目前的研究表明，内皮细胞的损伤与多种血管性疾病有着密切的联系，改善内皮细胞的功能，保护内皮细胞免受损伤，是预防和治疗血管性疾病的一个重要手段。本实验对内皮细胞的损伤机制、保护药物的筛选及总丹酚酸、EGb 761和硫酸多糖916对内皮细胞损伤的保护作用等三个方面进行了研究。 第一部分：内皮细胞损伤的机制研究 A：用Griess试剂来测定细胞因子和过氧化氢诱导ECV304细胞产生的一氧化氮，结果表明，IL-1β和TNFα与ECV304细胞孵育18小时后，降低NO的产生，但0.1mM的H₂O₂却增加NO的生成。B：通过髓过氧化物酶的活性来测定中性粒细胞与内皮细胞的粘附；用ELISA法测定内皮细胞粘附分子的表达；用N-甲酰甲硫亮氨酰苯丙氨酸（fMLP）激活中性粒细胞，用硝基蓝四唑（NBT）还原法测定中性粒细胞的激活率，观察TNFα和fMLP对中性粒细胞-内皮细胞粘附的影响。结果表明，TNFα剂量和时间依赖性地增加中性粒细胞与内皮细胞的粘附作用。FMLP也剂量依赖性地激活中性粒细胞，增加中性粒细胞对内皮细胞的粘附。同时TNFα还显著上调内皮细胞粘附分子ICAM-1、VCAM-1和E-selectin的表达。应用PKC抑制BIM和PTK抑制剂GS的研究表明，BIM抑制TNFα对ICAM-1和VCAM-1的上调作用，而不影响TNFα诱导的粘附分子E-selectin的表达，但PTK抑制剂GS只降低E-selectin和VCAM-1的表达，而对ICAM-1的表达无明显影响。C：观察了H₂O₂对内皮细胞的损伤作用。用MTT法测定细胞的存活率；用PI染色和TUNEL测定H₂O₂诱导的内皮细胞的凋亡；用Fura-2／AM测定内皮细胞内游离钙的浓度；用荧光法测定caspase-3的活性。结果表明，H₂O₂显著降低内皮细胞的存活率，升高细胞内游离Ca²⁺的浓度，增强caspase-3的活性，诱导内皮细胞发生凋亡作用。D：研究了氧化型胆固醇chol-triol对内皮细胞的损伤作用。用MTT法测定了细胞的存活率，用PI染色和TUNEL测定了chol-triol诱导的内皮细胞的凋亡作用及用TBA法观察了氧化型胆固醇诱导内皮细胞产生的MDA。结果显示，氧化型胆固醇chol-triol显著降低内皮细胞的存活率，增加MDA的产生，引起细胞发生凋亡作用。E：观察了脂多糖刺激血管平滑肌细胞产生的NO对内皮细胞的毒性作用。结果表明，除去LPS刺激的血管平滑肌细胞仍然持续产生NO，产生的NO对内皮细胞具有毒性作用。NOS抑制剂L-NNA显著增加细胞的存活率。以上的研究结果提示，细胞因子和氧