【摘 要】
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目的:利用生物信息学方法分析切割刺激因子亚基2（cleavage stimulation factor subunit 2,CSTF2）在ICGC与TCGA肝癌数据库中的表达及与生存预后的关系;利用新鲜肝癌组织与肝癌细胞验证CSTF2的表达;通过体外实验明确CSTF2表达变化对肝癌细胞增殖的影响;探讨CSTF2调控细胞周期蛋白B1（Cyclin B1,CCNB1）影响肝癌增殖的机制。方法:1.利用
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目的:利用生物信息学方法分析切割刺激因子亚基2（cleavage stimulation factor subunit 2,CSTF2）在ICGC与TCGA肝癌数据库中的表达及与生存预后的关系;利用新鲜肝癌组织与肝癌细胞验证CSTF2的表达;通过体外实验明确CSTF2表达变化对肝癌细胞增殖的影响;探讨CSTF2调控细胞周期蛋白B1（Cyclin B1,CCNB1）影响肝癌增殖的机制。方法:1.利用ICGC及TCGA数据库分析肝癌中CSTF2的表达及与生存预后的关系;2.利用实时荧光定量PCR、免疫组化及蛋白印迹法检测肝癌组织中CSTF2的m RNA与蛋白表达;利用实时荧光定量PCR和蛋白印迹法检测人正常肝脏细胞HL7702和肝癌细胞株HCCLM3、SKHep1、Hep3B和Hep G2中CSTF2的m RNA和蛋白表达水平;3.通过CCK-8、克隆形成及流式细胞术分别检测干扰和过表达CSTF2后细胞增殖与细胞周期的变化;4.在TCGA中通过GSEA富集分析预测CSTF2在肝癌中可能影响的通路或功能;利用ICGC及TCGA数据库分析肝癌中CSTF2与CCNB1的表达相关性;采用实时荧光定量PCR和蛋白印迹法观察在肝癌细胞中改变CSTF2的表达后CCNB1的m RNA及蛋白表达变化;5.在稳定干扰CSTF2表达的肝癌细胞株SKHep1中过表达CCNB1,或在过表达CSTF2的肝癌细胞株HCCLM3中干扰CCNB1的表达,观察CSTF2和CCNB1的蛋白表达和细胞的增殖能力。结果:1.利用ICGC及TCGA数据库分析发现CSTF2在肝癌的表达显著高于正常肝组织,且CSTF2高表达是肝癌患者不良预后的独立风险因素;2.CSTF2在肝癌组织与肝癌细胞系中的表达显著升高;3.干扰CSTF2后细胞增殖能力减弱,G2期阻滞;过表达CSTF2后细胞增殖能力增强,G2期过渡加快;4.根据KEGG及HALLMARK富集分析,CSTF2与细胞周期的G2/M期相关;在ICGC及TCGA肝癌公共数据库中,CSTF2与CCNB1的表达均呈显著正相关;在肝癌细胞中干扰或过表达CSTF2后,CCNB1的m RNA和蛋白表达水平也相应下调或上调;5.CCNB1是CSTF2调控肝癌细胞增殖的关键效应分子。结论:CSTF2在肝癌组织及肝癌细胞中表达上调且与不良预后相关;CSTF2正向调控CCNB1的表达,进而促进肝癌细胞的增殖能力。
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目的:探讨质谱技术在检测临床分离的产碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌的应用价值。方法:1.收集南昌某大型三甲医院2016年1月-2019年12月血培养分离获得的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（Carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP）。用VITEK-2 compact进行菌种鉴定及药敏检测。改良碳青霉烯酶灭活试验（Modified carbapenem in
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