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目的:为了克服阿霉素(ADM)明显的全身毒性作用、提高三氧化二砷(As2O3)疗效、寻找治疗非霍奇金淋巴瘤的有效方法,提出一种新型磁靶向联合药物——共载ADM和As2O3的磁性纳米二巯基丁二酸修饰的四氧化三铁磁性纳米颗粒(DMSA-Fe3O4 MNPs)ADM-As2O3 MNPs,既能提高治疗靶向性、增加靶部位药物浓度,又能实现两种药物协同作用增强疗效减低毒副作用,为治疗血液系统疾病的效果提供体外实验基础和理论依据。 方法:以B细胞淋巴瘤细胞株Raji和T细胞淋巴瘤细胞株Jurkat为研究对象,应用ADM、As2O3、 ADM联合As2O3及ADM-As2O3 MNPs处理上述细胞,观察不同处理方法下细胞的生长状况,高分辨透射电镜检测纳米颗粒在细胞中的定位和对细胞形态结构的影响,以MTT法测定细胞存活率,流式细胞技术检测细胞凋亡率和细胞内ADM的累积量,荧光显微镜检测细胞凋亡形态,RT-PCR和Western blotting分析检测相关mRNA和蛋白的变化,探讨ADM联合As2O3是否具有协同作用、磁性纳米颗粒能否增强其协同作用、两种不同来源的细胞对药物的疗效是否存在区别,并试图阐明其中的可能机制。 结果:1、对B细胞淋巴瘤细胞株Raji作用48 h时,ADM和As2O3对细胞的抑制作用均随着浓度的增加而增强,空白MNPs对细胞无明显抑制作用直到浓度高至80 mg/L时抑制率达20%以上,ADM联合As2O3在有或无MNPs的情况下抑制率均明显高于任何药物单用时的抑制率,ADM-As2O3 MNPs的抑制作用又比ADM联合As2O3明显;DMSA-Fe3O4呈类球形结构,平均直径约为18nm,镜下视野内分散性良好,MNPs作用细胞48 h后定位于细胞质的内涵体中;ADM+As2O3组(21.35±1.29)%和ADM-As2O3 MNPs组(28.67±1.26)%的细胞早期凋亡率与对照组和单药组相比显著提高,ADM-As2O3 MNPs组又高于ADM+As2O3组,DMSA-Fe3O4 MNPs组和对照组无明显差异;ADM-As2O3 MNPs能显著提高细胞内的ADM浓度,ADM组(RFI6.2±0.2)与ADM+As2O3组(RFI6.33±0.28)的细胞内累积的ADM类似,ADM-As2O3 MNPs组(RFI8.36±0.21)细胞内的ADM浓度高于其他组;ADM组、As2O3组、ADM+As2O3组及ADM-As2O3 MNPs组的细胞都呈现不同程度的凋亡细胞核典型特征,ADM-As2O3 MNPs组的较其他组更为明显;ADM+As2O3及ADM-As2O3 MNPs使bcl-2、NFκB和survivin的mRNA和蛋白表达下调、bax、P53和caspase3的mRNA和蛋白表达上调,而ADM-As2O3 MNPs的调节幅度最大。 2、对于T细胞淋巴瘤细胞株Jurkat,各实验组处理得到的结果与Raji细胞生长趋势一样,但敏感性有所区别:当ADM浓度≥1 mg/L时,ADM对Jurkat细胞的抑制作用更快更高,而ADM低浓度时对Raji细胞的毒性较明显,As2O3浓度为4μM和16μM、作用48 h时对两种细胞的抑制率无明显差别,而在作用24 h、48 h、72 h时、其他各浓度As2O3对Jurkat细胞的抑制作用均高于Raji细胞,当DMSA-Fe3O4 MNPs为80 mg/L时,对Jurkat细胞较Raji细胞抑制作用更明显,0.25 mg/L ADM+0.5μM As2O3和0.5 mg/L ADM+1μM As2O3作用Jurkat细胞和Raji细胞48 h,对Jurkat细胞的生长抑制率与单药组比较抑制率均增加、有显著差异,对Raji细胞的生长抑制率0.25 mg/L ADM+0.5μM As2O3较其ADM单药组抑制率未见显著增加,0.5 mg/L ADM+1μM As2O3较其单药组有显著差异,0.25 mg/L ADM-0.5 MAs2O340mg/L MNPs和0.5 mg/L ADM-1μM As2O340mg/L MNPs作用Jurkat细胞和Raji细胞48 h,对Raji细胞和Jurkat细胞的生长抑制率与ADM+As2O3组比较均显著增加,并且Jurkat细胞在与Raji细胞同样配比浓度处理条件下,得到更高的细胞细胞抑制作用;Jurkat细胞各实验组得到更高的细胞早期凋亡率;Jurkat细胞各实验组细胞内显示更高的ADM浓度;bcl-2、survivin、bax的mRNA在Jurkat细胞中比在Raji细胞中表达水平高,NFκB、P53的mRNA在Raji细胞比在Jurkat细胞中表达水平高,caspase3 mRNA在两种细胞中表达水平无显著差别,bax、P53、caspase3的蛋白在Jurkat细胞中比在Raji细胞中表达水平高,NFκB、survivin的蛋白在Raji细胞比在Jurkat细胞中表达水平高,而bcl-2蛋白在两种细胞中表达水平无显著差别,ADM-As2O3 MNPs能显著下调两种细胞bcl-2、NFκB、survivin和上调bax、P53、caspase3的mRNA和蛋白水平,对Jurkat细胞的bax、P53、caspase3蛋白上调率较Raji细胞低。 结论:1、ADM和As2O3能发挥协同作用增强对淋巴瘤细胞株Raji和Jurkat的细胞毒作用,通过下调bcl-2、NFκB、survivin的基因转录和蛋白表达、上调bax、P53、caspase3的基因转录和蛋白表达,增强细胞凋亡诱导作用。 2、ADM-As2O3 MNPs对淋巴瘤细胞株Raji和Jurkat的细胞毒和诱导凋亡作用较ADM联合As2O3更强,磁性纳米DMSA-Fe3O4可通过增加细胞内的药物浓度提高两药联合作用。 3、Raji细胞和Jurkat细胞对于药物联合作用的敏感性稍有差别,但总体作用疗效趋势一致。 4、ADM-As2O3 MNPs是一种有潜力作为治疗淋巴瘤或甚至其他恶性肿瘤的新型磁靶向性药物。