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目的观察知母皂苷元（Sarsasapogenin,Sar）能否对抗冈田酸诱导的体外培养的海马神经元细胞的突触损伤及其作用机制的研究。方法原代培养海马神经元:取0～24 h以内的SD大鼠乳鼠数只,用75%乙醇浸泡乳鼠消毒1min后,将乳鼠断头并置于盛有无菌的DMEM培养基内,应用动物解剖显微镜在无菌的环境条件下用眼科小剪刀及小镊子进行剥离大脑组织,并进一步分离海马,剪碎取出来的海马组织成1mm3的小块状、0.125%胰蛋白酶消化液进行消化,用含胎牛及马血清的完全培养液将所得到的细胞沉淀制成细胞混悬液,将接种有细胞悬液的培养板置于37°C二氧化碳（5%）培养箱中孵育,细胞培养10 d后用于实验,实验有两部分,第一部分观察不同浓度冈田酸处理对海马神经元的影响,实验分为四组:正常对照组:加入等量DMEM;OA(10、20、40 nmol·L-1)组:培养10 d海马神经元加入10、20、40 nmol·L-1的OA作用24 h。不同浓度梯度的冈田酸对体外培养的海马神经元的细胞活力的作用利用MTT实验的方法进行测定;而不同浓度梯度的冈田酸对体外培养的海马神经元细胞突触蛋白SYP表达以及突触后致密蛋白PSD 95表达水平的影响使用Western blot法进行半定量及定性分析检测。第二个部分是探讨Sar能否对冈田酸诱导的体外培养的海马神经元细胞损伤具有抑制作用,试验设计为六组:正常对照组,将培养10 d的海马神经元细胞加入0.1%的二甲基亚砜作用24 h;OA组:培养10 d海马神经元加入20 nmol·L-1的OA作用24 h;OA+Sar组:培养10 d海马神经元加入10、30、100μmol×L-1的Sar作用24 h,再加入20 nmol·L-1的OA共同孵育24 h;Sar 30μmol×L-1组:培养10 d海马神经元加入30μmol×L-1的Sar作用48 h。应用MTT法观察Sar对冈田酸诱导的海马神经元细胞活力的影响;培养的原代海马神经元细胞形态的改变应用倒置的相差显微镜进行观察记录,各组突触蛋白SYP、突触后致密蛋白PSD 95表达的改变应用免疫荧光染色方法进行观察;Western blot蛋白印迹法测定海马神经元细胞的突触蛋白SYP、突触后致密蛋白PSD 95、p-Akt、p-Ser9 GSK 3β、Tau-5、p-Ser396 Tau蛋白表达水平。结果将培养10 d海马神经元用免疫荧光染色的方法检测Neu N及GFAP的表达,检测结果表明我们培养的原代海马神经元细胞的纯度在90%以上。MTT实验结果显示,与正常对照组相比较,加入OA(10、20和40 nmol·L-1)作用24 h,可使海马神经元细胞活力明显降低(*P<0.05,**P<0.01)。与OA 20 nmol·L-1组比较,在加入OA前24 h,加入知母皂苷元(30,100μmol×L-1)能够明显的抑制OA诱导的海马神经元细胞活力的降低,知母皂苷元(10μmol×L-1)对OA引起的海马神经元细胞活力的降低没有影响。为了能够确定冈田酸能否诱导海马神经元的细胞突触的损伤,我们进一步观察了不同浓度的OA对体外培养的海马神经元细胞的突触蛋白SYP的表达以及突触后致密蛋白PSD 95表达水平的作用。Western Blot和免疫荧光结果显示,培养10 d的海马神经元加入OA(20,40 nmol·L-1)作用24 h,可使海马神经元细胞突触蛋白SYP和突触后致密蛋白PSD 95表达明显降低（P<0.01）,OA(10nmol·L-1)组对体外培养的海马神经元细胞突触蛋白SYP的表达以及突触后致密蛋白PSD 95的表达没有达到统计学意义,对细胞的突触没有明显的影响。实验在加入OA前24 h,先加入知母皂苷元(10,30,100μmol×L-1)作用24 h能够显著的抑制OA诱导的体外培养的海马神经元细胞突触蛋白SYP的表达以及突触后致密蛋白PSD 95表达的减少（P<0.01）。细胞形态学观察结果显示:原代培养10 d的海马神经元,细胞胞体饱满,突起变得越来越长、越来越粗,分支也逐渐增多,最终形成了致密的网格状结构。与正常对照组对比,加入OA(20 nmol·L-1)作用24 h,可使海马神经元突起明显减少、变短、变细,几乎看不到正常的网络状结构。培养10 d的海马神经元细胞提前加入知母皂苷元(30,100μmol×L-1)作用24 h后,再加入OA共同孵育24 h,知母皂苷元能够明显的减轻OA诱导的海马神经元细胞突起损伤。Western Blot半定量分析结果表明,与正常对照组比较,加入OA作用24 h,可以明显的增加了海马神经元细胞Tau 5蛋白、p-Ser396 Tau蛋白表达水平（P<0.01）,并且明显的降低了磷酸化Akt蛋白、磷酸化Ser9 GSK 3β蛋白表达水平（P<0.01）。在加入OA前24 h,加入Sar(10,30,100μmol×L-1)可明显对抗OA引起的Tau 5、p-Ser396 Tau蛋白表达水平增加（P<0.05,P<0.01）,磷酸化Akt蛋白、磷酸化Ser9 GSK 3β蛋白表达水平降低（P<0.01）,并呈一定浓度依赖性。结论1.冈田酸对体外原代培养的海马神经元的细胞活力以及突触蛋白的表达有明显的损伤作用。2.知母皂苷元能够显著抑制冈田酸诱导的体外原代培养海马神经元细胞损伤的作用,这种抑制作用可能是其通过激活了Akt/GSK 3β通路进而抑制了Tau蛋白的过度磷酸化。