性。2.去甲斑蝥素诱导SKOV3细胞凋亡和G2/M期细胞周期阻滞倒置显微镜下可见药物作用后SKOV3细胞发生明显的形态学改变,细胞形态皱缩、变圆,出芽形成了明显的凋亡小体。PI染色流式细胞术检测结果显示,与对照组相比,去甲斑蝥素给药12h和24h后sub G1峰的比例和双倍的DNA的数量的比例明显增强,显示细胞中发生了细胞凋亡和G2/M期阻滞。3.去甲斑蝥素诱导SKOV3细胞内ROS的产生流式细胞术检测结果显示,52μmol/L去甲斑蝥素作用SKOV3细胞0-24h后,细胞内ROS水平呈时间依赖性升高。4.活性氧对去甲斑蝥素诱导SKOV3细胞的凋亡和G2/M期周期阻滞的影响流式细胞术结果显示,5mmol/L NAC预处理后明显降低去甲斑蝥素诱导的SKOV3细胞内ROS的生成。用荧光显微镜观察DCF染色发现,NAC预处理后明显降低去甲斑蝥素诱导的DCF绿色荧光强度。5.去甲斑蝥素对SKOV3细胞中蛋白表达的影响免疫印迹结果显示,去甲斑蝥素作用24 h后,Bcl-2表达量明显下降,Bax增加,procaspase-3表达降低,G2/M期的重要的调控因子p21蛋白表达水平上调,cyclin B1蛋白表达水平下调。NAC的加入可以明显逆转去甲斑蝥素单独作用引起的Bax、Bcl-2、procaspase-3、p21和cyclin B1蛋白表达的变化。论文二:1.去甲斑蝥素联合顺铂对SKOV3细胞的生长抑制作用MTT结果显示,去甲斑蝥素（30μmol/L）、顺铂（10μg/m L）和去甲斑蝥素（30μmol/L）+顺铂（10μg/m L）作用于SKOV3细胞后,分别于24h、48h和72h检测药物诱导的细胞毒性作用。去甲斑蝥素和顺铂联合用药后,去甲斑蝥素可有效提高卵巢癌SKOV3细胞对顺铂的敏感性,呈时间依赖性。2.去甲斑蝥素联合顺铂对SKOV3细胞形态影响倒置显微镜下可见,与正常对照组相比顺铂和联合用药组SKOV3细胞体积变小、变圆,细胞形态发生改变,细胞间连接疏松,贴壁能力减弱,生长能力明显受抑制。3.去甲斑蝥素联合顺铂诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡流式细胞术结果显示,去甲斑蝥素与顺铂联合用药组的SKOV3细胞凋亡率明显升高,特别是在早期凋亡中,去甲斑蝥素能明显促进顺铂诱导的SKOV3细胞凋亡。4.荧光显微镜观察细胞线粒体形态变化和分布用Mito-Tracker Green特异性标记SKOV3细胞线粒体,在荧光显微镜下观察到,与正常对照组相比,去甲斑蝥素与顺铂联合用药组SKOV3细胞中线粒体结构模糊不清,且聚集于核周的线粒体数量明显增加。5.去甲斑蝥素与顺铂联合用药对SKOV3细胞中procaspase-3蛋白表达的影响免疫印迹结果显示,用药后各组SKOV3细胞中procaspase-3蛋白表达水平发生了明显改变。去甲斑蝥素与顺铂组中procaspase-3蛋白表达呈不同程度的下降,去甲斑蝥素与顺铂联合用药组procaspase-3蛋白表达水平明显下降。结论:1.去甲斑蝥素可有效抑制SKOV3细胞生长,改变细胞形态。2.去甲斑蝥素可通过升高细胞内ROS的含量诱导SKOV3细胞凋亡和G2/M期细胞周期阻滞。3.去甲斑蝥素能明显促进顺铂诱导SKOV3细胞凋亡的作用。4.去甲斑蝥素与顺铂联合用药能明显改变SKOV3细胞形态和细胞内线粒体形态。5.去甲斑蝥素与顺铂联合用药能显著降低SKOV3细胞内procaspase-3蛋白的表达。