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肠球菌可引起猪等多种动物和人发病，由于具有天然和获得性抗性能力，肠球菌对现有的抗生素均产生了不同程度的耐药性，且可通过质粒或基因转移的方式，将抗生素尤其是万古霉素抗性基因通过食物链由动物传播给人，或在其他细菌之间传递，这使得肠球菌感染的预防和治疗变得尤为重要。 肠球菌的致病主要是通过黏附、侵袭和机体损伤，其中黏附是疾病感染发生的关键一步。菌毛是细菌的表面黏附结构，菌体借助菌毛可牢固黏附在肠道上皮细胞及胞外基质，进而侵入到宿主机体内部，激发组织损伤，而且，ebp菌毛基因在动物源性粪肠球菌中分布广泛且高度保守，因此，研究其Ebp菌毛蛋白尤其是亚单位蛋白抗黏附、抗侵袭、抗吞噬、抗生物被膜生成以及对机体的免疫保护作用就成为预防和治疗肠球菌的关键。本试验利用已构建的猪源粪肠球菌重组亚单位蛋白EbpA、EbpB和EbpC等片段，免疫制备兔抗血清，通过重组亚单位蛋白Ebp片段的多抗血清对粪肠球菌生物被膜形成、黏附侵袭肠上皮细胞和逃逸小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力的影响及蛋白免疫保护作用进行研究，希望能对肠球菌的致病机理、预防和治疗提供理论依据。 对生物被膜形成的影响作用生物被膜是细菌抵抗外界不良环境影响的生物屏障。本试验利用生物被膜体外定量检测方法对粪肠球菌在不同环境（培养时间，培养基类型）下产生生物被膜的差异进行探究，在最适条件下用多克隆抗血清及纯化IgG与粪肠球菌N9、N41作用，比较其生物被膜形成量的变化。结果表明多抗血清EbpA1对粪肠球菌N41的生物被膜形成有明显阻断作用（P＜0.05）；多抗IgG EbpA1、EbpA3和EbpC1对粪肠球菌生物被膜的形成均有明显阻断作用（P＜0.05），其中EbpA1的阻断作用最强，其次是EbpC1。 对黏附侵袭猪肠道上皮细胞的影响作用细菌主要通过黏附侵袭和机体损伤感染导致疾病发生。本试验将多抗血清及其纯化IgG分别与粪肠球菌N9、N41在37℃下孵育后，感染细胞，观察其对细菌黏附侵袭细胞能力的影响。结果显示N41菌株的黏附侵袭率高于N9菌株(P＜0.01)。菌毛蛋白多抗EbpA1及EbpC1对试验菌株的黏附侵袭阻断能力最强，且分别与阴性对照组、空白对照组细菌的黏附侵袭率有明显差异（P＜0.05）。 对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬杀菌作用的影响本试验将N9、N41菌株与试验组血清（未灭活EbpA1和EbpC1蛋白多抗血清）、对照组血清（灭活EbpA1、EbpB1和EbpC1蛋白多抗血清）作用后，感染小鼠腹腔巨噬细胞，培养3h、6h、24h、48h和72h，通过BHI琼脂平板计数观察巨噬细胞吞噬细菌的CFU变化，以明确粪肠球菌在巨噬细胞内的存活情况。同时检测吞菌后巨噬细胞分泌细胞因子IFN-γ、IL-6和TNF-α含量的变化。结果显示试验组、对照组和空白对照组的菌株感染巨噬细胞，3h时巨噬细胞吞噬粪肠球菌的CFU最多，6h时巨噬细胞吞噬粪肠球菌的CFU大量减少，3h到6h时间段内巨噬细胞对菌株的杀菌作用最强（P＜0.01），3h时试验组血清EbpA1和EbpC1、对照组血清EbpA1和EbpC1分别与细菌作用后，感染巨噬细胞，结果试验组细菌的CFU小于对照组细菌的CFU（P＜0.01），对照组菌株的CFU大于空白对照组菌株的CFU（P＜0.05）。72h时N9、N41菌株的CFU约为3h时菌株CFU的4％、13%，说明部分粪肠球菌可以逃逸小鼠巨噬细胞的杀伤。细胞因子测定结果显示，对照组血清EbpA1与粪肠球菌N9和N41作用后感染巨噬细胞，细胞因子IFN-γ、IL-6、TNF-α的分泌量分别是空白对照组菌株N9和N41的2.08倍（P＜0.001）和1.95倍（P＜0.001）、1.75倍（P＜0.01）和1.23倍、1.63倍（P＜0.05）和1.25倍；EbpC1与粪肠球菌N9和N41作用后感染巨噬细胞，细胞因子IFN-γ、IL-6、TNF-α的分泌量分别是空白对照组菌株N9和N41的1.97倍（P＜0.001）和1.87倍（P＜0.001）、1.63倍（P＜0.01）和1.14倍、1.45倍和1.13倍。表明与对照组灭活血清EbpA1和EbpC1作用后的菌株感染巨噬细胞，能使其发生更强烈的免疫反应而促使炎症因子分泌的增加。 动物攻毒保护性研究小鼠免疫重组亚单位蛋白EbpA1、EbpB1和EbpC1后，进行全血调理吞噬试验和攻菌保护试验。结果显示，EbpA1免疫小鼠的全血杀菌能力最强，其次是EbpC1。EbpA1、EbpC1免疫小鼠的全血杀N9和N41菌株后存活的CFU分别是空白对照存活菌株N9和N41CFU的0.24倍（P＜0.05）和0.32倍（P＜0.05）、0.29倍（P＜0.05）和0.36倍（P＜0.05）。EbpA1免疫小鼠攻菌N9、N41的致死保护率是70%和70%、EbpC1免疫小鼠攻菌N9、N41的致死保护率是70%和80%。说明菌毛重组亚单位蛋白片段EbpA1和EbpC1有较强的免疫保护作用。 综上所述，表达的重组亚单位蛋白EbpA1和EbpC1可诱导试验动物机体产生相对应的特异性抗体，且对动物有较强的免疫保护作用。为研制粪肠球菌基因工程亚单位疫苗提供了理论基础和试验依据。