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原始生殖细胞(Primordial Germ Cells，PGC)是配子在胚胎期的祖先细胞，针对PGC开展研究将有助于我们认识生殖细胞的发育及遗传特性;以PGC为靶向进行遗传和细胞操作，将对品系建立、生殖调控、物种保护以及某些生殖疾病的治疗等提供强有力的技术途径。本研究中，我们以斑马鱼为模型，针对实验室日常使用的CRISPR/Cas9基因敲除技术的局限性，提出了CRISPR/Cas9结合PGC移植(PGCs transplantation，PGCT)的方法，以达到快速研制斑马鱼早期发育必需基因纯合突变及其母源合子突变体(MZ突变体)（简称为“非常规突变体”）的目的。此外，我们也尝试了利用体细胞核移植(somatic cell nuclear transplantation，SCNT)结合PGCT进行鱼类克隆的研究，以期克服传统核移植所得克隆胚胎存活率低下的缺点。我们获得了如下主要结果: 1、比较了两种密码子优化的Cas9编码基因(zCas9_bz和zCas9_wc)在斑马鱼胚胎中的基因敲除效率，发现zCas9 wc具有更高的敲除效率，并对这一现象进行了分析。 2、利用早期发育必需基因chd，开展CRISPR/Cas9和PGCT实验，获得F1代纯合子胚胎，证明该技术路线用于快速研制早期发育必需基因纯合突变体的可行性。 3、针对仅有MZ突变体表现出发育缺陷的tcf7l1a基因和合子突变致死基因pou5f3，开展CRISPR/Cas9和PGCT实验，分别获得它们的F1代MZ突变胚胎，证明该技术路线在快速研制MZ突变体中的可行性。 4、基于斑马鱼PGCT，我们在经济鱼类中做了相关尝试，发现PGCT同样适用于大型经济鱼类早期胚胎。 5、通过SCNT结合PGCT，获得胚胎期移植阳性的成体斑马鱼。 总之，我们在斑马鱼中建立了CRISPR/Cas9结合PGCT快速建立“非常规突变体”的技术。对PGC操作技术进行进一步的开发、优化和完善，将有力地推动鱼类生殖生物学等相关研究。