【摘 要】
：
软组织肉瘤是一类间充质起源的罕见恶性肿瘤,因其病理亚型多,术后的复发、转移率较高,对全身化疗不敏感,导致传统治疗方式收效甚微。近年研究发现,染色体凝聚因子1（RCC1）作为核质转运过程中的重要蛋白之一,通过介导的细胞周期蛋白核质转运过程参与细胞周期调控。S期相关蛋白2（Skp2）作为重要的细胞周期调控蛋白,—直是国内外研究的热点,其在多种肿瘤中高表达,并且其胞质定位与肿瘤的进展及转移显著正相关。现
论文部分内容阅读
软组织肉瘤是一类间充质起源的罕见恶性肿瘤,因其病理亚型多,术后的复发、转移率较高,对全身化疗不敏感,导致传统治疗方式收效甚微。近年研究发现,染色体凝聚因子1（RCC1）作为核质转运过程中的重要蛋白之一,通过介导的细胞周期蛋白核质转运过程参与细胞周期调控。S期相关蛋白2（Skp2）作为重要的细胞周期调控蛋白,—直是国内外研究的热点,其在多种肿瘤中高表达,并且其胞质定位与肿瘤的进展及转移显著正相关。现阶段关于RCC1与Skp2之间的相关性研究寥寥可数,二者之间内在联系尚不明确。因此,本课题旨在研究RCC1对于Skp2蛋白稳定性、核质转运的调节与机制,探索靶向抑制RCC1调节Skp2核质分布进而抑制软组织肉瘤细胞周期进程及增殖的效果,以及评价以RCC1为靶点抑制软组织肉瘤进展的潜在临床价值。主要进行以下研究内容:（1）细胞模型的构建。利用慢病毒包装系统,成功获得TRC-ctrl、shRCC1#1、shRCC1#2三种敲降慢病毒,对脂肪肉瘤SW872细胞进行慢病毒感染和嘌呤霉素筛选,并从mRNA水平以及蛋白水平证实敲减效果;成功构建SW872TRC-ctrl（SCR,control）细胞、SW872shRCC1#1（sh1）细胞和SW872shRCC1#2（sh2）软组织肉瘤细胞模型,为后期的体外实验提供条件。（2）靶向敲减RCC1抑制软组织肉瘤细胞的生长、增殖。通过绘制细胞生长曲线、细胞活性监测以及平板克隆形成,我们发现敲减RCC1能够明显抑制SW872细胞的生长、增殖和迁移。使用流式细胞术分析细胞周期占比和BrdU掺入分析等实验,我们发现敲减RCC1通过抑制肿瘤细胞DNA合成,诱导G1-S细胞周期阻滞,从而抑制软组织肉瘤细胞生长和增殖。（3）RCC1与Skp2间相互关系研究。通过实时荧光定量PCR和蛋白印迹,发现敲减RCC1在不影响Skp2转录水平的情况下,下调Skp2的蛋白水平。我们通过免疫共沉淀证实RCC1与Skp2之间存在蛋白质相互结合;进一步通过核质组分分离和免疫荧光实验,揭示敲减RCC1能导致Skp2蛋白的细胞核滞留;通过蛋白稳定性实验和泛素化水平分析,证实敲减RCC1通过促进Skp2蛋白的泛素-蛋白酶体降解途径,从降低Skp2的蛋白稳定性,缩短Skp2蛋白半衰期。以上结果提示,RCC1可通过调控Skp2蛋白的核质分布,进而影响Skp2蛋白泛素化和蛋白稳定性。本课题利用构建的RCC1敲减细胞模型,证实了靶向敲减RCC1显著降低Skp2蛋白半衰期和蛋白稳定性,导致Skp2蛋白水平下调;进一步揭示,RCC1参与物质的核质转运,敲减RCC1,导致Ran-GDP和Ran-GTP的转化受阻,进而降低Skp2蛋白的细胞核输出,使积累的Skp2在核内被泛素化降解。另一方面,通过实验证实了敲减RCC1可以导致肿瘤细胞的G1-S期阻滞,并抑制其生长、增殖能力。这些研究结果首次揭示了 RCC1作为核质转运调控因子参与癌蛋白Skp2的核质转运及蛋白周转过程的新机制;为后续RCC1在肿瘤发生发展中的深入功能研究奠定了基础,也为以Skp2为靶点的临床肿瘤治疗提供了新的思路。
其他文献
党的十九大报告再次明确提出,应尽快建立健全基本公共服务体系,不断满足人民日益增长的美好生活需要。卫生健康系统以“委托代理”方式缔约,能有效盘活社会资源,促进卫生健康系统内部审计质量的稳步提升。另一方面,自2018年1月1日起施行的《卫生计生系统内部审计工作规定》指明:“内部审计机构根据审计业务的需要,可以向社会购买审计服务,委托具有相应资质的社会中介机构开展内部审计工作,并监督检查审计业务质量。”
保护乡村生态环境,夯实乡村治理根基,加速美丽乡村建设已成为新时期党和国家农业农村工作的重心。2013年中央一号文件第一次明确提出着力建设美丽乡村的长期奋斗目标,2021年中央一号文件更是把乡村振兴摆在社会主义现代化建设的重要位置,美丽乡村建设作为乡村振兴战略落地的关键抓手,对实现国家第十四个五年规划目标有着重要意义。水资源是乡村生态环境的重要组成部分,对水资源的保护在美丽乡村建设中至关重要。开展水
目的:探讨sGP130干预对小鼠角膜新生血管的影响及机制。方法:选择合适浓度的IL-6/s IL-6R对人脐带静脉内皮细胞（Human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）进行诱导。使用sGP130药物干预,western blot、q PCR等实验手段观察蛋白水平及相关因子m RNA表达水平的变化,从而探讨其干预效果。用合适浓度的氢氧化钠构建小鼠角膜碱烧
目的:采用sgp130干预IL-6反式信号转导途径,通过体内实验和体外实验相结合探索sgp130干预糖尿病血-视网膜屏障损害的效应及机制,为早期糖尿病视网膜病变的防治提供新的方向。方法:基于人脐带内皮细胞（HUVEC）添加h IL-6/sh IL-6Rα和COCl2培养建立缺氧/炎症细胞模型,采用sgp130进行干预。CCK8法检测细胞生存率;Western Blot和RT-q PCR检测Occl
近年来我国持续深化对房地产市场的宏观调控,一系列促进房地产市场稳定发展、稳定房价的措施相继出台。面对改革、融资渠道持续收紧、市场竞争日益激烈等一系列行业形势的变化,一部分中小企业成为被并购的目标或者选择退出,房地产企业的内部资源整合需求不断加剧,投资并购已成为企业发展的日常业务,并购交易数量与频率与日俱增,企业并购行为也逐渐显现出连续并购的新趋势。然而,连续并购本身并不是企业进行连续并购的目标,为
作为第一个被报道的抑制基因,RB1突变失活或其蛋白p Rb磷酸化失活与多种癌症的发生和进展密切相关,寻找和鉴定针对RB1缺失相关肿瘤的抑制靶标具有重要的理论和临床价值。TAZ蛋白作为Hippo通路中重要的转录辅激活因子,参与细胞增殖、分化以及凋亡等过程,并且在肿瘤的发展过程中也发挥着重要作用。p Rb-E2F通路与Hippo通路的关联性研究在果蝇发育中被报道,然而在肿瘤细胞的增殖过程中二者是否存在
随着信息技术与经济社会的不断交汇融合,我国“互联网+”行动的积极推进,新时代信息技术的发展推动电商进程的同时,其相关业务必然会给传统的审计理论和审计技术带来新的冲击。伴随着这一审计信息化浪潮,注册会计师开展审计工作时必将会面临新的挑战,打破原有的审计思路和审计方法。此次受新冠肺炎疫情影响,各行业的发展受都到了一定程度的影响,但相较于传统行业,疫情带给电商企业的不仅仅是冲击,还有机遇。自疫情爆发,人
蛋白质二硫键异构酶（protein disulfide isomerase,PDI）是生物体内一种多功能酶,主要存在于内质网中,可担任氧化还原酶、异构酶、分子伴侣等,对蛋白质的正确折叠起着重要的作用。近年来发现PDI不仅存在于细胞内,在某些情况下还会分泌到胞外,调节细胞表面多种蛋白质的活性,影响凝血、损伤反应和血小板活化等多种生物学过程,在血栓形成的过程中发挥着重要作用。PDI通过调节血小板活化和
随着肠道菌群研究的深入及人们对功能性食品需求的增加,益生菌越来越受到广泛的关注。然而,益生菌口服后进入胃肠道所面临的艰难条件使其活力大大受损,进而影响其在肠道中的定植及益生效果。因此,选择合适的方法以保护益生菌的活力至关重要。微胶囊化是一种常用的作为保护益生菌免受外界不利环境条件影响的有效方法。对微胶囊化益生菌进行体外活力及体内定植研究可评价微胶囊化的有效性及益生菌能否充分发挥健康益处。本研究使用
几丁质是真菌细胞壁主要的结构组分。几丁质酶可有效降解几丁质产生可溶性低聚糖,从而阻断真菌菌丝延伸和抑制孢子萌发,达到抗真菌的效果。因此,几丁质酶在植物病原真菌的生物防治方面具有巨大的应用潜力。本课题创新性地使用钞票作为基因库来源,通过宏基因组学技术对钞票表面的所有微生物的基因组成及功能进行分析,鉴定到一条尚未有报道的全新几丁质酶基因,进一步克隆表达该几丁质酶,对其酶学性质和抗真菌性进行了评估和比较