【摘 要】
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目的构建沉默Nrf2(Nuclear Factor-erythroid 2-related Factor 2,Nrf2)基因表达的RNA干扰质粒,建立稳定转染Nrf2干扰质粒的人支气管上皮细胞株BEAS-2B(Human Bronchial Cell
【机 构】
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泰山医学院公共卫生学院,郑州大学公共卫生学院,
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目的构建沉默Nrf2(Nuclear Factor-erythroid 2-related Factor 2,Nrf2)基因表达的RNA干扰质粒,建立稳定转染Nrf2干扰质粒的人支气管上皮细胞株BEAS-2B(Human Bronchial Cells),并对其在该细胞中的沉默效果进行鉴定。方法根据Genbank上公布的人Nrf2核苷酸序列设计4条RNA抑制靶序列。化学合成后载入PGU6/RFP/Neo质粒载体构建成短发夹RNA(shRNA)表达载体,分别转染至BEAS-2B细胞,G418筛选稳定转染细胞株,RT-PCR(Real time-RCR)检测目标基因Nrf2的表达水平。结果成功构建shRNA质粒表达载体,G418浓度为400mg/L时能够筛选到稳定转染的细胞株,构建的稳定细胞系均能特异性的抑制Nrf2基因的表达。结论通过RNA干扰(RNA Interfering,RNAi)技术能够成功构建BEAS-2B细胞Nrf2下调表达的细胞模型,为研究Nrf2在肺癌抗氧化通路中的作用机制奠定了基础。
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