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目的:1.了解我院2017-2018年肺炎克雷伯菌临床分布特点及耐药情况。2.分析侵袭性高毒力肺炎克雷伯菌的感染危险因素,同源性及生物被膜的表达水平。3.研究我院高毒力肺炎克雷伯菌毒力基因的流行特征。方法:1.利用WHONET 5.6软件对2017-2018年期间暨南大学附属第一医院临床分离的非重复肺炎克雷伯菌进行临床资料及耐药情况的统计分析。2.采用拉丝试验(String Test,ST)将肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,KP)判定为高黏液肺炎克雷伯菌(hypermucoviscous Klebsiella pneumoniae,hmKP),采用PCR的方法对所有hmKP进行黏液表型调节基因A(RmpA)和气杆菌素(aerobactin)两个毒力基因进行扩增,两个毒力基因同时表达即被判定为高毒力肺炎克雷伯菌(Hypervirulence Klebsiella pneumonia,HvKP)。最后将判定为HvKP用VITEK2 Compact微生物鉴定仪重新进行菌种及药敏鉴定。3.运用多因素Logistic回归分析发生侵袭性HvKP感染的危险因素,同时分析发生侵袭性感染的非HvKP和HvKP的临床资料和药敏结果。4.对分离自侵袭性感染的HvKP进行多位点序列分型(Multilocus Sequence Typing,MLST)并利用Mega 7.0软件对菌株进行进化树的构建。5.采用PCR的方法对hmKP进行常见的血清荚膜型K和多个毒力基因进行特异性扩增。6.采用结晶紫(Crystal Violet,CV)染色方法及XTT方法对来源于侵袭性感染的HvKP的菌株进行生物被膜含量及活性进行定量测定。结果:1.2017年和2018年间我院分离的非重复肺炎克雷伯菌数量分别为296株和256株,两年内非重复分离的肺炎克雷伯菌共552株。2.552株非重复分离的肺炎克雷伯菌标本来源以痰液为主,占46.92%(259/552);尿液,占20.47%(113/552);血液,占13.59%(75/552)。其中来源于无菌体液标本(血液、脑脊液、肝穿刺物、胸腹水、病理组织、胆汁、导管)的有102株,占18.7%(102/552)。在病区分布方面,以ICU、呼吸科、神经外科,神经内科占前四位,分别占17.39%(96/552),11.41%(63/552),8.51%(47/552),7.78%(43/552)。3.552株非重复分离的肺炎克雷伯菌对临床常用的耐药率如下:哌拉西林59.8%,头孢呋辛钠56.8%,复方新诺明41.2%,庆大霉素40.6%,呋喃妥因37.1%,环丙沙星40%,头孢他啶38.1%,左旋氧氟沙星37%,头孢吡肟26.5%,头孢哌酮/舒巴坦26.5%,哌拉西林他唑巴坦25.7%,亚胺培南16.4%,美罗培南16.9%。4.通过拉丝试验初步判定为hmKP的共51株,占总分离率的9.24%(51/552)。其中分离自侵袭性肺炎克雷伯菌感染的有26株,分离自非侵袭性肺炎克雷伯菌感染的有25株。5.51株hmKP通过毒力基因(RmpA,aerobactin)特异性扩增有43株最终被判定为HvKP,其中25株分离自侵袭性肺炎克雷伯菌感染,18株分离自非侵袭性肺炎克雷伯菌感染,ST试验的检出率为84.31%(43/51)。6.Logistic多因素回归分析提示男性、血糖控制不佳、住院期间存在侵入性操作、发生肝脓肿为发生侵袭性HvKP感染的独立危险因素,其OR值分别为7.05、1.16、12.97、17.65。7.对我院分离自侵袭性感染的HvKP进行药敏统计的分析发现对目前临床常用抗菌药物均表现为敏感,其中对头孢曲松、氨曲南、庆大霉素、环丙沙星、左旋氧氟沙星、妥布霉素、哌拉西林/他唑巴坦、美罗培南、亚胺培南的敏感率达100.00%,在耐药表型上未发现产超广谱β内酰胺酶(Extend-spectrunmβ-lactamase,ESBL)及耐碳青霉烯类的高毒力肺炎克雷伯菌(Carbapenem-Resistant Hypervirulence Klebsiella pneumonia,CR-HvKP)的菌株。8.MLST结果分析显示25株HvKP分为9种ST型,以ST23为主,占40.00%(10/25),其次为ST86,占12.00%(3/25),ST65、ST714、ST1764及ST828均各占8.00%(2/25),ST375、ST660及ST218各1株。在本研究中有一株因存在tonB等位基因的突变暂未知具体ST型。9.43株非重复分离的HvKP中,K1、K2型为主要的血清荚膜分型,分别占41.86%(18/43)、23.26%(10/43),其余K20、K57、K54、K5分别占13.95%(6/43)、6.98%(3/43)、4.65%(2/43)、2.32%(1/43)。10.43株非重复分离的HvKP中,毒力基因携带率前四的为ycfM 100.00%(43/43),entB100.00%(43/43),ureA 93.02%(40/43),wabG 93.02%(40/43)。11.生物被膜含量定量测定发现25株HvKP中分别有36.00%(9/25)、32.00%(8/25)、32.00%(8/25)的菌株形成少量、中等量、大量的生物被膜;在对25株HvKP生物被膜活性定量测定中发现36.00%(9/25)、8.00%(2/25)、56.00%(14/25)的菌株可形成具有一般活跃、较活跃、非常活跃的生物被膜。结论:1.2017年至2018年期间,我院分离的肺炎克雷伯菌标本来源以痰液、尿液、血液为主;分离科室以ICU、呼吸科、神经外科,神经内科为主。我院KP对目前临床常见抗菌药物耐药现象较为严重,这提示临床需合理使用抗菌药物。2.男性、血糖控制不佳、住院期间存在侵入性操作、发生肝脓肿均为发生侵袭性HvKP感染的独立危险因素。暨南大学附属第一医院流行的HvKP以ST23型主要的基因型,以K1、K2血清荚膜型为主,毒力基因携带率较高的为ycfM、entB、ureA、wabG。3.我院分离自侵袭性感染的HvKP具有较强的生物被膜活性。