【摘 要】
：
目的:本实验选用斑马鱼作为实验模型,研究组蛋白H3K27去甲基化酶Kdm6b在斑马鱼胚胎早期发育过程中的表达模式及作用,并进一步对相关机制研究进行研究。方法:1.Kdm6b在斑马鱼胚胎发育早期的时空表达:用整体胚胎原位杂交方法检测kdm6bb在16细胞期到48hpf斑马鱼胚胎中表达并找出其表达模式。2.建立斑马鱼Kdm6b基因敲降模型及表型分析:用吗啡啉反义寡核苷酸技术干扰kdm6bb基因的表达,
论文部分内容阅读
目的:本实验选用斑马鱼作为实验模型,研究组蛋白H3K27去甲基化酶Kdm6b在斑马鱼胚胎早期发育过程中的表达模式及作用,并进一步对相关机制研究进行研究。方法:1.Kdm6b在斑马鱼胚胎发育早期的时空表达:用整体胚胎原位杂交方法检测kdm6bb在16细胞期到48hpf斑马鱼胚胎中表达并找出其表达模式。2.建立斑马鱼Kdm6b基因敲降模型及表型分析:用吗啡啉反义寡核苷酸技术干扰kdm6bb基因的表达,通过Western blot实验来检测kdm6bb基因敲降后相关蛋白的表达水平变化;观察48hpf斑马鱼胚胎躯干神经丘数量的改变,而m RNA介导的挽救实验可部分恢复神经丘数量;最后通过免疫组织化学染色观察kdm6bb基因敲降对后部侧线系统原基的形态和细胞增殖的情况。3.Kdm6b调控斑马鱼胚胎后部侧线系统发育的机制研究:用整体原位杂交技术检测kdm6bb基因敲降对cxcl12acxcr7b/cxcr4b趋化因子通路、Wnt/β-catenin信号通路相关基因和Fgf信号通路相关基因表达水平的影响;再通过q PCR对原位杂交结果进行验证。结果:1.Kdm6b在斑马鱼胚胎发育早期的时空表达:在16细胞期,kdm6bb在卵裂球中有表达;在3.7hpf时,检测到kdm6bb在胚盘中表达;在25-32hpf时,kdm6bb在后侧线原基中表达显著;发育至48hpf时,kdm6bb染色见于后侧线神经丘,主要集中在中央毛细胞区。2.建立斑马鱼Kdm6b基因敲降模型及表型分析:用吗啡啉反义寡核苷酸技术建立斑马鱼Kdm6b基因敲降模型,Western Blot实验结果:与注射Con MO的斑马鱼胚胎相比,注射kdm6bb MO后Kdm6b蛋白的表达水平显著降低,H3K27me2和H3K27me3蛋白表达水平升高。观察48hpf斑马鱼胚胎躯干神经丘数量,结果显示:与对照组相比,kdm6bb MO组神经丘数量显著降低,而共同注射kdm6bb MO和kdm6bb m RNA的斑马鱼胚胎的神经丘数量部分恢复。免疫组织化学染色结果显示,与对照组相比,kdm6bb MO斑马鱼胚胎后部侧线系统原基的形态异常以及细胞增殖受抑制。3.Kdm6b调控斑马鱼胚胎后部侧线系统发育的机制研究:后部侧线系统发育相关的趋化因子通路及信号通路基因原位杂交结果显示,与对照组相比,kdm6bb MO组趋化因子基因cxcl12a染色不连续,cxcr4b和cxcr7b表达减弱;Wnt信号通路相关基因axin2、lef1、tcf7l2、ctnnb1和ctnnb2表达上调;Fgf信号通路相关基因fgf3、fgf10、pea3和fgfr1表达减弱。再用q PCR进行验证,Kdm6b敲降后趋化因子、Wnt和Fgf信号通路表达趋势与原位杂交分析结果一致。结论:Kdm6b在斑马鱼胚胎感觉器官早期发育过程中表达,注射kdm6bb MO后的斑马鱼胚胎后部侧线系统原基的形态结构异常和细胞增殖受抑制,其躯干神经丘的数量减少,而m RNA介导的拯救试验可以部分恢复神经丘数量,机制可能与趋化因子、Wnt和Fgf信号通路表达异常有关。
其他文献
目的 建立大鼠动脉螺旋血流的实时荧光成像法。方法 随机将SD大鼠分为静脉造影组（股静脉注射，1 mL/kg）与小剂量动脉造影组（腹主动脉注射，0.1 mL/kg）,其中小剂量动脉造影组又分为荧光素钠组、罗丹明B组、FITC-dextran组和量子点组（每组n=7）。通过体式荧光显微镜实时观察大鼠股动脉血液流动现象，用高速摄像机拍摄动态图像，通过图像阈值分割算法及形态学后处理算法标定荧光区域，测算大
目的:探讨褪黑素（melatonin,MLT）对过氧化氢（H2O2）诱导的MC3T3-E1细胞氧化应激损伤的保护作用机制及其对骨质疏松性骨缺损的作用。方法:1、体外实验:通过使用H2O2构建MC3T3-E1细胞氧化应激损伤模型,并用MLT及EX527（SIRT1抑制剂）进行干预,细胞被分成对照组（Con组）、H2O2组、MLT组、MLT+H2O2组、MLT+EX527组、MLT+H2O2+EX52
目的:神经元凋亡是创伤性脑损伤（Traumatic brain injury,TBI）后二次损伤的重要表现。越来越多的证据表明,钙超载和活性氧是导致TBI后细胞凋亡的重要原因。众所周知,瞬时受体电位锚定蛋白1（Transient receptor potential ankyrin1,TRPA1）可以被活性氧化物质（reactive oxygen species,ROS）激活而允许细胞外钙离子（c
目的:使用网状Meta分析的方法对早产儿动脉导管未闭（PDA）的治疗药物（布洛芬、吲哚美辛、对乙酰氨基酚）的有效性和安全性进行比较和排序,为早产儿PDA的药物治疗提供依据。方法:检索Pub Med、Cochrane Library、Embase、Web of Science,中国生物医学文献数据库、中国期刊全文数据库、万方数据库和维普数据库,以及Clinical Trials和中国临床试验注册中心
目的:通过对监测点空气污染物和气象因素的监测和定量分析芜湖市空气污染物和气象因素对呼吸系统门诊量的影响,掌握芜湖地区空气污染物和气象因素的变化趋势,根据分析结果发现的主要问题,开展针对性健康防护,为政府采取有效干预措施提供科学依据。方法:我们根据就诊日期和户籍住址,获得了2019年1月1日至2021年12月31日期间芜湖市6家医疗机构的医院呼吸系统门诊情况以及检测同时期5个国控环境空气质量监测点的
背景:卵巢癌是全球第三大常见妇科恶性肿瘤,死亡率居于妇科肿瘤的首位。目前关于卵巢癌的治疗方法在不断发展,但当前的治疗策略对患者的预后以及生存未产生明显的改善,主要是与其起病隐匿,极易发生转移,且复发和耐药的风险依旧很大相关。激肽释放酶相关肽11（KLK11）是KLK家族的成员之一,最初是从人海马c DNA中克隆出来的,曾命名为类胰蛋白酶丝氨酸蛋白酶,由六个外显子组成,是一种蛋白质编码基因,与肿瘤密
目的:研究皖南地区人群TLR2、TLR8和TLR9基因多态性在皖南地区汉族人群中的分布情况,探讨其基因多态性与结核病风险的相关性。方法:以皖南医学院第一附属医院（弋矶山医院）为研究现场,选择2020年9月至2021年9月住院确诊的汉族结核病患者200例为病例组,同时期到该院体检的同性别,年龄不超过90岁的体检人群200例为对照组。记录研究对象的临床和体检资料并收集血液标本,采用荧光定量PCR-探针
目的:本研究旨在从遗传易感性角度分析Tie2基因多态性与高血压及缺血性脑卒中的关联,为高血压及缺血性脑卒中发病机制提供病因学线索,为疾病的预防和治疗提供新的靶点。方法:高血压病例对照研究对象主要采用整群抽样及简单随机抽样方法,分别于2009年5月至10月在江苏省宜兴市官林、徐舍开展的基线调查及于2018年5月在江苏省宜兴市宜城社区体检募得,共募得高血压病例2114例,对照2316例;缺血性脑卒中病
目的:目前在某些神经退行性疾病和创伤性脑损伤研究中发现星形胶质细胞丰富极化为A1型星形胶质细胞并导致大量神经元凋亡。然而,关于弓形虫感染是否诱导星形胶质细胞极化为A1型以及A1型星形胶质细胞在弓形虫脑炎（TE）神经元死亡中的作用机制尚不清楚。本研究通过构建弓形虫TgCtwh6株慢性感染小鼠模型分别检测不同时间段活化的小胶质细胞与星形胶质细胞标志蛋白及相关炎性因子的基因转录和表达水平等,评估A1型星
目的:高血压和缺血性脑卒中是心血管疾病最常见的形式,其确切发病原因仍在探索,受环境和遗传因素共同影响。研究表明,MEF2A及cZNF609（circ RNA-ZNF609）在血管内皮细胞生长、迁移和维持血管形态稳定中发挥重要作用,并参与动脉粥样硬化病理进程。本研究旨在从遗传易感性角度分析MEF2A基因多态性与高血压及缺血性脑卒中的关联;探讨cZNF609表达水平对高血压、缺血性脑卒中的影响。为人群