高产生物膜德氏乳杆菌抗胁迫能力分析及其特性研究

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yangliu349
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生物膜是区别于浮游菌的一种自我保护模式,对各种不良环境都有较强的抵抗能力。本研究以两株高产生物膜德氏乳杆菌为研究对象,对其生物学特性、最适附着载体、培养条件及抗逆性进行了初步探索,具体研究内容与结果如下:(1)生物学特性研究结果显示,以滴定法和p H计法测得德氏乳杆菌5D和5E具有良好的产酸性能,其产乳酸量分别可以达到757.14 g/L和709.1 g/L,24 h时p H值均降至3.8。经结晶紫染色试验得出菌株具有一定产膜能力,且均在13 h和22 h时有较高的产膜量。在以双层琼脂法对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、李斯特氏菌的抑菌试验中得出菌株除酸性物质外不产生其他的抑菌物质。抗氧化能力测定结果显示,德氏乳杆菌5D和5E的发酵上清液、菌悬液、无细胞提取物对DPPH自由基、羟基自由基、超氧阴离子自由基有不同程度的清除能力,同时也具有一定的还原能力。(2)以不锈钢网格、盖玻片、聚氯乙烯塑料和聚丙烯腈静电纺丝膜上形成的生物膜为研究对象,通过菌落计数法和扫描电镜法对生物膜最适载体进行筛选,结果显示:聚丙烯腈静电纺丝膜上形成的生物膜菌落总数要比其他三种载体上形成的生物膜菌落总数要多,且聚丙烯腈静电纺丝膜上生物膜菌落总数可达(6.95±0.26)log(CFU/m L)。(3)以生物膜形成量为评价指标,利用响应面优化法对生物膜最适培养条件进行优化,结果显示:经响应面试验得出德氏乳杆菌5E生物膜形成的最适培养条件,即培养时间为46.19 h,培养温度为33.38℃,接种量为1.86%,p H值为6.04时具有较高的生物膜形成量,此时由回归方程得出生物膜形成量的预测值为6.59 log(CFU/m L)。(4)以高产生物膜德氏乳杆菌5E在聚丙烯腈静电纺丝膜表面上形成的被膜态乳酸菌和游离态乳酸菌为研究对象,分析比较两者在高温胁迫、高渗透压胁迫、高胆盐胁迫、模拟人工胃肠液、防腐剂胁迫以及消毒剂胁迫下的存活率,发现形成生物膜后显著提高了菌株对不良环境的耐受性。在1.5%-6%的渗透压和0.1%-0.3%的胆盐环境下,被膜态菌株的存活率要明显高于浮游态菌株,且被膜态菌株对高温和人工胃肠液环境有一定的耐受能力,同时当山梨酸钾浓度为1.6%、过氧化氢浓度为2%时,被膜态菌株和浮游态菌株几乎都无存活。(5)以高产生物膜德氏乳杆菌5E在聚丙烯腈静电纺丝膜表面上形成的生物膜为研究对象,通过菌落计数法对其释放游离菌株的能力进行测定,结果表明生物膜能稳定释放菌落总数为10~6CFU/m L的游离菌,且这个释放的过程至少可以持续十五个循环以上,即生物膜态的菌株有稳定连续释放浮游菌的能力。
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