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良性前列腺增生（Benign prostatic hyperplasia,BPH）是中老年男性常见病,患病率与患者年龄呈正相关变化。近年来,随着人口老龄化现象的加剧,在中国患有前列腺增生的患者数量持续增多,前列腺增生已成为重要的医学问题。良性前列腺增生的分子机制尚未明确。但目前大多数研究认为其发病机制与5α-还原酶相关。5α-还原酶是一种参与激素代谢的酶,主要有两种表型,1型和2型（steroid 5α-reductase type 1,SRD5A1;steroid 5α-reductase type 2,SRD5A2）。分布在皮肤、毛发、前列腺、附睾等。酶的作用是将睾酮（Testosterone,T）转化为二氢睾酮（Dihydrotestosterone,DHT）,DHT活性比T强,能够竞争性地代替T与雄激素受体结合,进而促进细胞的快速增殖。目前临床上使用的5α-还原酶抑制剂有非那雄胺、度他雄胺。而这两类药物据报道在实际应用中都有显著的副作用。因此,本论文通过建立5α-还原酶体外筛选的模型,对一系列用于临床治疗BPH的中药进行5α-还原酶抑制活性化合物的筛选,并利用前列腺增生大鼠模型进行药效学验证,取得了一定的治疗效果。本研究为从资源丰富的天然化合物中获取低毒、高效的5α-还原酶抑制剂提供了平台,同时也为开发治疗BPH的中药新药提供了理论基础。1.5α-还原酶抑制剂筛选模型反应体系的建立首先对细胞中5α-还原酶的反应体系的反应条件进行了考察,并优化了表征体外5α-还原酶活性的分析方法,分别是薄层色谱法（High-Performance Thin-Layer Chromatography,HPTLC）液质联用方法（Liquid chromatograph-mass spectrometer,LC-MS）和基于芯片的纳米电喷雾离子化质谱（chip-based nano-electrospray ionization mass spectrometry,Chip-based nano-ESI-MS）,并对其筛选效果进行了评估。经优化后可以发现,HPTLC方法的条件展开剂为环己烷-乙酸乙酯-三乙胺（1.5:1:0.2）,显色剂为10%的硫酸乙醇溶液,对反应物的分离效果较好;LC-MS的分析方法筛选快速（分析时间5 min）、精确度高（日内精密度在0.64%-5.12%,T的日间精密度在1.30%-5.79%;DHT的日内精密度在4.80%-9.50%,日间精密度在8.85%-9.90%）、准确性好（T的平均回收率103.38±3.34%,DHT的平均回收率是102.22±5.52%）;Chip-based nano-ESI-MS具有即时检测、前处理简便的特点。2.中药中5α-还原酶抑制剂的体外筛选将优化后的体外5α-还原酶活性筛选体系及建立的分析方法应用于天然化合物活性筛选。首先选择了一部分具有补肾作用的药材和临床上用于治疗BPH的药材,对其所属成分化合物进行筛选。涉及的药材在仙茅、枸杞、三七、侧柏叶、红参、补骨脂、蛇床子的基础上,补充筛选了一系列黄酮类化合物,共计80种化合物及提取物。体外细胞毒性实验的结果为活性筛选确定了合适的浓度,经过5α-还原酶活性的考察实验,最终得到13种活性较好的化合物,分别是补骨脂查尔酮、补骨脂二氢黄酮、姜黄素、仙茅化合物-4、玉米黄素、三七总皂苷、叶黄素、补骨脂定、槲皮素、枸杞子石油醚提取物、补骨脂宁、补骨脂二氢黄酮甲醚。另外还发现部分具有激动作用的化合物。3.枸杞提取物对大鼠前列腺增生作用及机制研究使用非去势丙酸睾酮造模作为体内药效验证实验的模型。药效指标为前列腺组织指数、前列腺组织病理切片,以证明枸杞提取物具有抑制前列腺增生的作用。药效学分析的结果证明枸杞石油醚提取物具有明显的抑制前列腺增生的作用。目前BPH的分子作用机制并不明确,因此本研究从多个指标进行检测,考察大鼠血清中类固醇激素的变化,从蛋白水平中检测SRD5A1、SRD5A2、雄激素受体（Androgen receptor,AR）、孕激素受体（Progesterone receptor,PR）、雌激素受体（Estrogen receptor,ER）的蛋白表达,从基因水平检测AR、PR、SRD5A2、cyclin A、cyclin B、cyclin D1、cyclin E1的基因表达。结果发现血清检测的BPH模型组中的DHT水平明显高于正常对照组,而给药后大鼠的DHT水平明显降低,相应的T水平明显升高,说明枸杞提取物可能通过抑制5α-还原酶的表达来抑制T向DHT转化。同时BPH模型中的SRD5A1、SRD5A2、AR、PR、ER的蛋白表达与正常组相比,明显上调;而玉米黄素给药组、枸杞石油醚提取物给药组、枸杞粉末给药组的大鼠,其SRD5A1、SRD5A2、AR、PR、ER的蛋白表达与模型组相比发生明显下调。此外,从基因水平检测结果发现BPH模型中的cyclin D1基因发生显著上调;而枸杞石油醚提取物给药组、枸杞粉末给药组与模型组相比cyclin D1基因显著下调,提示其具有抑制细胞增殖的作用。综上结果表明,枸杞提取物具有抑制前列腺增生的作用,具有开发成为治疗前列腺增生药物的潜力。