神经炎症在中枢神经系统疾病中扮演重要角色,小胶质细胞活化是神经炎症的显著特征,在病原体感染或损伤时,小胶质细胞迅速活化,进而增殖并分泌炎症因子,迁移并增加吞噬,引发一系列炎症反应。在这些炎症反应发生时,常伴随细胞内钙稳态的失衡,靶向钙稳态调节进而调控神经炎症成为治疗相关神经系统疾病的重要方向。Calhm2是一类钙稳态调节蛋白,可以介导ATP的释放及钙离子的运输,通过靶向Calhm2可以有效改善神经炎症水平,但具体机制仍未明确。为了研究Calhm2在神经炎症中扮演的角色,我们首先体外培养了Calhm2敲除的原代小胶质细胞,利用脂多糖（LPS）诱导构建神经炎症模型,结果表明Calhm2敲除的原代小胶质细胞其LPS诱导的炎症水平相较正常原代小胶质细胞是显著降低的,进一步发现敲低Calhm2的BV2细胞其LPS诱导的神经炎症水平较正常BV2细胞也是降低的。与之相反的是过表达Calhm2的BV2细胞其LPS诱导的炎症水平相较正常BV2细胞则是显著升高的,这一表型在过表达Calhm2的IBMDM细胞中同样存在。以上结果提示Calhm2可正向调控小胶质细胞激活及炎症水平。为了进一步研究Calhm2调控小胶质细胞炎症水平的机制,我们利用过表达Calhm2的BV2细胞,通过Calhm2所携带的Flag标签进行免疫共沉淀实验,在银染实验证实Calhm2成功过表达和被富集后送样进行质谱分析。质谱分析结果显示EFhd2可能是Calhm2的相互作用蛋白。接下来我们利用HEK293T细胞并进行共转染带标签的EFhd2及Calhm2的质粒,免疫共沉淀实验证实EFhd2与Calhm2可以相互作用。为了研究Calhm2调控EFhd2的作用方式,我们首先探索了Calhm2敲除的原代小胶质细胞、Calhm2敲低的BV2细胞和Calhm2过表达的BV2细胞EFhd2的表达变化,结果显示Calhm2并不影响小胶质细胞内EFhd2蛋白水平,但是可以影响EFhd2的二聚体形式。进一步研究显示敲低EFhd2可以降低LPS诱导的炎症水平,这一结果与Calhm2敲低的结果相一致。由于我们之前的工作发现Calhm2在AD患者及模型小鼠中上升,接下来我们分析了EFhd2在AD患者及动物模型中的变化。结果显示,EFhd2在AD患者多个脑区及模型小鼠脑内均无明显变化,但在6月龄AD模型小鼠小胶质细胞中特异性上升,提示EFhd2在AD病理条件下的小胶质细胞中具有重要作用。目前缺乏可用的Calhm2商品化抗体,为了进一步研究Calhm2在不同类型神经细胞中的表达、定位以及在体功能,我们构建了Calhm2-C-HA的转基因小鼠,目前已完成基因型鉴定及表达量鉴定,后续需要进行细胞特异性表达鉴定以及进行在体功能等实验。综上所述,我们发现Calhm2参与LPS诱导的神经炎症的调节,进一步发现Calhm2与EFhd2的相互作用,并通过影响EFhd2的二聚化形式作用小胶质细胞的炎症反应。该研究进一步揭示了Calhm2在神经炎症中的作用和初步的分子机制,为相关神经系统疾病的治疗提供了理论依据。