【摘 要】
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旋毛虫是一种在世界范围内广泛分布的线虫,寄生于宿主可引起严重的疾病甚至死亡。当前对旋毛虫的研究大多集中在其排泄分泌物上,具有免疫原性的排泄分泌物能够使宿主的免疫保护加强,从而具有开发成疫苗的潜在价值。旋毛虫表达的巨噬细胞迁移抑制因子（TsMIF）是一种分泌蛋白,其在炎症、肿瘤和抗寄生虫感染等方面的中枢调节作用使其具有较深的探究价值。我们从旋毛虫中获得TsMIF基因,通过LIC连接方式构建了 TsM
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旋毛虫是一种在世界范围内广泛分布的线虫,寄生于宿主可引起严重的疾病甚至死亡。当前对旋毛虫的研究大多集中在其排泄分泌物上,具有免疫原性的排泄分泌物能够使宿主的免疫保护加强,从而具有开发成疫苗的潜在价值。旋毛虫表达的巨噬细胞迁移抑制因子（TsMIF）是一种分泌蛋白,其在炎症、肿瘤和抗寄生虫感染等方面的中枢调节作用使其具有较深的探究价值。我们从旋毛虫中获得TsMIF基因,通过LIC连接方式构建了 TsMIF-pET 22b重组质粒并将其转入BL21原核表达系统,利用IPTG诱导His-TsMIF融合蛋白的高量表达。通过Ni-NTA树脂纯化,获得大量TsMIF纯化蛋白,将其免疫小鼠,获得特异性抗血清后,通过Western-Blot验证了抗血清效果。我们通过Western-Blot、抗体纯化和Dot-Blot检测了被感染小鼠血清的大致成分及其抗旋毛虫全虫效价,结果发现不同时期旋毛虫表达的蛋白无显著差别,且被感染宿主血清成分也大致相同。进一步的HE染色实验证实了旋毛虫感染会引起宿主明显的免疫应答;我们通过抗体染色和免疫组化实验,证实了 TsMIF的表达贯穿了旋毛虫整个生活史,且在肌肉幼虫时期TsMIF能够少量分泌作用于宿主。为了进一步探究TsMIF的潜在价值,我们构建了 hCD74-pGEX 4T和hJAB1-pGEX 4T重组质粒,利用GST Beads纯化了它们在BL21中表达的融合蛋白。通过SDS-PAGE和Western-Blot检测我们证实了在体外条件下TsMIF与hCD74和hJAB1能够发生CO-IP。为进一步扩展该实验结果,我们另外设计实验探究在MIF特异性抑制剂ISO-1的作用下上述CO-IP作用,发现ISO-1能够抑制其作用。TsMIF与hCD74和hJAB1的相互关系,更能说明TsMIF可能是旋毛虫引起宿主抗肿瘤能力增强的原因,这为将TsMIF运用于人类抗肿瘤疾病的治疗打下了一定的理论基础。
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