【摘 要】
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目的:本研究主要探讨小檗碱对钙盐诱导的主动脉瓣膜间质细胞成骨分化的影响及其机制,为钙化性主动脉瓣膜病的临床治疗提供新的理论思路。方法:分别收集3例钙化和非钙化的主动脉瓣膜组织进行免疫组化和Western blot检测相关成骨、炎症和纤维化指标的表达情况;成功分离猪主动脉瓣膜间质细胞后,MTT实验确定在不影响细胞活力的情况下小檗碱处理瓣膜间质细胞的最适浓度范围;使用钙盐培养基诱导瓣膜间质细胞成骨分化
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目的:本研究主要探讨小檗碱对钙盐诱导的主动脉瓣膜间质细胞成骨分化的影响及其机制,为钙化性主动脉瓣膜病的临床治疗提供新的理论思路。方法:分别收集3例钙化和非钙化的主动脉瓣膜组织进行免疫组化和Western blot检测相关成骨、炎症和纤维化指标的表达情况;成功分离猪主动脉瓣膜间质细胞后,MTT实验确定在不影响细胞活力的情况下小檗碱处理瓣膜间质细胞的最适浓度范围;使用钙盐培养基诱导瓣膜间质细胞成骨分化,同时加入小檗碱处理,Western blot和Q-PCR检测相关成骨和纤维化指标的变化情况;ALP染色和茜素红S染色分别检测瓣膜间质细胞早期及晚期成骨分化能力;Western blot检测钙盐培养基和小檗碱处理瓣膜间质细胞ERK1/2和NF-κB信号通路的激活情况,并加入抑制剂进一步验证。结果:与非钙化瓣膜组织相比,钙化瓣膜组织标本相关成骨、纤维化和炎症指标均上调;且小檗碱能在不影响细胞活力的情况下降低钙盐培养基诱导的瓣膜间质细胞的相关成骨和纤维化指标的上调,降低ALP活性和钙盐沉积;同时小檗碱也能降低钙盐培养基诱导ERK1/2和NF-κB信号通路的激活,且加入抑制剂验证的结果与小檗碱处理的结果一致。结论:小檗碱可以抑制瓣膜间质细胞向肌成纤维细胞或成骨细胞样细胞分化,其机制可能与ERK1/2和NF-κB信号通路的抑制有关。
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