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摘要：目的：探讨皮鳞癌一号方对皮鳞癌A431细胞增殖抑制作用。
方法：不同浓度的皮鳞癌一号方作用于A431细胞24h、48h、72h后，采用四甲基偶氮唑蓝（M1Tr）显色法检测细胞增殖抑制率。
结果：MTT法显示，随着皮鳞癌一号方作用的时间延长及剂量增加对A431细胞增殖的抑制作用增强，有明显的时间和剂量依赖性，与对照组比较差异有显著性（P<0.01）。
结论：皮鳞癌一号方具有抑制人皮鳞癌A431细胞的增殖及诱导细胞凋亡作用。
关键词：皮鳞癌一号方 A431细胞 细胞周期
【中图分类号】R4 【文献标识码】A 【文章编号】1671-8801（2013）10-0002-01
本实验选取的皮鳞癌一号方由遵义医药高等专科学校提供，每ml试液相当于生药2g，以其中所含白头翁中的三萜类皂苷含量作为质量评价标准。本研究通过体外实验，从皮鳞癌A431细胞周期探讨皮鳞癌一号方对SCC的影响。
1 材料
1.1 药物。皮鳞一号方由白头翁、莪术等中药组成，试验品由遵义医药高等专科学校提供，每ml相当于生药2g，以白头翁皂苷B4含量及浸膏收率作为质量控制标准，低温保存备用。
1.2 试剂。高糖的DMEM、胎牛血清购自Hyclone公司，MTT购自Amresco公司（201105）。
1.3 细胞系。A431细胞购自武汉大学中国典型培养物保藏中心。
2 方法
2.1 细胞培养。A431细胞培养于含10%胎牛血清、青霉素（100U/L）和链霉素（100U/L）的高糖DMEM培养基中，置于5%CO2、37℃和饱和湿度的培养箱中。
2.2 MTT法测定皮鳞癌一号方对A431细胞的增殖抑制作用。取对数生长期的细胞，调整细胞密度为1.25×105/ml，160μl/孔接种于96孔板。培养24h后，每孔加40μl不同浓度的药物，药物浓度设5个梯度，分别为原药的1/400、1/200、1/100、1/50、1/25。同时设空白调零组（加200μl无血清培养基）、阴性对照组（不加药物）、阳性对照组（5-Fu10μg/ml）。因皮鳞癌一号方有颜色，加设不同浓度颜色对照组。分别培养24h、48h、72h后，弃去上清，加200μl无血清培养基及20μlMTT（5mg/ml），置于二氧化碳培养箱培养4h后，弃上清，加150μlDMSO，振荡10min后，于酶联免疫检测仪490nm处测定吸光度值（OD值）。实验重复三次。
细胞生长抑制率（%）=1-（实验组OD-颜色对照组OD/阴性对照组OD-空白调零组OD）×100%。
2.3 统计学方法。采用SPSS13.0软件进行统计分析，所有计量资料用X±S表示，多组间比较采用单因素方差分析，所有检验均为双侧检验，并以α=0.05作为检验水准。P<0.05时认为有统计学意义。
3 结果
MTT法测定皮鳞癌一号方对A431细胞的增殖抑制作用。在浓度为1/400，1/200，1/100，1/50，1/25作用于A431细胞24h、48h、72h后，与阴性对照组比较，各浓度组对A431细胞均有增殖抑制作用，且随着药物浓度的增高和作用时间的延长，其对A431细胞的增殖抑制作用愈明显。见表1。
4 讨论
细胞周期是由DNA合成前期（G1期）、DNA合成期（s期）、DNA合成后期（G2期）、有丝分裂期（M期）组成。在细胞增殖周期中，G1期、s期、G2期、M期各自起到非常重要的作用。此外，细胞还可以从G1期暂时离开细胞周期，停止有丝分裂，进入G0期（静止期）。在G0期细胞接受外部信号刺激，决定细胞是进入S期进行DNA复制并完成分裂发生恶性增殖还是进入相对静止期G0期。如果阻止细胞由G0期进入S期，则肿瘤细胞的无限增殖可以得到控制[2]。
本实验显示：在浓度为1/400，1/200，1/100，1/50，1/25作用于A431细胞24h、48h、72h后，各浓度组对A431细胞均有增殖抑制作用。表明皮鳞癌一号方可以抑制皮鳞癌A431细胞增殖。
参考文献
[1] Sitko JC，Yeh B，Kim M，et a1.SOCS3 regulates p21 expression and cell cycle arrest in response to DNA damage[J].Cell Signal，2008.20（12）：2221-2230
[2] Chaudhry MA.Base excision repair of ionizing radiation-induced DNA damagein G1 and G2 cell cycle phases[J].Cancer Cell Int，2007，（7）：15
方法：不同浓度的皮鳞癌一号方作用于A431细胞24h、48h、72h后，采用四甲基偶氮唑蓝（M1Tr）显色法检测细胞增殖抑制率。
结果：MTT法显示，随着皮鳞癌一号方作用的时间延长及剂量增加对A431细胞增殖的抑制作用增强，有明显的时间和剂量依赖性，与对照组比较差异有显著性（P<0.01）。
结论：皮鳞癌一号方具有抑制人皮鳞癌A431细胞的增殖及诱导细胞凋亡作用。
关键词：皮鳞癌一号方 A431细胞 细胞周期
【中图分类号】R4 【文献标识码】A 【文章编号】1671-8801（2013）10-0002-01
本实验选取的皮鳞癌一号方由遵义医药高等专科学校提供，每ml试液相当于生药2g，以其中所含白头翁中的三萜类皂苷含量作为质量评价标准。本研究通过体外实验，从皮鳞癌A431细胞周期探讨皮鳞癌一号方对SCC的影响。
1 材料
1.1 药物。皮鳞一号方由白头翁、莪术等中药组成，试验品由遵义医药高等专科学校提供，每ml相当于生药2g，以白头翁皂苷B4含量及浸膏收率作为质量控制标准，低温保存备用。
1.2 试剂。高糖的DMEM、胎牛血清购自Hyclone公司，MTT购自Amresco公司（201105）。
1.3 细胞系。A431细胞购自武汉大学中国典型培养物保藏中心。
2 方法
2.1 细胞培养。A431细胞培养于含10%胎牛血清、青霉素（100U/L）和链霉素（100U/L）的高糖DMEM培养基中，置于5%CO2、37℃和饱和湿度的培养箱中。
2.2 MTT法测定皮鳞癌一号方对A431细胞的增殖抑制作用。取对数生长期的细胞，调整细胞密度为1.25×105/ml，160μl/孔接种于96孔板。培养24h后，每孔加40μl不同浓度的药物，药物浓度设5个梯度，分别为原药的1/400、1/200、1/100、1/50、1/25。同时设空白调零组（加200μl无血清培养基）、阴性对照组（不加药物）、阳性对照组（5-Fu10μg/ml）。因皮鳞癌一号方有颜色，加设不同浓度颜色对照组。分别培养24h、48h、72h后，弃去上清，加200μl无血清培养基及20μlMTT（5mg/ml），置于二氧化碳培养箱培养4h后，弃上清，加150μlDMSO，振荡10min后，于酶联免疫检测仪490nm处测定吸光度值（OD值）。实验重复三次。
细胞生长抑制率（%）=1-（实验组OD-颜色对照组OD/阴性对照组OD-空白调零组OD）×100%。
2.3 统计学方法。采用SPSS13.0软件进行统计分析，所有计量资料用X±S表示，多组间比较采用单因素方差分析，所有检验均为双侧检验，并以α=0.05作为检验水准。P<0.05时认为有统计学意义。
3 结果
MTT法测定皮鳞癌一号方对A431细胞的增殖抑制作用。在浓度为1/400，1/200，1/100，1/50，1/25作用于A431细胞24h、48h、72h后，与阴性对照组比较，各浓度组对A431细胞均有增殖抑制作用，且随着药物浓度的增高和作用时间的延长，其对A431细胞的增殖抑制作用愈明显。见表1。
4 讨论
细胞周期是由DNA合成前期（G1期）、DNA合成期（s期）、DNA合成后期（G2期）、有丝分裂期（M期）组成。在细胞增殖周期中，G1期、s期、G2期、M期各自起到非常重要的作用。此外，细胞还可以从G1期暂时离开细胞周期，停止有丝分裂，进入G0期（静止期）。在G0期细胞接受外部信号刺激，决定细胞是进入S期进行DNA复制并完成分裂发生恶性增殖还是进入相对静止期G0期。如果阻止细胞由G0期进入S期，则肿瘤细胞的无限增殖可以得到控制[2]。
本实验显示：在浓度为1/400，1/200，1/100，1/50，1/25作用于A431细胞24h、48h、72h后，各浓度组对A431细胞均有增殖抑制作用。表明皮鳞癌一号方可以抑制皮鳞癌A431细胞增殖。
参考文献
[1] Sitko JC，Yeh B，Kim M，et a1.SOCS3 regulates p21 expression and cell cycle arrest in response to DNA damage[J].Cell Signal，2008.20（12）：2221-2230
[2] Chaudhry MA.Base excision repair of ionizing radiation-induced DNA damagein G1 and G2 cell cycle phases[J].Cancer Cell Int，2007，（7）：15