一、研究目的肾脏缺血再灌注损伤（IRI）中内质网（ER）和线粒体的功能状态对于细胞命运至关重要,其中X-盒结合蛋白1（XBP1）是内质网应激（ERS）中一个重要的转录因子,研究表明,Noll样受体蛋白3（NLRP3）炎症小体与肾脏IRI密切相关。已有文献证实XBP1是NLRP3的上游分子,但是,在肾脏IRI中,XBP1如何调控NLRP3以及是否能够影响ER或者线粒体尚不清楚。本研究旨在通过体内和体外实验探讨肾脏IRI中XBP1-NLRP3信号通路调控ER-线粒体互作的分子机制和功能。二、方法对野生型小鼠和XBP1+/-小鼠进行45 min的左侧肾热缺血,然后切除另一侧肾脏并再灌注左肾24 h。使用小干扰RNA下调小鼠肾小管上皮细胞（TCMK-1）的XBP1表达,再进行24h缺氧（5%CO2、1%O2和94%N2）和2h复氧。通过血清尿素氮和肌酐检测、组织学染色、流式细胞术、原位末端转移酶标记染色以及透射电子显微镜来评估组织和细胞损伤程度。使用蛋白质印迹、免疫荧光染色、免疫组化、免疫电镜和ELISA分析组织和细胞中相关蛋白质的表达或定位。基于热力学上的亲和力分析预测XBP1与NLRP3启动子结合的作用方式,然后通过双荧光素酶报告基因分析证实。三、结果IRI后,相比于野生型小鼠,XBP1+/-小鼠肾脏损伤更轻:血清尿素氮,肌酐,炎症因子白介素-1β和白介素-18水平更低。同时,组织总活性氧、细胞色素c、Caspase-9的减少和透射电镜下线粒体形态的改变证实了 XBP1不足对线粒体结构的保护效果,XBP1+/-小鼠存活率显著提高。在体外实验中,缺氧复氧导致NLRP3表达以及与内质网、线粒体的共定位增加,下调XBP1后,NLRP3随之减少,Caspase-1、GSDMD以及其他凋亡相关分子活化受到抑制。干扰XBP1蛋白表达减少了TCMK-1细胞中NLRP3介导的线粒体损伤并降低了线粒体活性氧的产生,NLRP3、内质网和线粒体三者共定位减少。双荧光素酶试验显示,剪接的XBP1亚型可能直接结合到NLRP3启动子上发挥其作用。四、结论XBP1作为ERS中的一个重要转录因子,其下调抑制了与线粒体共定位的NLRP3的表达,从而减轻了 IRI中线粒体的损伤,改善肾脏功能,提高小鼠生存率,这可能是急性肾损伤中ER-线粒体互作的重要通路之一。XBP1亚型结合到NLRP3启动子上发挥调节作用,其可作为无菌性肾脏损伤的调节剂以及潜在治疗靶点。