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本试验根据Genbank发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5基因、ORF7基因和结核分枝杆菌Hsp70基因设计合成特异性引物,以本实验室保存的PRRSV-SCQ株提取其总RNA为模板,RT-PCR扩增出369bp的目的片段ORF7A(含终止子)和ORF7B,并克隆到pMD19-T载体中；以本实验室构建的pMD18-T-ORF5和pMD18-T-Hsp70为模板,PCR扩增出516bp和1878bp的目的片段ORF5和Hsp70,其分别克隆到pMD19-T上；扩增PRRSV-SCQ株ORF7A和ORF7B基因分别插入pMD19-T-ORF5中,得到T-ORF5-ORF7A和T-ORF5-ORF7B。将两者克隆到pCI-neo上,获得pCI-ORF5-ORF7A和pCI-ORF5-ORF7B;再将Hsp70插入pCI-ORF5-ORF7B,构建出重组质粒pCI-ORF5-ORF7B-Hsp70。将pCI-ORF5-ORF7B-Hsp70 DNA疫苗免疫健康小白鼠,同时设立pCI-ORF5-ORF7A DNA、pCI-neo DNA、PRRS弱毒疫苗、生理盐水4个对照组,断尾采血并检测ORF5、ORF7和Hsp70的mRNA转录、蛋白表达、细胞因子IFN-Y和IL-4水平以及T淋巴细胞亚群变化。结果显示如下：1、通过质粒的重复测序表明,本研究成功构建了重组质粒pCI-ORF5-ORF7A和pCI-ORF5-ORF7B-Hsp70.2、真核重组表达质粒pCI-ORF5-ORF7A和pCI-ORF5-ORF7B-Hsp70分别接种小鼠14d后,在小鼠外周血(经DNase处理)中均能检测到ORF5和ORF7基因的mRNA;在接种过pCI-ORF5-ORF7B-Hsp70的小鼠外周血(经DNase处理)中可扩增出Hsp70基因的mRNA,表明重组DNA在小鼠体内得到了有效转录。3、重组质粒PCI-ORF5-ORF7B-Hsp70免疫小鼠后,14d、21d、28d、35d、42d时,用ELISA试剂盒检测血清中PRRSV特异性抗体水平,该组抗体水平高于pCI-ORF5-ORF7A组和PRRS弱毒疫苗组,其28d抗体水平(OD630值为0.875)达到峰值,42d抗体水平(OD630值为0.782)有所回落；极显著大于pCI-ORF5-ORF7A组,显著(p<0.05)大于PRRS弱毒疫苗组。4、使用ELISA试剂盒在35d时检测IFN-γ和IL-4,pCI-ORF5-ORF7B-Hsp70组的IFN-γ(196.35pg/mL)和IL-4(53.27pg/mL)分泌水平最高；极显著(p<0.01)大于pCI-ORF5-ORF7A组；显著(p<0.05)大于PRRS弱毒疫苗组；而pCI-neo组和生理盐水组分泌IFN-γ和IL-4水平均很低。5、使用流式细胞仪检测小鼠外周血T淋巴细胞亚群：pCI-ORF5-ORF7B-Hsp70组的小鼠外周血T细胞CD3+水平(78.39%)最高,极显著(p<0.01)大于pCI-ORF5-ORF7A组和PRRS弱毒疫苗组；CD4+水平(51.72%)同样最高,极显著(p<0.01)大于pCI-ORF5-ORF7A组,显著(p<0.05)大于PRRS弱毒疫苗组；CD8+水平(24.66%)与对照组相比无明显差异(p>0.05)；CD4+／CD8+比值最高,但与对照组相比差异不显著(p>0.05)。本研究所构建的以Hsp70为分子佐剂的PRRSV-ORF5-ORF7核酸疫苗能够诱导小鼠产生较好的免疫应答,为PRRS新型核酸疫苗的进一步研究提供了参考数据。