【摘 要】
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目的:内毒素耐受和缺氧是脓毒症发生时机体生理异常的两种常见现象,两者往往同时存在,影响机体的免疫功能。HIF-1α是内毒素和缺氧环境激活的缺氧诱导因子（HIF）家族中的一种。本研究通过探究缺氧环境对发生内毒素耐受的THP-1细胞分泌功能、吞噬功能及抗原提呈功能的影响,以及HIF-1α mRNA的表达水平,旨在探讨缺氧如何影响发生内毒素耐的THP-1细胞的免疫功能及可能的分子机制。方法:1.通过建立
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目的:内毒素耐受和缺氧是脓毒症发生时机体生理异常的两种常见现象,两者往往同时存在,影响机体的免疫功能。HIF-1α是内毒素和缺氧环境激活的缺氧诱导因子（HIF）家族中的一种。本研究通过探究缺氧环境对发生内毒素耐受的THP-1细胞分泌功能、吞噬功能及抗原提呈功能的影响,以及HIF-1α mRNA的表达水平,旨在探讨缺氧如何影响发生内毒素耐的THP-1细胞的免疫功能及可能的分子机制。方法:1.通过建立人单核巨噬细胞系THP-1细胞的内毒素耐受模型、模拟缺氧环境,将实验细胞分为对照组（Control）、CoCl2处理组（CoCl2）、LPS处理组（LPS）、LPS和CoCl2共处理组（LPS+CoCl2）。收集细胞总RNA,qPCR法检测il-1β、il-12的转录水平。收集细胞上清液,ELISA法检测细胞因子IL-1β、IL-12的分泌水平。2.通过建立人单核巨噬细胞系THP-1细胞的内毒素耐受模型、模拟缺氧环境,将实验细胞分为对照组（Control）、CoCl2处理组（CoCl2）、LPS处理组（LPS）、LPS和CoCl2共处理组（LPS+CoCl2）。收集细胞总RNA,qPCR法检测il-10、tgf-β1的转录水平。收集细胞上清液,ELISA法检测细胞因子IL-10、TGF-β 1的分泌水平。3.通过建立人单核巨噬细胞系THP-1细胞的内毒素耐受模型、模拟缺氧环境,将实验细胞分为对照组（Control）、CoCl2处理组（CoCl2）、LPS处理组（LPS）、LPS 和CoCl2共处理组（LPS+CoCl2）。Western Blot 实验检测细胞 CD80、CD40蛋白表达水平。收集细胞总RNA,qPCR法检测cd80、cd40的转录水平。4.通过建立人单核巨噬细胞系THP-1细胞的内毒素耐受模型、模拟缺氧环境,将实验细胞分为对照组（Control）、CoCl2处理组（CoCl2）、LPS处理组（LPS）、LPS和CoCl2共处理组（LPS+CoCl2）。收集细胞总RNA,qPCR法检测marco的转录水平。Western Blot实验检测细胞MARCO蛋白表达水平。5.通过建立人单核巨噬细胞系THP-1细胞的内毒素耐受模型、模拟缺氧环境,将实验细胞分为对照组（Control）、CoCl2处理组（CoCl2）、LPS处理组（LPS）、LPS和CoCl2共处理组（LPS+CoCl2）。收集细胞总RNA,qPCR法检测hif-1α的转录水平。收集细胞总蛋白,Western Blot实验检测细胞因子HIF-1α的表达水平。结果:1.qPCR结果显示,缺氧可以上调发生内毒素耐受的细胞中促炎因子il-1β、il-12的转录水平。ELISA结果显示,缺氧能够促进发生内毒素耐受的细胞中促炎因子IL-1 β、IL-12 分泌。2.qPCR结果显示,缺氧可以下调发生内毒素耐受的细胞中抑炎因子il-10、tgf-β1的转录水平。ELISA结果显示,缺氧能够抑制发生内毒素耐受的细胞中抑炎因子 IL-10、TGF-β 1 分泌。3.Western Blot结果显示,缺氧可以促进发生内毒素耐受的细胞中CD80、CD40蛋白表达。qPCR结果显示,缺氧可以上调发生内毒素耐受的细胞中cd80,cd40的转录水平。4.Western Blot结果显示,缺氧抑制发生内毒素耐受的细胞中MARCO蛋白表达。qPCR结果显示,缺氧可以下调发生内毒素耐受的细胞中marco的转录水平。5.qPCR结果显示,缺氧不影响细胞hif-1α的转录水平,而发生内毒素耐受的细胞中hit-1α的转录水平明显上调。Western.Blot结果显示发生内毒素耐受的细胞中HIF-1α表达明显增加。结论:1.缺氧可以促进发生内毒素耐受的THP-1细胞中促炎因子的基因转录和分泌。2.缺氧可以抑制发生内毒素耐受的THP-1细胞中抑炎因子的基因转录和分泌。3.缺氧可以促进发生内毒素耐受的THP-1细胞中表面共刺激分子表达。4.缺氧可以抑制发生内毒素耐受的THP-1细胞中MARCO表达。5.缺氧可以促进THP-1细胞HIF-1α蛋白表达,而不影响基因转录;发生内毒素耐受的THP-1细胞中HIF-1α的基因转录和蛋白表达水平增高。
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