目的:完善荷叶标准评价质量控制方法,为荷叶药材质量评价提供支持。优化固定化脂肪酶制备工艺,为制备方法提供理论依据。筛选荷叶不同极性部位的活性组分,为荷叶活性成分开发提供参考依据。方法:1.进行荷叶样品薄层色谱法鉴别研究,并用聚类分析法分析薄层色谱斑点类别,确定主要鉴别指标性成分。采用高效液相色谱法测定不同批次荷叶中生物碱以及黄酮类成分含量,通过相关性分析,确定关键活性成分。按照药典规定方法测定荷叶药材的水分、浸出物以及总灰分含量,判定药材质量。2.采用DPPH法测定荷叶提取物的清除自由基能力,并对成分含量进行相关性分析,确定主要活性成分。采用对硝基苯酚法测定荷叶提取物的脂肪酶抑制能力,并与成分含量进行相关性分析,确定主要活性成分。对比荷叶水煎煮和浸泡的2种方式,测定浸出率,确定袋装荷叶的最佳服用方式。3..采用SEM、TEM、FT-IR对Fe3O4-CS和固定化脂肪酶进行表征;对交联剂的浓度、交联时间、交联温度进行单因素考察;采用响应面设计法对脂肪酶固定化过程进行条件优化;对固定化酶进行了稳定性考察和循环使用次数测定。4.采用固定化酶对荷叶不同极性部分进行抑制活性测定分析,并筛选荷叶中具有抑制脂肪酶作用的活性成分。结果:1.11批样品聚类分析分为2大类,2-羟基-1-甲氧基阿朴啡、荷叶碱为薄层色谱鉴别特征斑点。黄酮类化合物中槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷含量最高,为9.93±3.06 mg/g;生物碱类化合物中荷叶碱含量最高,为2.48±1.80 mg/g;儿茶素、金丝桃苷、异槲皮苷、N-去甲基荷叶碱、2-羟基-1-甲氧基阿朴啡、莲碱含量均值分别为2.07±1.12、2.97±2.90、4.38±0.91、0.61±1.30、1.11±0.33、0.63±0.22 mg/g。各批次荷叶药材水分含量均未超过11%,浸出物含量均不少于12%,总灰分含量均未超过11%,符合药典规定。2.荷叶甲醇提取物在0.33 mg/m L的浓度下具有较强的抗氧化能力,在5 mg/m L浓度下具有一定的抑制脂肪酶能力。荷叶抗氧化活性与儿茶素、金丝桃苷、2-羟基-1-甲氧基阿朴啡、N-去甲基荷叶碱、荷叶碱的含量均呈现正相关性。荷叶脂肪酶抑制率与金丝桃苷、2-羟基-1-甲氧基阿朴啡、N-去甲基荷叶碱、荷叶碱呈现正相关显著性。荷叶药材的服用方式以水煎煮效果较好。煎煮时间为60 min,荷叶成分提取含量相对较高。3.Fe3O4-CS和固定化酶的表征表明脂肪酶成功固定在载体上。确定了交联过程中交联剂浓度3%,交联时间为2 h,交联温度为45℃;确定了固化酶的制备工艺为p H 8.1,温度40℃,酶浓度2.55 mg/m L,反应时间2.3 h;固化酶第5天时酶活回收率为74%,重复使用3次后的酶活回收率为32%。4.75%甲醇提取荷叶的脂肪酶抑制率最好,抑制率为58.6%。氯仿层组分抑制率抑制率最高,为50.4%。荷叶中荷叶碱和2-羟基-1-甲氧基阿朴啡具有酶抑制作用,荷叶碱的抑制率为60.7%,2-羟基-1-甲氧基阿朴啡为44.4%。结论:1.采用HPLC法同时测定荷叶黄酮、生物碱成分,儿茶素、槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷、金丝桃苷、异槲皮苷、2-羟基-1-甲氧基阿朴啡、N-去甲基荷叶碱、荷叶碱、莲碱的含量分别为2.07±1.12、9.93±3.06、2.97±2.90、4.38±0.91、0.61±1.30、1.11±0.33、2.48±1.80、0.63±0.22 mg/g,确定2-羟基-1-甲氧基阿朴啡、N-去甲基荷叶碱、荷叶碱作为荷叶质量评价成分,为荷叶质量评价奠定基础,方法可行,可用于荷叶的质量控制。2.响应面设计方法优化固定化脂肪酶的制备工艺,确定制备工艺为p H 8.1,温度40℃,酶浓度2.55 mg/m L,反应时间2.3 h。该制备工艺合理可行,提高脂肪酶活性保持时间,为固定化酶制备提供依据。3.采用固定化酶技术筛选荷叶活性组分,筛选出荷叶中荷叶碱和2-羟基-1-甲氧基阿朴啡具有抑制脂肪酶的活性成分,其荷叶碱的抑制率为60.7%,2-羟基-1-甲氧基阿朴啡为44.4%,方法操作简单,分离效率高,易操作,为中药活性成分筛选提供研究支持。