解淀粉芽孢杆菌X-278抑菌物质的分离及性质分析

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解淀粉芽孢杆菌X-278是从棉株体内分离并筛选到的一株对棉花黄萎病病原菌Verticillium dahilae Kleb具有较强抑制作用的菌株,不但对棉花黄萎病菌表现出较理想的防治效果,同时对多种其它病原菌也有很好的抑菌作用。通过最佳条件下获得的X-278菌株培养液进行硫酸铵沉淀,并用14000D透析袋透析获得对棉花黄萎菌有抑制作用的蛋白粗提液。对蛋白粗提液进行蛋白酶稳定性试验和热稳定性试验,结果表明当硫酸铵饱和度为50%时,X-278菌株蛋白粗提液对棉花黄萎病菌抑菌作用最强,蛋白粗提液对蛋白酶K敏感性最差,对胰蛋白酶最敏感,蛋白粗提液经40℃处理后抑菌活性最高,121℃处理的粗蛋白抑菌活性最低,抑菌圈直径为13.6mm,为对照的72%。研究结果表明,X-278菌株粗蛋白的部分抗菌成分属于耐热物质并且菌株产生的抗菌物质存在性质上的差异。本文对50%饱和硫酸铵沉淀的蛋白粗提掖进行了进一步的研究,将蛋白粗提液的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳条带进行肽指纹图谱(PMF)检测,并未检索到与X-278菌株同源的蛋白登录号及细菌名,分析X-278菌株蛋白粗提液中起抑菌作用的可能是小分子量脂肽类的抑菌物质或是一类新的蛋白质。本文对小分子的脂肽类抑菌物质也进行了简单的分析,以确定小分子脂肽类抑菌物质的成分,用浓盐酸沉淀获得的脂肽类抗生素粗提液与标准品Surfactin进行TLC和HPLC比较分析,结果表明X-278菌株的抑菌活性物质由多种成分构成,脂肽抗生素的薄层层析试验获得一条Rf值与surfactin标准品一致的条带,初步证明了菌株X-278能够产生surfactin;对X-278菌株脂肽抗生素进行的高效液相色谱(HPLC)检测分析,其出现的峰的保留时间与surfactin标准品的保留时间基本一致,由此可以初步推断解淀粉芽孢杆菌菌株X-278的抗菌脂肽中含有与表面活性素相似的物质成分。
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