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摘要：目的 研究通关藤苷H对小鼠Lewis肺癌的抑制作用，观察其对荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法 小鼠右腋皮下注射Lewis肺癌细胞，选取接种成功的荷瘤小鼠30只，随机分为模型组、环磷酰胺组、通关藤苷H组，每组10只。3组均从接种后第3日开始，每隔2 d，分别给予腹腔注射生理盐水、环磷酰胺、通关藤苷H， 0.2 mL/只。第21日，摘眼球取血，取肿瘤组织、脾、胸腺并分别称重，计算抑瘤率、脾指数和胸腺指数；采用ELISA法检测血清中白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-10（IL-10）的含量。结果 环磷酰胺组、通关藤苷H组的瘤质量均低于模型组，差异有统计学意义（P<0.05），抑瘤率分别为54.12%、25.68%；通关藤苷H组的胸腺指数与脾指数升高，环磷酰胺组则下降较为显著。ELISA法检测结果显示，与模型组比较，通关藤苷H组的IL-2水平明显升高，IL-10水平显著降低。结论 通关藤苷H可以抑制Lewis肺癌细胞生长和转移，调节免疫细胞因子IL-2、IL-10的表达水平，提高荷瘤小鼠的免疫功能。
关键词：通关藤苷H；Lewis肺癌；抑瘤率；脾指数；胸腺指数；白细胞介素-2；白细胞介素-10；小鼠
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2014）04-0063-04
通关藤苷H（tenacissoside H）为乌骨藤的单体类成分，属于C21甾体苷类。现代药理研究表明，乌骨藤含有独特化学成分C21甾体苷类，具有明显的抗肿瘤活性[1]。为进一步研究和开发乌骨藤，本实验拟对通关藤苷H抑制小鼠Lewis肺癌作用进行研究，并观察其对荷瘤小鼠的免疫功能的影响。
1 实验材料
1.1 动物与细胞株
Lewis肺癌荷瘤小鼠由中国医学科学院基础医学研究所细胞中心提供；SPF级C57BL/6小鼠，6～8周龄，共40只，体质量（20±2）g，雌雄各半，北京大学医学部实验动物科学部提供，动物许可证号：SCXK（京） 2011-0012。
1.2 药物
环磷酰胺（CTX）：0.2 g/瓶（江苏恒瑞医药股份有限公司出品，批号11021321），配制浓度为2 mg/mL，临用时用生理盐水配制所需浓度。通关藤苷H，20 mg/支购于中国食品药品检定研究院，批号111913-201202，配制浓度为2 mg/mL。
1.3 主要试剂与仪器
PBS缓冲液、BOUIN氏液（临用现配）；小鼠白细胞介素（IL）-2 ELISA试剂盒、小鼠IL-10 ELISA试剂盒（货号分别为EK0398、EK0417，武汉博士德生物工程有限公司）。SW-CJ-2FD型双人单面净化工作台（100级），上海博讯实业有限公司医疗设备厂；UB200i生物显微镜，重庆澳浦光电技术有限公司；Centrifuge 5804R台式大容量冷冻离心机，德国eppendorf公司；FlexStation3微孔板检测系统，美国分子仪器公司；DK-98-1型电热恒温水浴锅，天津市泰斯特仪器有限公司；实验室级超纯水器，上海canrex分析仪器有限公司；101-1AB电热鼓风干燥箱，天津市泰斯特仪器有限公司；AL104型万分之一电子分析天平，德国Mettler Toledo公司；隔水式电热恒温培养箱，上海市跃进医疗器械一厂；解剖显微镜。
2 实验方法
2.1 造模
将接种Lewis肺癌细胞10 d的2只瘤源小鼠脱颈椎处死，置75%酒精中浸泡消毒5 min，移入超净工作台内，剪开局部皮肤，分离瘤体，选择生长良好、无坏死的瘤组织，PBS洗净，剪碎，置于玻璃匀浆器中研磨，过200目不锈钢细胞筛，用PBS配制成活瘤细胞计数为2×106个/mL单细胞悬液，0.5%台盼蓝拒染色后显示活细胞比例大于95%，将配制好的细胞悬液放入无菌离心管内，按0.2 mL/只的接种量接种于小鼠右腋窝皮下。
2.2 分组与给药
接种72 h后，将造模成功的30只C57BL/6小鼠随机分为模型组、环磷酰胺组、通关藤苷H组，每组10只。3组均从接种后第3日开始，每隔2 d按0.2 mL/只腹腔注射给予生理盐水、CTX、通关藤苷H。
2.3 观测指标及样本采集
2.3.1 一般情况 实验过程中，记录并观察各组小鼠生存状况，包括精神状态、进食量、毛色、体质量等。
2.3.2 肿瘤生长曲线的绘制 给药后第7、10、13、16、19日用游标卡尺测量小鼠皮下肿瘤最长径（a）和最短径（b），计算肿瘤体积（V=π/6×a×b2）及各组平均值，绘制肿瘤生长曲线。
2.3.3 血清白细胞介素-2、白细胞介素-10检测 接种第20日，动物禁食不禁水，停药24 h后，采用摘眼球法取血，静置，3000 r/min离心5～10 min，取上清，分装待测。采用双抗体夹心ELISA检测血清中IL-2、IL-10含量。
2.3.4 抑瘤率、脾指数和胸腺指数测定 摘眼球取血后，剥离移植瘤，取脾和胸腺，并称重，计算抑瘤率[1-给药组平均瘤质量/对照组平均瘤质量×100%]、脾指数（脾质量/体质量）和胸腺指数（胸腺质量/体质量）。
2.3.5 Lewis肺癌转移率测定 取出小鼠完整肺，用BOUIN氏液（1.22%苦味酸饱和液、福尔马林、冰醋酸按15∶5∶1比例配制而成）固定24 h后放入梯度乙醇中，漂洗至黄色褪去，在解剖镜下观察小鼠肺部正反面及肺叶间的转移瘤灶，并在10倍放大镜下计数各肺叶表面的Lewis肺癌转移灶数，计算转移率[1-给药组平均瘤结节数/对照组平均瘤结节数×100%]。
3 统计学方法
采用SPSS17.0统计软件进行分析。实验数据以—x±s表示，组间比较用方差分析SNK法。P<0.05表示差异有统计学意义。 4 结果
4.1 生存状况
在治疗过程中，与模型组比较，通关藤苷H组小鼠生存状况好于CTX组。通关藤苷H组小鼠精神状态较好，进食增多，体质量增加，毛色光润，活泼好动；CTX组则食欲欠佳，体质量下降，毛色较差，喜静厌动。
4.2 通关藤苷H对小鼠Lewis肺癌生长的影响
与模型组比较，通关藤苷H组在前13 d内对小鼠肿瘤体积的影响并不明显，但之后有波动，呈现先升后降；CTX组小鼠的肿瘤生长较慢，提示CTX对小鼠Lewis肺癌具有较好的抑制作用。与模型组比较，通关藤苷H组小鼠的体质量明显增加，CTX组小鼠体则呈现缓慢下降趋势，提示通关藤苷组小鼠的生存质量好于模型组和CTX组。见图1、图2。与模型组比较，CTX组与通关藤苷H组小鼠瘤质量降低，差异有统计学意义（P<0.01）；CTX组与通关藤苷H组瘤质量比较差异（P<0.01）。见表1。
4.3 通关藤苷H对荷瘤小鼠血清白细胞介素-2、白细胞介素-10的影响
与模型组比较，CTX组和通关藤苷H组的IL-2水平明显升高、IL-10水平均降低，但通关藤苷H组的IL-10水平略高于CTX组。见表2。
4.4 通关藤苷H对小鼠Lewis肺癌转移的抑制作用
与模型组比较，CTX组、通关藤苷H组的肺癌转移灶数及发生转移例数均较少。见表3。
4.5 通关藤苷H对荷瘤小鼠免疫器官的影响
与模型组比较，CTX组的脾脏指数与胸腺指数均较低，通关藤苷H组的脾脏指数略高，但胸腺指数略低；通关藤苷H组与CTX组相比，脾脏指数和胸腺指数均较高。说明CTX对小鼠的脾和胸腺有一定的损害，通关藤苷H对胸腺和脾则有促进作用，能刺激T细胞、B细胞生长，增强荷瘤小鼠免疫功能。见表4。
5 讨论
乌骨藤又名通关藤、通光藤、扁藤、下奶藤、大骨藤、百暗消等，为萝摩科牛奶菜属植物通光散Marsdenia tenacissima（Roxb.） Wight et Arn.的干燥藤茎，临床主要用于抗肿瘤，特别是对肺癌、胃癌、肝癌作用显著。王氏[2]曾对从乌骨藤茎中提取得到的通关藤苷L-P（tenacissoside L-P）5种新物质进行体外抗癌活性研究，发现在4种不同浓度下这5个化合物对人肝癌细胞Bel-7402，小鼠结肠癌细胞C-26以及小鼠肝癌细胞Heapal-6的肿瘤细胞生长均有抑制作用。通关藤苷H亦从乌骨藤的茎中分离而得到[3]，作为C21甾体苷类成分，同样被认为是乌骨藤发挥抗肿瘤作用的活性物质，但迄今为止，有关通关藤苷H抗肺癌的相关研究甚少。通过本实验，笔者发现通关藤苷H对小鼠Lewis肺癌有一定的抑制作用，并且能提高荷瘤小鼠的免疫功能。
目前，动物实验和临床观察，表明恶性肿瘤的发生、发展、患者对治疗措施的疗效和患者的存活期都与机体的免疫状态有密切关系[4]。当宿主免疫功能低下或受抑制时，肿瘤发生率增高。IL-2首先被发现对骨髓来源的T细胞有生长促进作用，能刺激T细胞的生长和分化，是机体免疫调节中最重要的细胞因子之一，可激活自然杀伤细胞、巨噬细胞等，促进CTL功能，从而杀灭肿瘤细胞。IL-10是一种抑制细胞因子合成的因子，由Th2细胞和癌细胞分泌，可抑制活化的单核细胞产生细胞因子，抑制Th1细胞因子的产生，促进B细胞增殖，是具有多向性的强免疫抑制因子，能改变机体的免疫应答和MHCⅡ类抗原的表达，并介导Th1和Th2类T细胞之间的相互调节[5]。而机体的Th1/Th2免疫反应状态是近年来国内外研究的热点之一[6-8]，促使肿瘤细胞由Th2向Th1逆转是肿瘤免疫治疗的新途径。潘氏等[9]研究表明，抑制性细胞因子IL-10升高可打乱机体Th1/Th2的平衡状态，导致免疫功能的失调。
本实验结果显示，与模型组比较，通关藤苷H组IL-2水平明显提高，IL-10水平明显降低，差异有统计学意义（P<0.05），说明通关藤苷H可能是通过调节反映免疫平衡状态的Th1/Th2相关细胞因子的表达水平而发挥抗肿瘤作用。此外，通关藤苷H组的瘤质量、肺灶转移数目均低于模型组，提示通关藤苷H具有抑制肺癌细胞转移的作用，抑瘤率为25.68%。CTX对Lewis肺癌具有很好的抑制作用，抑瘤率达54.12%，但同时却降低了荷瘤小鼠的生存质量，该组小鼠的脾指数、胸腺指数均低于模型组和通关藤苷H组，提示该组荷瘤小鼠的免疫能力有所降低，这可能与CTX的毒副作用有关。另外，不难看出，CTX对Lewis肺癌的抑瘤率达到了通关藤苷H的2倍多，需要说明的是，在本实验中，为了消除影响，通光藤苷H与CTX同样采用腹腔注射给药，但实际给药时，通光藤苷H并不是澄清制剂，这可能是导致实验出现此结果的原因之一。
总之，通关藤苷H可以抑制小鼠Lewis肺癌细胞生长、降低肺转移灶数目及增强荷瘤小鼠机体免疫功能，其抗肿瘤的作用机制可能与调节Th1/Th2相关细胞因子的表达有关。
参考文献：
[1] 蔡兴东，刘新，钟国跃.抗癌中药乌骨藤的研究进展[J].井冈山学院学报：自然科学版，2005，26（2）：123-125.
[2] 王曙.通光藤抗癌活性物质基础及其制剂研究[D].成都：四川大学， 2006.
[3] Chen JJ， Zhang ZX， Zhou J. New C21 steroidal glycosides from M arsden in tenacissina[J]. Acta Bot Yunnan，1999，21（3）：369-377.
[4] 陈意生，史景泉.肿瘤分子细胞生物学[M].北京：人民军医出版社， 2004：198-221.
[5] 何维.医学免疫学[M].2版.北京：人民卫生出版社，2010：414.
[6] Girkontaite， Urbonaviviute V， Massda D， et al. Apoptotic cells selectively suppress the Th1 cytokine interferon gamma instimulated human peripheral blood mononuclear cells and shift the Th1/Th2 balance towards Th2[J]. Autoimmunity，2007，40（4）：327-330.
[7] Mariani V， Gilles S， Jakob T， et al. Immunomodulatoty mediators from pollen enhance the migratory capacity cells and license them for Th2 attraction[J]. J Immunol，2007，178（12）：7623-7631.
[8] Chechlinska M， Duma A， Swierkowska K， et al. Sera of lung cancer patients affect the release of Th1， Th2 and monocyte-derived cylokines， and the expression of IL-2R alpha by normal， cell stimulated mononuclear cell[J]. Cell Mol Biol Lett，2004，9（1）：69-81.
[9] 潘玉真，殷东风.柴胡龙牡汤对Lewis肺癌小鼠细胞免疫功能的影响[J].临床肿瘤学杂志，2011，16（3）：211-215.
（收稿日期，2013-08-16，编辑：华强）
关键词：通关藤苷H；Lewis肺癌；抑瘤率；脾指数；胸腺指数；白细胞介素-2；白细胞介素-10；小鼠
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2014）04-0063-04
通关藤苷H（tenacissoside H）为乌骨藤的单体类成分，属于C21甾体苷类。现代药理研究表明，乌骨藤含有独特化学成分C21甾体苷类，具有明显的抗肿瘤活性[1]。为进一步研究和开发乌骨藤，本实验拟对通关藤苷H抑制小鼠Lewis肺癌作用进行研究，并观察其对荷瘤小鼠的免疫功能的影响。
1 实验材料
1.1 动物与细胞株
Lewis肺癌荷瘤小鼠由中国医学科学院基础医学研究所细胞中心提供；SPF级C57BL/6小鼠，6～8周龄，共40只，体质量（20±2）g，雌雄各半，北京大学医学部实验动物科学部提供，动物许可证号：SCXK（京） 2011-0012。
1.2 药物
环磷酰胺（CTX）：0.2 g/瓶（江苏恒瑞医药股份有限公司出品，批号11021321），配制浓度为2 mg/mL，临用时用生理盐水配制所需浓度。通关藤苷H，20 mg/支购于中国食品药品检定研究院，批号111913-201202，配制浓度为2 mg/mL。
1.3 主要试剂与仪器
PBS缓冲液、BOUIN氏液（临用现配）；小鼠白细胞介素（IL）-2 ELISA试剂盒、小鼠IL-10 ELISA试剂盒（货号分别为EK0398、EK0417，武汉博士德生物工程有限公司）。SW-CJ-2FD型双人单面净化工作台（100级），上海博讯实业有限公司医疗设备厂；UB200i生物显微镜，重庆澳浦光电技术有限公司；Centrifuge 5804R台式大容量冷冻离心机，德国eppendorf公司；FlexStation3微孔板检测系统，美国分子仪器公司；DK-98-1型电热恒温水浴锅，天津市泰斯特仪器有限公司；实验室级超纯水器，上海canrex分析仪器有限公司；101-1AB电热鼓风干燥箱，天津市泰斯特仪器有限公司；AL104型万分之一电子分析天平，德国Mettler Toledo公司；隔水式电热恒温培养箱，上海市跃进医疗器械一厂；解剖显微镜。
2 实验方法
2.1 造模
将接种Lewis肺癌细胞10 d的2只瘤源小鼠脱颈椎处死，置75%酒精中浸泡消毒5 min，移入超净工作台内，剪开局部皮肤，分离瘤体，选择生长良好、无坏死的瘤组织，PBS洗净，剪碎，置于玻璃匀浆器中研磨，过200目不锈钢细胞筛，用PBS配制成活瘤细胞计数为2×106个/mL单细胞悬液，0.5%台盼蓝拒染色后显示活细胞比例大于95%，将配制好的细胞悬液放入无菌离心管内，按0.2 mL/只的接种量接种于小鼠右腋窝皮下。
2.2 分组与给药
接种72 h后，将造模成功的30只C57BL/6小鼠随机分为模型组、环磷酰胺组、通关藤苷H组，每组10只。3组均从接种后第3日开始，每隔2 d按0.2 mL/只腹腔注射给予生理盐水、CTX、通关藤苷H。
2.3 观测指标及样本采集
2.3.1 一般情况 实验过程中，记录并观察各组小鼠生存状况，包括精神状态、进食量、毛色、体质量等。
2.3.2 肿瘤生长曲线的绘制 给药后第7、10、13、16、19日用游标卡尺测量小鼠皮下肿瘤最长径（a）和最短径（b），计算肿瘤体积（V=π/6×a×b2）及各组平均值，绘制肿瘤生长曲线。
2.3.3 血清白细胞介素-2、白细胞介素-10检测 接种第20日，动物禁食不禁水，停药24 h后，采用摘眼球法取血，静置，3000 r/min离心5～10 min，取上清，分装待测。采用双抗体夹心ELISA检测血清中IL-2、IL-10含量。
2.3.4 抑瘤率、脾指数和胸腺指数测定 摘眼球取血后，剥离移植瘤，取脾和胸腺，并称重，计算抑瘤率[1-给药组平均瘤质量/对照组平均瘤质量×100%]、脾指数（脾质量/体质量）和胸腺指数（胸腺质量/体质量）。
2.3.5 Lewis肺癌转移率测定 取出小鼠完整肺，用BOUIN氏液（1.22%苦味酸饱和液、福尔马林、冰醋酸按15∶5∶1比例配制而成）固定24 h后放入梯度乙醇中，漂洗至黄色褪去，在解剖镜下观察小鼠肺部正反面及肺叶间的转移瘤灶，并在10倍放大镜下计数各肺叶表面的Lewis肺癌转移灶数，计算转移率[1-给药组平均瘤结节数/对照组平均瘤结节数×100%]。
3 统计学方法
采用SPSS17.0统计软件进行分析。实验数据以—x±s表示，组间比较用方差分析SNK法。P<0.05表示差异有统计学意义。 4 结果
4.1 生存状况
在治疗过程中，与模型组比较，通关藤苷H组小鼠生存状况好于CTX组。通关藤苷H组小鼠精神状态较好，进食增多，体质量增加，毛色光润，活泼好动；CTX组则食欲欠佳，体质量下降，毛色较差，喜静厌动。
4.2 通关藤苷H对小鼠Lewis肺癌生长的影响
与模型组比较，通关藤苷H组在前13 d内对小鼠肿瘤体积的影响并不明显，但之后有波动，呈现先升后降；CTX组小鼠的肿瘤生长较慢，提示CTX对小鼠Lewis肺癌具有较好的抑制作用。与模型组比较，通关藤苷H组小鼠的体质量明显增加，CTX组小鼠体则呈现缓慢下降趋势，提示通关藤苷组小鼠的生存质量好于模型组和CTX组。见图1、图2。与模型组比较，CTX组与通关藤苷H组小鼠瘤质量降低，差异有统计学意义（P<0.01）；CTX组与通关藤苷H组瘤质量比较差异（P<0.01）。见表1。
4.3 通关藤苷H对荷瘤小鼠血清白细胞介素-2、白细胞介素-10的影响
与模型组比较，CTX组和通关藤苷H组的IL-2水平明显升高、IL-10水平均降低，但通关藤苷H组的IL-10水平略高于CTX组。见表2。
4.4 通关藤苷H对小鼠Lewis肺癌转移的抑制作用
与模型组比较，CTX组、通关藤苷H组的肺癌转移灶数及发生转移例数均较少。见表3。
4.5 通关藤苷H对荷瘤小鼠免疫器官的影响
与模型组比较，CTX组的脾脏指数与胸腺指数均较低，通关藤苷H组的脾脏指数略高，但胸腺指数略低；通关藤苷H组与CTX组相比，脾脏指数和胸腺指数均较高。说明CTX对小鼠的脾和胸腺有一定的损害，通关藤苷H对胸腺和脾则有促进作用，能刺激T细胞、B细胞生长，增强荷瘤小鼠免疫功能。见表4。
5 讨论
乌骨藤又名通关藤、通光藤、扁藤、下奶藤、大骨藤、百暗消等，为萝摩科牛奶菜属植物通光散Marsdenia tenacissima（Roxb.） Wight et Arn.的干燥藤茎，临床主要用于抗肿瘤，特别是对肺癌、胃癌、肝癌作用显著。王氏[2]曾对从乌骨藤茎中提取得到的通关藤苷L-P（tenacissoside L-P）5种新物质进行体外抗癌活性研究，发现在4种不同浓度下这5个化合物对人肝癌细胞Bel-7402，小鼠结肠癌细胞C-26以及小鼠肝癌细胞Heapal-6的肿瘤细胞生长均有抑制作用。通关藤苷H亦从乌骨藤的茎中分离而得到[3]，作为C21甾体苷类成分，同样被认为是乌骨藤发挥抗肿瘤作用的活性物质，但迄今为止，有关通关藤苷H抗肺癌的相关研究甚少。通过本实验，笔者发现通关藤苷H对小鼠Lewis肺癌有一定的抑制作用，并且能提高荷瘤小鼠的免疫功能。
目前，动物实验和临床观察，表明恶性肿瘤的发生、发展、患者对治疗措施的疗效和患者的存活期都与机体的免疫状态有密切关系[4]。当宿主免疫功能低下或受抑制时，肿瘤发生率增高。IL-2首先被发现对骨髓来源的T细胞有生长促进作用，能刺激T细胞的生长和分化，是机体免疫调节中最重要的细胞因子之一，可激活自然杀伤细胞、巨噬细胞等，促进CTL功能，从而杀灭肿瘤细胞。IL-10是一种抑制细胞因子合成的因子，由Th2细胞和癌细胞分泌，可抑制活化的单核细胞产生细胞因子，抑制Th1细胞因子的产生，促进B细胞增殖，是具有多向性的强免疫抑制因子，能改变机体的免疫应答和MHCⅡ类抗原的表达，并介导Th1和Th2类T细胞之间的相互调节[5]。而机体的Th1/Th2免疫反应状态是近年来国内外研究的热点之一[6-8]，促使肿瘤细胞由Th2向Th1逆转是肿瘤免疫治疗的新途径。潘氏等[9]研究表明，抑制性细胞因子IL-10升高可打乱机体Th1/Th2的平衡状态，导致免疫功能的失调。
本实验结果显示，与模型组比较，通关藤苷H组IL-2水平明显提高，IL-10水平明显降低，差异有统计学意义（P<0.05），说明通关藤苷H可能是通过调节反映免疫平衡状态的Th1/Th2相关细胞因子的表达水平而发挥抗肿瘤作用。此外，通关藤苷H组的瘤质量、肺灶转移数目均低于模型组，提示通关藤苷H具有抑制肺癌细胞转移的作用，抑瘤率为25.68%。CTX对Lewis肺癌具有很好的抑制作用，抑瘤率达54.12%，但同时却降低了荷瘤小鼠的生存质量，该组小鼠的脾指数、胸腺指数均低于模型组和通关藤苷H组，提示该组荷瘤小鼠的免疫能力有所降低，这可能与CTX的毒副作用有关。另外，不难看出，CTX对Lewis肺癌的抑瘤率达到了通关藤苷H的2倍多，需要说明的是，在本实验中，为了消除影响，通光藤苷H与CTX同样采用腹腔注射给药，但实际给药时，通光藤苷H并不是澄清制剂，这可能是导致实验出现此结果的原因之一。
总之，通关藤苷H可以抑制小鼠Lewis肺癌细胞生长、降低肺转移灶数目及增强荷瘤小鼠机体免疫功能，其抗肿瘤的作用机制可能与调节Th1/Th2相关细胞因子的表达有关。
参考文献：
[1] 蔡兴东，刘新，钟国跃.抗癌中药乌骨藤的研究进展[J].井冈山学院学报：自然科学版，2005，26（2）：123-125.
[2] 王曙.通光藤抗癌活性物质基础及其制剂研究[D].成都：四川大学， 2006.
[3] Chen JJ， Zhang ZX， Zhou J. New C21 steroidal glycosides from M arsden in tenacissina[J]. Acta Bot Yunnan，1999，21（3）：369-377.
[4] 陈意生，史景泉.肿瘤分子细胞生物学[M].北京：人民军医出版社， 2004：198-221.
[5] 何维.医学免疫学[M].2版.北京：人民卫生出版社，2010：414.
[6] Girkontaite， Urbonaviviute V， Massda D， et al. Apoptotic cells selectively suppress the Th1 cytokine interferon gamma instimulated human peripheral blood mononuclear cells and shift the Th1/Th2 balance towards Th2[J]. Autoimmunity，2007，40（4）：327-330.
[7] Mariani V， Gilles S， Jakob T， et al. Immunomodulatoty mediators from pollen enhance the migratory capacity cells and license them for Th2 attraction[J]. J Immunol，2007，178（12）：7623-7631.
[8] Chechlinska M， Duma A， Swierkowska K， et al. Sera of lung cancer patients affect the release of Th1， Th2 and monocyte-derived cylokines， and the expression of IL-2R alpha by normal， cell stimulated mononuclear cell[J]. Cell Mol Biol Lett，2004，9（1）：69-81.
[9] 潘玉真，殷东风.柴胡龙牡汤对Lewis肺癌小鼠细胞免疫功能的影响[J].临床肿瘤学杂志，2011，16（3）：211-215.
（收稿日期，2013-08-16，编辑：华强）