由于人食管下括约肌(LES)解剖结构和生理功能的复杂性，LES的调节机制一直是困扰学术界的难题。 本实验究采用人的食管胃连接部和LES肌束为实验对象，应用内窥镜技术、电镜技术、免疫组织化学技术、分子生物学技术等，除了对食管胃连接部解剖学和组织学进行研究外，重点对LES两束钩状纤维和套索纤维的神经递质受体分布和活性的差异进行初步研究，从而为LES功能研究、胃食管反流病和食管功能障碍性疾病的治疗打下基础。 本研究内容和结果如下：第一部分食管胃连接部和食管下括约肌的解剖学、组织学研究目的：研究食管胃连接部和食管下括约肌的解剖学、组织学特点，为食管下括约肌的抗返流机制提供形态学基础。 方法：1对30例正常食管胃连接部进行胃镜观察，同时胃镜观察返流性食管炎、食管裂孔疝患者各5例。 2在10具尸体上，对食管胃连接部进行解剖学观察，观察食管腹段长度、食管胃粘膜线(Z线)的位置和形态、食管和胃底的夹角(His角)、膈食管裂孔的解剖特点。 3在手术标本上观测各段食管肌层的厚度差异以及食管下括约肌纤维形态特征。 4显微镜下观察Z线上下食管粘膜和胃粘膜的上皮类型、食管下括约肌的细胞形状、细胞排列状况、胞浆是否丰富、细胞核的形状和染色状况；电镜下观察LES细胞的超微结构。 结果：1胃镜下观测结果1.1正常食管胃连接部：30例胃镜观测显示食管胃粘膜线呈齿状或环状，粘膜界限清楚，其中呈齿状的21例，呈环状的9例。A环位于食管下端距贲门口约2cm处，它收缩频繁，锐利而有力；膈壶腹(ampulla)是A环和膈裂孔之间一膨大部分，长约1.5～2cm，形态变化很大。 2尸体解剖的观测结果2.1食管胃粘膜线两侧粘膜颜色对比明显，食管粘膜呈灰白色，胃粘膜呈暗红色，粘膜线上方的食管粘膜有数条纵性皱襞，下方的胃粘膜皱襞里放射状或横行排列。食管胃粘膜线多位于膈与贲门口平面之间的达80％，距贲门口平面1.6±0.9cm。 3新鲜标本的观测结果3.1不同部位食管肌层厚度的测量：食管下段距贲门口4cm一段管壁肌层厚度较食管上、中段的肌层厚度明显蹭厚，而且差异非常显著(P＜0.05)。 4显微镜下观测结果4.1食管胃粘膜线的观察：食管胃粘膜线上下的食管粘膜上皮和胃粘膜上皮分别为扁复层鳞状上皮和单层柱状上皮。 5电子显微镜下观测结果5.1扫描电镜下的观察：食管体部肌纤维的表面比较平滑，LES肌纤维表现隆起外突，使得LES肌束外观上显得比食管体部的肌束更粗大。 结论：1食管胃粘膜线与贲门口不处于同一平面，高于贲门口水平1.6±0.9cm。。 2食管上、中段与距贲门口4cm以内的下段食管肌层厚度差异非常显著，距贲门口4cm范围内的食管肌层明显厚于食管上、中段的食管肌层。 3套索纤维和钩状纤维细胞浆内有较多的粗面内质网和线立体，表明其能量代谢率高于其它食管肌细胞。 第二部分人食管下括约肌M2、M3受体和D4、D5受体的免疫组化研究目的：探寻人食管下括约肌的多巴胺和乙酰胆碱受体的表达和分布的情况，揭示食管下括约肌的抗返流功能的内在机制。 方法：应用免疫组化的方法，研究钩状纤维和套索纤维以及食管环形肌、胃底环形肌、食管粘膜、胃粘膜的M2、M3和D4、D5分布与表达。表达程度的判定标准按Shimizu法，用卡方检验对数据进行统计学处理。 结果：1M2和M3的表达情况在25例食管粘膜、胃粘膜中，M2、M3均呈低表达；M2、M3在食管和胃粘膜中的表达无显著差异； 结论：在钩状纤维、套索纤维中，存在M2、M3受体和D4、D5受体，其中M2、M3均高表达；D4、D5均低表达。 第三部分应用RT-PCR方法检测人食管下括约肌M2、M3受体和D4、D5受体的基因表达目的：探寻人食管下括约肌的多巴胺和胆碱能受体基因表达和分布的情况，从分子水平揭示食管下括约肌的抗返流机制。 方法：应用逆转录多聚酶链反应方法(RT-PCR)，研究钩状纤维和套索纤维的M2mRNA、M3mRNA和D4mRNA、D5mRNA分布与表达。 通过凝胶成像分析系统照相并对图象进行分析，待测受体基因的表达水平以待测受体基因灰度值与内参灰度值的比值表示。用方差分析和t检验对数据进行统计学处理。 结果：1M2mRNA和M3mRNA的表达情况在25例食管粘膜、胃粘膜中，M2mRNA和M3mRNA的表达水平均呈低表达，二者无显著性差异；在25例食管环行肌、胃底环行肌、钩状纤维、套索纤维中，M2mRNA的表达水平分别为0.394±0.054，0.398±0.047，0.411±0.023，0.409±0.044，四者均高表达，且四者间无显著性差异；在25例食管环行肌、胃底环行肌、钩状纤维、套索纤维中，M3mRNA的表达水平分别为0.133±0.043，0.136±0.075，0.141±0.016，0.145±0.023，四者均高表达，且四者间无显著性差异。在以上四种肌组织中，M2mRNA表达明显高于M3mRNA，二者有显著差异(P＜0.01)；M2、M3在食管粘膜、胃粘膜的表达明显低于在后四种肌组织中的表达，有显著性差异(P＜0.01)。 结论：在钩状纤维、套索纤维中，存在丰富的M2AchR、M3AchR，同时也存在着D4DR、D5DR。在平滑肌的运动功能上，与M3AchR相比，M2AchR处于优势。 结论1食管上、中段与距贲门口4cm以内的下段食管.壁肌层厚度差异非常显著，距贲门口4cm范围内的食管壁肌层明显厚于食管上、中段的食管壁肌层。 2在LES肌细胞中，可见大量粗面内质网和线粒体，提示LES肌细胞中能量代谢较高。 3LES肌细胞中存在M2，M3，D4和D5，而且M2和M3广泛分布。