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目的:1.通过比较糖尿病足(diabetic foot,DF)患者创面感染铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)及感染控制期创面组织中自噬相关蛋白表达差异,探究PA对自噬的影响。2.研究感染多重耐药铜绿假单胞菌(Multi-drug resistant pseudomonas aeruginosa,MDRPA)以及合并缺血对自噬的影响。3.PA的Ⅲ型分泌系统(typeⅢsecretion system,T3SS)分泌不同毒力蛋白对自噬的影响。方法:1.收集2016年3月-2017年2月于天津医科大学代谢病医院糖尿病足科住院治疗的24例DF感染PA患者的临床资料;根据是否感染MDRPA分为两组,根据是否缺血分为两组,标准化治疗感染控制前后分为感染期和感染控制期。2.所有纳入患者创面清创后深部取材,并将所取组织分为3部分。一部分用于细菌培养及药敏试验、创面菌落计数并冻存菌株,通过PCR鉴定PA的T3SS所携带的毒力基因。一部分用于制作石蜡切片:HE染色观察患者创面组织病理学改变;免疫组织化学染色,半定量检测患者创面组织内细胞自噬相关蛋白LC3(Microtubule-associated protein1 light chain 3)、Beclin-1和P62的平均光密度值;免疫荧光双染色,定性检测患者创面组织中巨噬细胞的自噬水平。最后一部分蛋白印迹定量测定LC3-II/I、Beclin-1和P62的蛋白表达量。3.感染控制后同上述方法测量上述指标。结果:1.DF患者感染期与感染控制期比较,感染控制期炎症指标(白细胞计数、中性粒细胞百分比、血沉和超敏C反应蛋白)较感染期下降、创面菌落计数下降、果糖胺下降、创面面积缩小(P<0.05),余一般资料未见差异(P>0.05)。MDRPA组炎症指标(中性粒细胞百分比、血沉和超敏C反应蛋白)以及创面内细菌菌落数较N-MDRPA组高(P<0.05)。缺血组较非缺血组ABI低、创面面积大(P<0.05)。2.与感染期相比,感染控制期创面组织中新生的毛细血管、成纤维细胞较多,炎症细胞较少;免疫组织化学法显示创面组织中LC3和Beclin-1表达较高、P62表达较少(P<0.05);免疫荧光显示芽组织LC3与巨噬细胞标记物CD14 Merge后,巨噬细胞自噬水平较高;蛋白印迹显示LC3-II/I和Beclin-1表达较高、P62表达较低(P<0.05)。与MDRPA组相比,N-MDRPA组炎症细胞浸润较少,创面组织中新生的毛细血管、成纤维细胞相比无明显差异;免疫组织化学法显示LC3的表达较高(P<0.05),Beclin-1和P62表达无统计学意义(P>0.05);免疫荧光显示芽组织LC3与巨噬细胞特异性标记物CD14 Merge后,巨噬细胞自噬水平较高;蛋白印迹法显示创面组织中LC3-II/I表达较高(P<0.05),Beclin-1、P62的表达无统计学意义(P>0.05)。与缺血组相比,非缺血组创面组织中新生的毛细血管、成纤维细胞以及炎症细胞较多;免疫组织化学法显示创面组织中LC3和Beclin-1表达较高、P62表达较低(P<0.05);免疫荧光显示芽组织LC3与巨噬细胞特异性标记物CD14 Merge后,巨噬细胞自噬水平较高;蛋白印迹法显示创面组织中LC3-II/I和Beclin-1表达较高、P62表达较低(P<0.05)。3.感染期real-time PCR检测送检细菌均携带毒力基因exo S。结论:PA感染控制以及代谢紊乱改善后,自噬水平升高,这提示严重的代谢紊乱可能下调自噬,PA可能通过某种机制下调甚至逃避细胞自噬,MDRPA感染时,细胞自噬水平进一步降低,说明MDRPA逃避自噬的能力可能更强。合并缺血的DFI自噬水平进一步降低,适度诱导自噬或许可以作为治疗DF合并PA感染的新手段。