【摘 要】
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目的:为建立人肺表面活性物质相关蛋白C(SP-C)转基因动物乳腺生物反应器,构建乳腺特异真核表达载体,并检测在小鼠体内表达情况,为转基因动物研制奠定基础。
方法:以山羊
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目的:为建立人肺表面活性物质相关蛋白C(SP-C)转基因动物乳腺生物反应器,构建乳腺特异真核表达载体,并检测在小鼠体内表达情况,为转基因动物研制奠定基础。
方法:以山羊外周血提取的基因组DNA为模板,扩增山羊B酪蛋白5'端基因启动子片段作为调控序列,包括山羊β酪蛋白基因启动子以及外显子1,2和内含子1共约6.7kb的DNA序列。用NotⅠ和BamHⅠ双酶切β酪蛋白DNA序列及真核表达载体pcDNA3.1(+)/SP-C,胶回收后体外连接,构建成乳腺特异真核表达质粒,经测序后,采用直接注射法转染至哺乳期的昆明白纯种小鼠乳腺组织中,采用RT-PCR检测SP-C表达。
结果:酶切及测序鉴定表明,山羊β酪蛋白基因启动子片段与pcDNA3.1(+)/SP-C体外重组成功命名为乳腺特异真核表达载体。该表达载体能在小鼠乳腺组织中表达SP-C。
结论:采用体外重组技术,成功地将山羊β酪蛋白基因启动子片段插入到了真核表达载体pcDNA3.1(+)/SP-C中。乳腺特异真核表达载体能在小鼠乳腺组织中表达SP-C。
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