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·津田’芜菁色素合成受UV-A光诱导,受UV-B/蓝光复合光的协同效应。因此我们认为UV-A信号转导的光受体不同于拟南芥中发现的蓝光/UV-A光受体(隐花色素),是一种新的受UV-A特异诱导的光受体。对‘津田’芜菁白色直根表皮及其在UV-A光照处理后的差异蛋白组学分析表明,UV-A光照处理后膜联蛋白家族BrANNEXIN蛋白表达增加。因此本研究以‘津田’芜菁(Brassica rapa L.’Tsuda’)为试材克隆了‘津田’芜菁BrANNEXIN家族基因,对该基因的表达特性和功能进行了初步研究对于阐明这一新的受UV-A特异诱导的光受体及其调控花青素合成信号转导途径将有重要的意义。本研究的主要结果如下:1.‘津田’芜菁BrANNEXIN家族基因克隆从‘津田’芜菁中克隆到了 4个膜联蛋白家族基因,分别命名为BrANNEXIN1,2,3,4,开放阅读框长度分别为 954bp、951 bp、960 bp、948 bp,3’UTR 长度分别为 171 bp,74 bp,130 bp,151 bp。Southern 杂交检测显示BrANNEXIN1,3在‘津田’芜菁基因组中均至少有2个拷贝,而BrANNEXIN2,4至少有1个拷贝。生物信息学构建进化树分析显示,BrANNEXINI,2,4亲缘关系较近,与BrANNEXIN3亲缘关系较远。‘津田’芜菁与同为十字花科的油菜、甘蓝、拟南芥亲缘关系相近。2.BrANNEXINI,2,3,刊拘表达特性分析(1)组织特异性表达BrANNEXIN1,2,3,4在根肉和花蕾期表达量最高,BrANNEXIN1在叶片中表达量较高,BrANNEXIN2,3,4在叶片中表达较低。BrANNEXIN1,4在花瓣中表达量也较高,BrANNEXIN2,3在花瓣没有检测到表达。BrANNEXIN4在红色根皮中的表达量比白色根皮中表达量高,BrANNEXINI,2,3红色根皮中的表达量比白色根皮低。(2)不同光质对‘津田’芜菁BrANNEXIN家族基因的诱导‘津田’芜菁白色根皮受到UV-A处理不同时间,BrANNEXIN1,3表达量大幅下调,12 h-24 h表达量稍有恢复。BrANNEXIN2短时间UV-A处理表达量下降,随即恢复到正常水平。BrANNEXIN4受UV-A处理表达量大幅上调。在‘津田’芜菁幼苗中,UV-A可诱导BrANNEXIN1,2,3,4在子叶和H1(花青素合成较多的位置)中表达量大幅上调,而在H2(花青素合成较少的位置)中BrA NNEXIN1,2,3,4中上调幅度减小。蓝光使子叶和H1中BrANNEXIN1,2,4表达量大幅上调,而BrANNEXIN3表达量下调,H2中BrANNEXIN1,2,3表达量上调,而BrANNEXIN4基本维持不变。BrANNEXIN1,2,3,4在子叶和H2中受到红光远红光诱导表达量均上调,BrANNEXIN1,2,4在H2中受红光远红光诱导表达量也上调,而BrANNEXIN3在H2中受红光远红光诱导表达量下降。(3)不同胁迫对BrANNEXIN家族基因的诱导冷胁迫(4℃)可使BrANNEXIN1,2,3,4表达量先升高再降低,热胁迫(37℃)可使BrANNEXIN3表达量大幅度降低,BrANNEXIN1,2,4无明显影响。干胁迫(25℃)可使BrANNEXIN1表达量降低,BrANNEXIN2,3,4表达量无明显影响。渗透胁迫(PEG、甘露醇、锂离子、钠离子、铯离子)对BrANNEXIN各基因的表达都会产生一定的影响。ABA处理使BrANNEXIN1,4表达量增加,对BrANNEXIN2,3表达量无明显影响。3.BrANNEXIN1,2,3,4基因的拟南芥遗传转化研究通过Gateway技术将BrANNEXIN1,2,3,4基因构建到过量表达载体pH7WG2D上,通过农杆菌介导的拟南芥花絮浸染法,对拟南芥进行BrANNEXIN4基因遗传转化,利用潮霉素筛选种子法,获得了多个抗性植株。