【摘 要】
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目的:阐明高脂状态下脂质代谢产物--大麻素影响学习记忆的关键途径、环节及分子机制,并应用益脉颗粒观察其对学习记忆的干预作用,验证中医脾虚痰浊,蒙蔽清窍的理论。材料与方法:健康雄性C57BL/6J小鼠48只,体重20-24g,由斯贝福（北京）生物技术有限公司提供。将48只小鼠随机分为6组,即正常组、高脂模型组、高脂+益脉颗粒低剂量组（1.8g/kg/d）、高脂+益脉颗粒中剂量组（3.6g/kg/d）
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目的:阐明高脂状态下脂质代谢产物--大麻素影响学习记忆的关键途径、环节及分子机制,并应用益脉颗粒观察其对学习记忆的干预作用,验证中医脾虚痰浊,蒙蔽清窍的理论。材料与方法:健康雄性C57BL/6J小鼠48只,体重20-24g,由斯贝福（北京）生物技术有限公司提供。将48只小鼠随机分为6组,即正常组、高脂模型组、高脂+益脉颗粒低剂量组（1.8g/kg/d）、高脂+益脉颗粒中剂量组（3.6g/kg/d）、高脂+益脉颗粒高剂量组（7.2g/kg/d）、高脂+辛伐他汀组假手术组（1.76mg/kg/d）,每组8只。于造模14周后开始灌胃给药,持续给药30周。Morris水迷宫行为学测试;ELISA试剂盒检测总胆固醇（TC）,甘油三酯（TG）,低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）,高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、花生四烯酸乙醇胺（AEA）、2-花生四烯酸甘油（2-AG）和三磷酸腺苷（ATP）的含量;HE染色法观察海马组织形态学改变;Western Blot法检测海马相关通路蛋白;电镜观察脑组织线粒体形态。结果:1益脉颗粒对C57BL/6J小鼠Morris水迷宫行为学测试的影响Morris水迷宫实验结果表明:高脂模型小鼠定位学习能力和探索记忆能力均有明显下降,表现出学习记忆能力下降的模型特点,而西药辛伐他汀与中药益脉颗粒均能提高模型小鼠对空间认知的学习记忆能力。2益脉颗粒对C57BL/6J小鼠血脂水平及大麻素的影响血脂水平测定ELISA结果显示:与正常组相比,高脂喂养的模型组小鼠血清中LDL-C、TC、TG显著升高（P＜0.05,P＜0.01）,HDL-C显著降低（P＜0.01）与高脂模型组相比,各给药干预组小鼠血清中TG、TC、LDL-C显著降低（P＜0.05）,其中以益脉颗粒高剂量组与辛伐他汀组疗效较好（P＜0.05,P＜0.01）,HDL-C显著升高（P＜0.05）。大麻素AEA和2-AG的ELISA结果显示:与正常组相比,高脂喂养的模型组小鼠血清中AEA、2AG含量显著升高（P＜0.01）;与模型组对比,各给药组小鼠血清中AEA、2AG含量显著降低（P＜0.05）,益脉颗粒中剂量组与高剂量组效果较好（P＜0.01）。3益脉颗粒对C57BL/6J小鼠海马线粒体能量代谢的影响ELISA结果显示:与正常组相比,高脂饲养模型组小鼠血清中ATP含量显著降低（P＜0.01）;与高脂模型组相比,各给药干预组小鼠血清中ATP含量显著升高（P＜0.05,P＜0.01）,其中以益脉颗粒中、高剂量组效果较好（P＜0.01）。4益脉颗粒对小鼠海马组织HE染色法的形态影响HE染色实验结果显示:正常组海马CA1区的神经元细胞形态较好,条理清晰,排列分布整齐,细胞膜、细胞核形态完整,细胞数量较多;模型组CA1区神经细胞数量存在明显减少,排列不齐,细胞膜不清;与高脂模型组相比,各治疗组海马神经元细胞的数量有所恢复,细胞结构完整,其中以益脉颗粒高剂量组与辛伐他汀组改善效果最为显著。5益脉颗粒对小鼠海马组织Western Blot法检测相关蛋白含量的影响Western Blot结果显示:与正常组相比,模型组MAP2、ATP、PKA、NDUFS2、CB1R、BDNF蛋白表达量下降（P＜0.05,P＜0.01）;与高脂模型组相比,益脉颗粒方组与辛伐他汀组MAP2、ATP、PKA、NDUFS2、CB1R、BDNF蛋白表达量升高（P＜0.05,P＜0.01）。6益脉颗粒对小鼠脑组织电镜下海马神经元细胞形态的影响透射电镜结果显示,与正常组相比模型组线粒体结构受到严重影响,线粒体肿胀变形,内腔扩大,线粒体数量减少,嵴杂乱无章甚至消失,细胞膜边界模糊不清,甚至缺失。与模型组比较,益脉颗粒中、高剂量组及辛伐他汀组线粒体结构清晰,线粒体数量增多,嵴形态也有所改善,排列较整齐,细胞膜边界清楚。结论:1.益脉颗粒能改善模型组小鼠血脂指标、改善小鼠的学习记忆能力和脂质代谢紊乱的情况。2.益脉颗粒改善小鼠的学习记忆能力与mtCB1R/Gαi/NDUFS2通路相关。
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