香烟暴露大鼠中CD4+Foxp3+调节性T细胞与CD4+IL-17+T细胞的变化及意义

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目的:观察香烟暴露大鼠外周血与支气管肺泡灌洗液(BALF)中CD4+Foxp3+调节性T细胞(Treg)和CD4+IL-l7+T细胞(Th17)及相关炎症因子的变化,以探讨其在香烟诱导气道炎症/COPD的发生、发展中所起的作用。方法:将40只健康清洁级雄性Wistar大鼠随机分为四组:12周正常对照组(简称对照1组)、24周正常对照组(简称对照2组)、12周香烟暴露组(简称实验1组)、24周香烟暴露组(简称实验2组),每组10只大鼠。用烟熏法复制大鼠气道炎症的动物模型,满12周时,对照1组和实验1组处置取材;实验2组继续烟熏12周,再满12周时对照2组和实验2组处置取材。收集BALF进行细胞计数和分类计数;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组大鼠血清和BALF上清液中细胞因子IL-17、IL-6的浓度;流式细胞术检测各组大鼠外周血和BALF中CD4+Foxp3+调节性T细胞和CD4+IL-l7+T细胞比例,实时荧光定量PCR法检测各组大鼠外周血和BALF中Foxp3 mRNA和IL-17 mRNA的表达水平。结果:(1)实验1组和实验2组BALF中细胞总数及各类细胞数均明显高于对照1组和对照2组(P均<0.01),实验2组升高更明显(P <0.05)。(2)与对照1组和对照2组比较,实验1组和实验2组中IL-17和BALF中IL-6的浓度均明显升高(P均<0.01),与实验1组比较,实验2组中IL-17和IL-6的水平亦升高(P均<0.05)。(3)各组大鼠外周血Treg细胞比例比较差异没有统计学意义(P均>0.05),但实验1组和实验2组BALF中Treg细胞比例较对照1组和对照2组明显增高(P均<0.01),而实验1组和实验2组之间比较差异无统计学意义(P>0.05);实验1组和实验2组外周血和BALF中Th17细胞比例明显上调(P均<0.01),与实验1组比较,实验2组Th17细胞比例亦明显升高(P<0.05)。( 4)各组外周血Foxp3 mRNA水平差异无统计学意义(P均>0.05),而实验1组和实验2组BALF中Foxp3 mRNA水平较对照1组和对照2组明显升高;与对照1组和对照2组比较,实验1组和实验2组外周血和BALF中IL-17 mRNA水平均明显增高(P<0.05),其中实验2组升高最明显(P<0.05)。(5)香烟暴露组BALF中Th17细胞与细胞总数和单核巨噬细胞数成正相关(P <0.05),而与淋巴细胞、中性粒细胞数及Treg细胞之间无显著相关(P>0.05),Treg细胞与BALF中的细胞总数及各类细胞数之间均无明显相关(P>0.05)。结论:香烟暴露致使大鼠气道炎症模型中Treg细胞与Th17细胞及相关炎症因子水平升高,提示Treg细胞参与了气道炎症的免疫调节,Th17细胞的异常升高与大鼠气道炎症反应放大并且持续进展有关。
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