【摘 要】
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目的:探讨NRF3在肺腺癌中的表达水平及过表达NRF3对肺腺癌细胞吉非替尼敏感性的影响。方法:通过生物信息学方法预测了肺腺癌组织和癌旁组织中NRF3的表达水平;免疫组织化学法检测NRF3在肺腺癌组织和癌旁组织中的表达情况;病毒转染PC9和A549细胞株建立NRF3过表达细胞株;qPCR、Western blot验证NRF3过表达细胞中NRF3的表达情况;CCK-8法和EdU细胞增殖实验检测不同吉非
【基金项目】
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四川省科技厅项目（2018jy0478）；
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目的:探讨NRF3在肺腺癌中的表达水平及过表达NRF3对肺腺癌细胞吉非替尼敏感性的影响。方法:通过生物信息学方法预测了肺腺癌组织和癌旁组织中NRF3的表达水平;免疫组织化学法检测NRF3在肺腺癌组织和癌旁组织中的表达情况;病毒转染PC9和A549细胞株建立NRF3过表达细胞株;qPCR、Western blot验证NRF3过表达细胞中NRF3的表达情况;CCK-8法和EdU细胞增殖实验检测不同吉非替尼浓度（0、4、8、16、32μg/ml）对 PC9、lapNRF3-PC9、A549、lapNRF3-A549 细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测不同吉非替尼浓度（0、4、8、16μg/ml）对PC9、lapNRF3-PC9、A549、lapNRF3-A549细胞周期的影响;转录组测序分析PC9、lapNRF3-PC9细胞中mRNA的表达水平;Western blot检测不同吉非替尼浓度（0、4、8、16μg/ml）对 PC9、lapNRF3-PC9、A549、lapNRF3-A549细胞内 cyclinB1、CDK1、MLK1（MAP3K9）、p-JNK1/2 蛋白水平的影响。结果:生物信息学方法分析得出,在肺腺癌组织中NRF3表达水平高于癌旁组织;通过免疫组织化学法检测发现,与癌旁组织相比,NRF3在肺腺癌组织中表达水平升高,差异有统计学意义（P＜0.05）;通过CCK-8法检测发现,不同浓度吉非替尼处理PC9、lapNRF3-PC9、A549、lapNRF3-A549细胞后,NRF3过表达组细胞存活率高于对照组;通过EdU细胞增殖实验检测发现,不同浓度吉非替尼处理PC9、lapNRF3-PC9、A549、lapNRF3-A549 细胞后,NRF3 过表达组细胞的增殖细胞数高于对照组;通过流式细胞术检测不同浓度吉非替尼处理PC9、lapNRF3-PC9、A549、lapNRF3-A549细胞后细胞周期的影响,结果显示,与对照组相比,NRF3过表达细胞S期细胞百分数增加,G2/M期细胞百分数减少;通过转录组测序分析发现,与PC9细胞相比,lapNRF3-PC9细胞中MLK1（MAP3K9）表达上调;同时,通过Western blot检测经过不同浓度吉非替尼处理PC9、lapNRF3-PC9、A549、lapNRF3-A549细胞后,细胞周期相关蛋白的表达量,结果显示,PC9、A549细胞内cyclinB1、CDK1 表达量升高,lapNRF3-PC9、lapNRF3-A549 细胞内 cyclinB1、CDK1蛋白表达量降低;进一步通过Western blot探讨其作用机制,检测发现NRF3过表达细胞内MLK1、p-JNK蛋白表达量升高。结论:与癌旁组织相比,NRF3在肺腺癌组织中表达上调。上调NRF3的表达可以使不同浓度吉非替尼处理的肺腺癌细胞S期细胞百分数量增加,G2/M期细胞百分数减少,导致细胞增殖能力增加。过表达NRF3可能通过MAPK/JNK信号通路调控细胞周期相关蛋白,从而降低肺腺癌对吉非替尼的敏感性。
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研究目的:1.明确一种DJ-1抑制剂STK793590体外是否对多发性骨髓瘤（MM）细胞的增殖及凋亡产生影响。2.若STK793590存在对MM细胞的抑制效应,进一步探讨其初步机制。3.明确STK793590是否能增加MM细胞对硼替佐米（Bz）的敏感性。研究方法:1.采用不同浓度的STK793590（12.5μM-100μM）及对照组（二甲基亚砜,DMSO）处理RPMI8226细胞,作用不同时间（
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