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摘要：目的 建立复方天麻钩藤口腔崩解片的质量标准。方法 采用薄层色谱法对制剂中的天麻、钩藤、当归、白芍进行定性鉴别，采用高效液相色谱法测定制剂中的天麻素。结果 薄层鉴别图谱清晰，阴性对照无干扰。天麻素进样量在0.191 2～1.147 2 μg范围内线性关系良好（r=0.999 9），平均回收率为97.72%（RSD=1.40%，n=6）。结论 本方法简便、重复性好，可有效控制制剂的质量。
关键词：复方天麻钩藤口腔崩解片；质量标准；天麻素；高效液相色谱法
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2014）02-0085-03
复方天麻钩藤口腔崩解片是含有天麻、钩藤、当归、白芍的中药复方制剂，主要用于帕金森病的早期治疗和后期辅助治疗。帕金森病病理复杂[1]，临床无治疗作用确切的中成药制剂。患者需长期用药，药物应服用方便且吸收迅速。口腔崩解片较普通固体口服制剂吸收快，生物利用度高，服用方便，为一种新型固体速释制剂[2]，可满足临床应用要求。因此，笔者制备了复方天麻钩藤口腔崩解片，为了保证该制剂疗效，控制其内在质量，笔者对其质量控制方法进行了研究。
1 仪器与试药
LC-2010A型高效液相色谱仪（日本岛津CLASS-VP工作站）；AB135-S电子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；UV1100 型紫外分光光度计（上海天美科学仪器有限公司）；KQ-250型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。
天麻素对照品（批号110807-200205）、芍药苷对照品（批号110736-200833）、阿魏酸对照品（批号110773-200611）、钩藤对照药材（批号121190- 200402）均购自中国食品药品检定研究院，复方天麻钩藤口腔崩解片（自制，批号20110601、20110602、20110603）。
2 薄层鉴别
2.1 钩藤
取本品10片，研细，称取2 g，置锥形瓶中，加甲醇30 mL，超声处理30 min，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加5%氢氧化钠溶液20 mL使溶解，用三氯甲烷振摇提取2次，每次20 mL，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇0.5 mL使溶解，作为供试品溶液。取钩藤对照药材2 g，加甲醇30 mL，超声处理30 min，滤过，自“蒸干，残渣加5%氢氧化钠溶液20 mL使溶解”起，同法制成对照药材溶液。取缺钩藤的阴性对照样品2 g，按照供试品溶液制备方法制备钩藤阴性对照溶液。照薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录Ⅵ B]试验，吸取上述3种溶液各10 ?L，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-丙酮（1∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰。
2.2 当归
取本品20片，研细，称取5 g，置锥形瓶中，加甲醇25 mL，超声处理30 min，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加水20 mL使溶解，用乙醚振摇提取3次，每次20 mL，合并乙醚液，用2%碳酸钠溶液振摇提取3次，每次15 mL，合并碱液，用乙酸乙酯振摇提取3次，每次30 mL，弃去，碱液用稀盐酸调pH值至2，用乙醚振摇提取3次，每次30 mL，合并乙醚液，挥干，残渣加乙醇-5%乙酸（1∶4）混合溶液1 mL使溶解，作为供试品溶液[3]。取阿魏酸对照品适量，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。取缺当归阴性对照样品5 g，按照供试品溶液制备方法制备当归阴性对照溶液。照薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录Ⅵ B]试验，吸取上述3种溶液各10 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（2.5∶1∶1∶0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰。
2.3 白芍
取本品20片，研细，称取5 g，置锥形瓶中，加甲醇25 mL，超声处理30 min，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加水20 mL使溶解，用三氯甲烷振摇提取2次，每次20 mL，弃去三氯甲烷液，水液用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次20 mL，合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加甲醇5 mL使溶解，加于中性氧化铝柱（3 g，100～200目，内径15～20 mm），以40%甲醇溶液50 mL洗脱，收集洗脱液，水浴蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液[4]。取芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。取缺白芍的阴性对照样品5 g，按供试品溶液制备方法制备白芍阴性对照溶液。照薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录Ⅵ B]试验，吸取上述3种溶液各5 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇（4∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%硫酸香草醛乙醇溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。
3 含量测定
3.1 色谱条件与系统适用性试验
岛津C18柱（填料为5 μm，4.6 mm×250 mm）；流速1 mL/min；流动相：乙腈-0.05%磷酸溶液（3∶97）；柱温：30 ℃；检测波长：220 nm。理论板数按天麻素峰计算应不低于3500[5]。
3.2 对照品溶液的制备
取天麻素对照品适量，精密称定，加流动相制成每1 mL含38.24 μg的溶液，即得。
3.3 供试品溶液的制备方法
取本品10片，研细，取约2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加稀乙醇25 mL，称定质量，超声处理（250 W，40 kHz）30 min，放冷，再次称定质量，以稀乙醇补足减失的质量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10 mL，水浴蒸至近干，加流动相溶解并转移至10 mL量瓶中，并加流动相至刻度，摇匀，即得。 3.4 空白试验
取缺天麻的阴性样品，按“3.3”项下方法制备空白溶液，精密吸取对照品溶液、供试品溶液、空白溶液各10 ?L进样测定。结果空白溶液色谱图中，在与天麻素对照品及供试品溶液色谱图中相应的保留时间处，无色谱峰出现，表明其他组分无干扰。
3.5 标准曲线的制备
取天麻素对照品适量，精密称定（11.95 mg），置25 mL量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，作为贮备液（0.478 mg/mL）。分别精密量取贮备液1、2、3、4、5、6 mL，分别置于25 mL量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，分别进样10 ?L，以对照品的量（?g）为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y=885321X+7264.9，r=0.9999，天麻素进样量在0.1912～1.147 2 ?g范围内线性关系良好。
3.6 精密度试验
精密吸取天麻素对照品溶液（95.6 ?g/mL）10 ?L，连续进样6次，结果RSD=0.57%，表明仪器精密度良好。
3.7 稳定性试验
取本品（批号20110601），按“3.3”项下方法制备供试品溶液，分别测定样品放置0、2、4、6、8、10 h后的峰面积，结果峰面积的RSD=0.65%，表明供试品溶液在10 h内测定稳定。
3.8 重复性试验
取本品（批号20110601）6份，按“3.3”项下方法制备6份供试品溶液，测定结果天麻素含量，RSD=1.02%，表明本方法重复性良好。
3.9 加样回收率试验
取已知含量的样品（0.881 5 mg/g）6份，每份约1 g，精密称定，分别精密加入天麻素对照品稀乙醇溶液（38.24 ?g/mL）各25 mL，按“3.3”项下方法制备供试品溶液，测定，计算回收率，结果平均回收率为97.72%，RSD=1.40%。见表1。
3.10 样品含量测定
取批号分别为20110601、20110602、20110603的复方天麻钩藤口腔崩解片样品进样测定，结果3批样品中天麻素的含量分别为0.35、0.45、0.47 mg/片（n=2）。
4 讨论
试验对芍药苷的薄层鉴别方法进行考察，尝试用2010年版《中华人民共和国药典》（一部）药材项下白芍的定性鉴别方法，结果供试品色谱中出现较深的色带，干扰严重。分别将供试品经乙醚萃取除杂后正丁醇萃取和过氧化铝柱精制，但阳性结果均不明显，后采用文中所述方法，阳性结果较好。芍药苷含酯键，加碱易破坏[6]，故不能用碱液纯化或含碱展开系统，过中性氧化铝柱可充分除去酸性水溶物而不破坏芍药苷。
天麻为方中君药，其主要活性成分为总酚苷类物质，以天麻素为代表[5]。国家药典天麻药材项下及众多含天麻复方制剂研究文献中均对天麻素含量进行了测定，故本试验测定天麻素含量来控制制剂的质量。
参考文献：
[1] 卢芳，刘树民，杨婷婷.帕金森病的最新国内外研究进展[J].中国老年学杂志，2009，29（9）：1171-1174.
[2] 贺建昌，张建春，蒋雪涛.新型口服固体速释制剂——口腔速崩片[J].药学实践杂志，2000，18（3）：151-153.
[3] 盛伟，王丽，徐云，等.前列舒通胶囊薄层色谱鉴别研究[J].亚太传统医药，2009，5（4）：21-22.
[4] 王迅，周琴妹，吴旭彤，等.止泻合剂的质量标准研究[J].中国实验方剂学杂志，2013，19（2）：126-129.
[5] 冀小君，赵思俊，张福生，等.麻藤止眩散中天麻素的含量测定方法研究[J].中国实验方剂学杂志，2011，17（14）：73-75.
[6] 罗娟，呼延玲，刘晓玲.溶液pH对芍药苷稳定性的影响[J].中国药业， 2011，20（2）：26-27.
（收稿日期：2013-05-23，编辑：陈静）
关键词：复方天麻钩藤口腔崩解片；质量标准；天麻素；高效液相色谱法
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2014）02-0085-03
复方天麻钩藤口腔崩解片是含有天麻、钩藤、当归、白芍的中药复方制剂，主要用于帕金森病的早期治疗和后期辅助治疗。帕金森病病理复杂[1]，临床无治疗作用确切的中成药制剂。患者需长期用药，药物应服用方便且吸收迅速。口腔崩解片较普通固体口服制剂吸收快，生物利用度高，服用方便，为一种新型固体速释制剂[2]，可满足临床应用要求。因此，笔者制备了复方天麻钩藤口腔崩解片，为了保证该制剂疗效，控制其内在质量，笔者对其质量控制方法进行了研究。
1 仪器与试药
LC-2010A型高效液相色谱仪（日本岛津CLASS-VP工作站）；AB135-S电子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；UV1100 型紫外分光光度计（上海天美科学仪器有限公司）；KQ-250型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。
天麻素对照品（批号110807-200205）、芍药苷对照品（批号110736-200833）、阿魏酸对照品（批号110773-200611）、钩藤对照药材（批号121190- 200402）均购自中国食品药品检定研究院，复方天麻钩藤口腔崩解片（自制，批号20110601、20110602、20110603）。
2 薄层鉴别
2.1 钩藤
取本品10片，研细，称取2 g，置锥形瓶中，加甲醇30 mL，超声处理30 min，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加5%氢氧化钠溶液20 mL使溶解，用三氯甲烷振摇提取2次，每次20 mL，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇0.5 mL使溶解，作为供试品溶液。取钩藤对照药材2 g，加甲醇30 mL，超声处理30 min，滤过，自“蒸干，残渣加5%氢氧化钠溶液20 mL使溶解”起，同法制成对照药材溶液。取缺钩藤的阴性对照样品2 g，按照供试品溶液制备方法制备钩藤阴性对照溶液。照薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录Ⅵ B]试验，吸取上述3种溶液各10 ?L，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-丙酮（1∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰。
2.2 当归
取本品20片，研细，称取5 g，置锥形瓶中，加甲醇25 mL，超声处理30 min，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加水20 mL使溶解，用乙醚振摇提取3次，每次20 mL，合并乙醚液，用2%碳酸钠溶液振摇提取3次，每次15 mL，合并碱液，用乙酸乙酯振摇提取3次，每次30 mL，弃去，碱液用稀盐酸调pH值至2，用乙醚振摇提取3次，每次30 mL，合并乙醚液，挥干，残渣加乙醇-5%乙酸（1∶4）混合溶液1 mL使溶解，作为供试品溶液[3]。取阿魏酸对照品适量，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。取缺当归阴性对照样品5 g，按照供试品溶液制备方法制备当归阴性对照溶液。照薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录Ⅵ B]试验，吸取上述3种溶液各10 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（2.5∶1∶1∶0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰。
2.3 白芍
取本品20片，研细，称取5 g，置锥形瓶中，加甲醇25 mL，超声处理30 min，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加水20 mL使溶解，用三氯甲烷振摇提取2次，每次20 mL，弃去三氯甲烷液，水液用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次20 mL，合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加甲醇5 mL使溶解，加于中性氧化铝柱（3 g，100～200目，内径15～20 mm），以40%甲醇溶液50 mL洗脱，收集洗脱液，水浴蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液[4]。取芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。取缺白芍的阴性对照样品5 g，按供试品溶液制备方法制备白芍阴性对照溶液。照薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录Ⅵ B]试验，吸取上述3种溶液各5 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇（4∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%硫酸香草醛乙醇溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。
3 含量测定
3.1 色谱条件与系统适用性试验
岛津C18柱（填料为5 μm，4.6 mm×250 mm）；流速1 mL/min；流动相：乙腈-0.05%磷酸溶液（3∶97）；柱温：30 ℃；检测波长：220 nm。理论板数按天麻素峰计算应不低于3500[5]。
3.2 对照品溶液的制备
取天麻素对照品适量，精密称定，加流动相制成每1 mL含38.24 μg的溶液，即得。
3.3 供试品溶液的制备方法
取本品10片，研细，取约2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加稀乙醇25 mL，称定质量，超声处理（250 W，40 kHz）30 min，放冷，再次称定质量，以稀乙醇补足减失的质量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10 mL，水浴蒸至近干，加流动相溶解并转移至10 mL量瓶中，并加流动相至刻度，摇匀，即得。 3.4 空白试验
取缺天麻的阴性样品，按“3.3”项下方法制备空白溶液，精密吸取对照品溶液、供试品溶液、空白溶液各10 ?L进样测定。结果空白溶液色谱图中，在与天麻素对照品及供试品溶液色谱图中相应的保留时间处，无色谱峰出现，表明其他组分无干扰。
3.5 标准曲线的制备
取天麻素对照品适量，精密称定（11.95 mg），置25 mL量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，作为贮备液（0.478 mg/mL）。分别精密量取贮备液1、2、3、4、5、6 mL，分别置于25 mL量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，分别进样10 ?L，以对照品的量（?g）为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y=885321X+7264.9，r=0.9999，天麻素进样量在0.1912～1.147 2 ?g范围内线性关系良好。
3.6 精密度试验
精密吸取天麻素对照品溶液（95.6 ?g/mL）10 ?L，连续进样6次，结果RSD=0.57%，表明仪器精密度良好。
3.7 稳定性试验
取本品（批号20110601），按“3.3”项下方法制备供试品溶液，分别测定样品放置0、2、4、6、8、10 h后的峰面积，结果峰面积的RSD=0.65%，表明供试品溶液在10 h内测定稳定。
3.8 重复性试验
取本品（批号20110601）6份，按“3.3”项下方法制备6份供试品溶液，测定结果天麻素含量，RSD=1.02%，表明本方法重复性良好。
3.9 加样回收率试验
取已知含量的样品（0.881 5 mg/g）6份，每份约1 g，精密称定，分别精密加入天麻素对照品稀乙醇溶液（38.24 ?g/mL）各25 mL，按“3.3”项下方法制备供试品溶液，测定，计算回收率，结果平均回收率为97.72%，RSD=1.40%。见表1。
3.10 样品含量测定
取批号分别为20110601、20110602、20110603的复方天麻钩藤口腔崩解片样品进样测定，结果3批样品中天麻素的含量分别为0.35、0.45、0.47 mg/片（n=2）。
4 讨论
试验对芍药苷的薄层鉴别方法进行考察，尝试用2010年版《中华人民共和国药典》（一部）药材项下白芍的定性鉴别方法，结果供试品色谱中出现较深的色带，干扰严重。分别将供试品经乙醚萃取除杂后正丁醇萃取和过氧化铝柱精制，但阳性结果均不明显，后采用文中所述方法，阳性结果较好。芍药苷含酯键，加碱易破坏[6]，故不能用碱液纯化或含碱展开系统，过中性氧化铝柱可充分除去酸性水溶物而不破坏芍药苷。
天麻为方中君药，其主要活性成分为总酚苷类物质，以天麻素为代表[5]。国家药典天麻药材项下及众多含天麻复方制剂研究文献中均对天麻素含量进行了测定，故本试验测定天麻素含量来控制制剂的质量。
参考文献：
[1] 卢芳，刘树民，杨婷婷.帕金森病的最新国内外研究进展[J].中国老年学杂志，2009，29（9）：1171-1174.
[2] 贺建昌，张建春，蒋雪涛.新型口服固体速释制剂——口腔速崩片[J].药学实践杂志，2000，18（3）：151-153.
[3] 盛伟，王丽，徐云，等.前列舒通胶囊薄层色谱鉴别研究[J].亚太传统医药，2009，5（4）：21-22.
[4] 王迅，周琴妹，吴旭彤，等.止泻合剂的质量标准研究[J].中国实验方剂学杂志，2013，19（2）：126-129.
[5] 冀小君，赵思俊，张福生，等.麻藤止眩散中天麻素的含量测定方法研究[J].中国实验方剂学杂志，2011，17（14）：73-75.
[6] 罗娟，呼延玲，刘晓玲.溶液pH对芍药苷稳定性的影响[J].中国药业， 2011，20（2）：26-27.
（收稿日期：2013-05-23，编辑：陈静）