我国五大作物之一——大豆,是一种重要的油料作物,也是植物蛋白和油脂的重要来源。大豆的种质资源丰富,但却是公认的最难以转化的作物之一,具有难以再生、基因型特异性强、转化率低、重复性差等特点。大豆子叶节、胚轴等转化体系再生的植株大多都是嵌合体,原生质体作为转化的受体,为大豆基因组学的研究提供了一种可替代的方法。通过原生质体技术不仅能创造新的种质资源,而且在大豆基因组高通量和蛋白质功能组学的研究中具有重要作用。本实验以交大133大豆品种为材料诱导愈伤制备原生质体,开展了以下方面的研究:（1）愈伤原生质体制备体系的建立;（2）原生质体培养体系的建立;（3）原生质体瞬时转化体系的建立。主要研究结果如下:1.愈伤原生质体的分离以大豆品种“交大133”未成熟胚诱导产生的胚性愈伤组织为试验材料,酶解法制备原生质体。探究影响原生质体释放的因素:胚性愈伤组织继代次数、酶解液配比及浓度、酶解时间、渗透压。结果表明:仅继代一次的胚性愈伤组织所制备的原生质体产量最高;经过L16（4^3）的正交方差分析,纤维素酶和离析酶对原生质体产量有显著影响,游离愈伤组织原生质体的最佳酶解液组分为:纤维素酶2.0%+果胶酶0.1%+离析酶1%,最佳酶解时间为5 h,最适甘露醇浓度介于0.5 M-0.6 M之间,最终原生质体产量为4.02×10~6个/g,活力高达90%。2.愈伤原生质体的培养以胚性愈伤组织制备的原生质体为试验材料,研究培养方式、培养密度、激素配比对原生质体生长的影响。结果显示:在固体琼脂液滴和液体培养两种方式下,原生质体在固体培养基中生长更快,适宜的培养密度为2.5×10~5个/m L,激素组合为2,4-D 0.2 mg/L+NAA 1.0mg/L+ZT 0.5 mg/L时分离效果最佳,培养48 h后可观察到第1次分裂;1周后少数细胞发生二次分裂,此时细胞植板率30-40%,而液体培养的植板率为20-30%;在固体培养方式下,不到一个月便后可观察到小细胞团形成,原生质体在液体培养方式下仍保持二分裂或小细胞团的状态。3.PEG介导的原生质体转化以胚性愈伤组织制备的原生质体为试验材料,用YFP作为报告基因,探究在PEG介导的转化体系中PEG浓度、质粒浓度和转化时间等因素对转化效率的影响,结果表明:PEG4000浓度为30%,质粒浓度为1.5μg/μL,处理时间10分钟转化效率最高,达到20%。初步建立起了大豆愈伤原生质体的瞬时转化体系。