【摘 要】
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2012年至今,流行病学调查发现毕节、江口等地的昆明裂腹鱼先后发生一种以背鳍前后出现皮肤破裂、肌肉溃烂为特征的疾病,根据发病特征,称为“溃疡病”。然而,导致昆明裂腹鱼“溃疡病”的致病菌尚未明确,中草药对该菌的防治效果至今尚不清楚。因此,本研究在无菌条件下从患病昆明裂腹鱼体表溃烂处、肝脏与肾脏组织中分离、纯化病菌,采用形态学观察、生理生化特性鉴定及16S r DNA、dna J、cpn60等基因的序
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2012年至今,流行病学调查发现毕节、江口等地的昆明裂腹鱼先后发生一种以背鳍前后出现皮肤破裂、肌肉溃烂为特征的疾病,根据发病特征,称为“溃疡病”。然而,导致昆明裂腹鱼“溃疡病”的致病菌尚未明确,中草药对该菌的防治效果至今尚不清楚。因此,本研究在无菌条件下从患病昆明裂腹鱼体表溃烂处、肝脏与肾脏组织中分离、纯化病菌,采用形态学观察、生理生化特性鉴定及16S r DNA、dna J、cpn60等基因的序列分析进行细菌种类鉴定,通过回归感染确定致病性,以K-B纸片扩散法进行抗生素药敏试验。此外,通过煎煮法制备31种常见中草药水提取物,以牛津杯法测定各味中草药对该菌的抑菌圈直径,采用二倍稀释法测定最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）。最后,选取体外抗菌活性较好的6种中草药,应用棋盘法进行15组二联药方的分级抑菌浓度（FIC）试验,按正交设计表配伍25组复方,进行药敏试验。结果显示:1.自患病昆明裂腹鱼分离纯化获得形态大小均一的细菌菌落,随机选取肾脏分离细菌（BL61C）作为试验菌;形态学观察、生理生化特性鉴定及基因序列分析结果显示菌株BL61C为维氏气单胞菌（Aeromonas veronii）;健康昆明裂腹鱼回归感染BL61C后的发病特征与自然病例一致,并从组织中再次分离到同种细菌,表明维氏气单胞菌BL61C是引起本次昆明裂腹鱼溃疡病的致病菌,半数致死浓度(LC50)为5.09×10~7CFU/m L;药敏试验结果表明分离菌对大观霉素、阿奇霉素、氧氟沙星等8种药物敏感,对克拉霉素、制霉菌素、四环素等20种药物耐药。2.从31种中草药中,筛选获得五倍子、地榆、诃子、苏木、黄芩和黄连等6种抑菌效果良好的中草药。3.15组联用药方均未发生拮抗作用,其中以五倍子+地榆、诃子+黄芩联用效果最好,FIC分别为0.31、0.50,表现为协同作用。综合复方中草药的抑菌作用,复方F16（五倍子;地榆:诃子:苏木:黄芩:黄连=4:4:2:5:3:1）的抑菌圈直径达23.2 mm,MIC与MBC分别为0.98mg/m L、1.95 mg/m L,抑菌效果最佳。本研究首次确定贵州省毕节地区昆明裂腹鱼溃疡病的致病菌为维氏气单胞菌,初步筛选到对分离菌A.veronii体外抑制效果较好的6种中草药为五倍子、地榆、诃子、苏木、黄芩、黄连,以及复方中草药五倍子、地榆:诃子:苏木:黄芩:黄连=4:4:2:5:3:1的组合。以上结果对昆明裂腹鱼溃疡病防治提供科学依据和参考,为中草药抑杀细菌和渔业化运用提供理论基础。
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