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摘要：目的 观察红景天苷干预对腹部手术后老年大鼠水迷宫训练和海马ChAT阳性神经元的变化的影响。方法 20月龄大鼠31只，随机分四组：对照组、麻醉组、手术组和红景天苷组，红景天苷组红景天苷灌胃，其余三组NS灌胃，三周后手术组与红景天苷组行腹部探查术。术后1、3、7天进行水迷宫测试，第七天处死，观察海马区ChAT阳性神经元变化。结果 手术组水迷宫测试成绩降低，ChAT阳性细胞数减少，红景天苷组无明显变化。结论 红景天苷可能通过提高海马ChAT活性减轻大鼠术后认知功能障碍。
关键词：红景天苷；术后认知功能；老年大鼠；胆碱乙酰转移酶
中医认为红景天具有理气养血、健脑益智的作用[1]，高原居民也在长期实践中证实红景天在增强脑功能、提高记忆力方面效果显著[2]。本实验采用老年大鼠行腹腔探查术构建POCD模型，用Morris水迷宫试验评测POCD大鼠的学习记忆功能，用红景天苷口服灌胃来观察其对POCD的影响，为进一步研究其作用机理提供实验依据。
1.材料与方法
1.1 药物与试剂 红景天苷，胆碱乙酰转移酶（ChAT）免疫组化试剂盒，PBS缓冲液，多聚甲醛。
1.2 仪器 水迷宫测试系统，由兰州大学基础医学院神经解剖教研室提供。
1.3 动物分组及模型制备 取雄性Wistar大鼠31只，20月龄，体重500±25克。编号随机数字表法分组：对照组（A组，n=7），麻醉组（B组，n=8），手术组（C组，n=8），红景天苷组（D组，n=8）。A组、B组、C组均按体重给生理盐水灌胃，D组给红景天苷灌胃，50mg·kg-1·d-1，溶于生理盐水中，共灌三周，三周后C组和D组行腹部探查术，氯胺酮腹腔注射（25mg·kg-1）麻醉；B组不行手术，仅氯胺酮麻醉；A组仅同容量生理盐水注射。
1.4 水迷宫测定 使用Morris水迷宫，水深42 cm，水温（25±2）℃。将水池分为四个象限：SW、NW、SE及NE，在NW象限正中，放置一个直径为8cm圆形黑色站台，低于水面2cm。摄像机记录大鼠运动轨迹，测试结果采用中国科学院心理研究所研制开发的动物行为学软件显示和处理。术前五天各组大鼠开始学习，动物每天于同一时间段面向池壁被放入，记录游泳时间和路线，潜伏时间指动物入水起开始至找到平台的时间。将未找到平台的大鼠引至平台，休息60秒后，进行第二次学习。第五天做测试，取平均值为手术前成绩。测试结束后即行手术，在手术后第一天，第三天，第七天再次测试，比较成绩。
1.5 标本制作及观察 测试全部完成后，立即在水合氯醛（300mg/kg）麻醉下剪开胸腔，自升主动脉插管原位灌注固定，开颅取脑组织，左侧冰冻30μm连续冠状面切片，取2张片做ChAT 免疫组化染色，羊抗ChAT抗体（1：100），设立阴性对照，ChAT抗体以PBS代替；右侧脑组织石蜡包埋连续冠状面切片，间隔5μm，每个标本切取4张，取2张片做HE染色观察大体变化。
1.6 统计方法 所有结果均采用spss13.0统计学软件进行分析，所有数据用 ±s表示。计量资料使用方差分析进行检验；计数资料用多个样本均数间的多重比较分析。
2.结果
2.1 水迷宫测试结果 各组潜伏期均数间两两比较：C组潜伏期均数与其他各组间比较有明显延长（P<0.05）；其余各组间无明显差别（P>0.05）。手术不同时间潜伏期比较：术前各组间无差别（P>0.05）；术后一天C组与D组比较有差别（P<0.05），其余组间比较无统计学意义（P>0.05）；术后三天和七天C组比其余三组明显延长（P<0.05），其余两两组间比较均无统计学意义（P>0.05）。游泳路程均数在术后三天和七天C组与其他各组间比较有统计学意义（P<0.05）；其余各组间相互比较无统计学意义（P>0.05）。各组间不同时间游泳速度比較均无统计学意义（P>0.05）。
2.2 HE染色 组间比较无统计学意义（P>0.05）。
2.3免疫组化结果 手术组ChAT阳性细胞数较少，组间ChAT阳性细胞数C组与A组、B组及D组的P值分别为：0.011，0.030及0.049，（P<0.05）有统计学意义（P<0.05）；其余各组间比较无统计学意义（P>0.05）。
3.讨论
本试验结果未提示单次使用氯胺酮会引起认知减退，D组比C组记忆力有明显改善，说明红景天苷可以改善大鼠的认知功能[3]，但是两组的变化趋势一致，都有记忆减退，并于术后第三天达高峰，以后逐渐恢复，与曹剑等的模型相符，然而S组并未在术后第七天恢复至对照组水平。
各组之间病理学HE染色片比较，无统计学意义，说明腹部手术并不会导致大鼠脑组织形态学变化，也可能是样本量较少而导致无明显差异。
本试验中C组大鼠海马区ChAT阳性细胞数目减少，表明手术可能影响到大鼠胆碱能系统，并因此使大鼠的认知功能降低；而补充了红景天苷的大鼠可缓解这一变化。本实验观察对象仅为20月龄的老年鼠，未观察其他年龄的相关改变，尚不了解红景天苷是否对其他年龄段大鼠有同样的作用。
参考文献：
[1]王晓梅，吴焕淦，赵琛，等.红景天抗衰老作用研究概况[J].江苏中医药，2006（04）：60-62
[2]张晓丹，余自云，张茹.红景天属植物的化学成分研究进展[J].航空航天医药，2006（01）：61-63
[3]曹剑，李鹏，易斌，等。老年和成年大鼠术后认知功能障碍模型的建立与比较[J].重庆医学，2010，39（17）：2292-2293
关键词：红景天苷；术后认知功能；老年大鼠；胆碱乙酰转移酶
中医认为红景天具有理气养血、健脑益智的作用[1]，高原居民也在长期实践中证实红景天在增强脑功能、提高记忆力方面效果显著[2]。本实验采用老年大鼠行腹腔探查术构建POCD模型，用Morris水迷宫试验评测POCD大鼠的学习记忆功能，用红景天苷口服灌胃来观察其对POCD的影响，为进一步研究其作用机理提供实验依据。
1.材料与方法
1.1 药物与试剂 红景天苷，胆碱乙酰转移酶（ChAT）免疫组化试剂盒，PBS缓冲液，多聚甲醛。
1.2 仪器 水迷宫测试系统，由兰州大学基础医学院神经解剖教研室提供。
1.3 动物分组及模型制备 取雄性Wistar大鼠31只，20月龄，体重500±25克。编号随机数字表法分组：对照组（A组，n=7），麻醉组（B组，n=8），手术组（C组，n=8），红景天苷组（D组，n=8）。A组、B组、C组均按体重给生理盐水灌胃，D组给红景天苷灌胃，50mg·kg-1·d-1，溶于生理盐水中，共灌三周，三周后C组和D组行腹部探查术，氯胺酮腹腔注射（25mg·kg-1）麻醉；B组不行手术，仅氯胺酮麻醉；A组仅同容量生理盐水注射。
1.4 水迷宫测定 使用Morris水迷宫，水深42 cm，水温（25±2）℃。将水池分为四个象限：SW、NW、SE及NE，在NW象限正中，放置一个直径为8cm圆形黑色站台，低于水面2cm。摄像机记录大鼠运动轨迹，测试结果采用中国科学院心理研究所研制开发的动物行为学软件显示和处理。术前五天各组大鼠开始学习，动物每天于同一时间段面向池壁被放入，记录游泳时间和路线，潜伏时间指动物入水起开始至找到平台的时间。将未找到平台的大鼠引至平台，休息60秒后，进行第二次学习。第五天做测试，取平均值为手术前成绩。测试结束后即行手术，在手术后第一天，第三天，第七天再次测试，比较成绩。
1.5 标本制作及观察 测试全部完成后，立即在水合氯醛（300mg/kg）麻醉下剪开胸腔，自升主动脉插管原位灌注固定，开颅取脑组织，左侧冰冻30μm连续冠状面切片，取2张片做ChAT 免疫组化染色，羊抗ChAT抗体（1：100），设立阴性对照，ChAT抗体以PBS代替；右侧脑组织石蜡包埋连续冠状面切片，间隔5μm，每个标本切取4张，取2张片做HE染色观察大体变化。
1.6 统计方法 所有结果均采用spss13.0统计学软件进行分析，所有数据用 ±s表示。计量资料使用方差分析进行检验；计数资料用多个样本均数间的多重比较分析。
2.结果
2.1 水迷宫测试结果 各组潜伏期均数间两两比较：C组潜伏期均数与其他各组间比较有明显延长（P<0.05）；其余各组间无明显差别（P>0.05）。手术不同时间潜伏期比较：术前各组间无差别（P>0.05）；术后一天C组与D组比较有差别（P<0.05），其余组间比较无统计学意义（P>0.05）；术后三天和七天C组比其余三组明显延长（P<0.05），其余两两组间比较均无统计学意义（P>0.05）。游泳路程均数在术后三天和七天C组与其他各组间比较有统计学意义（P<0.05）；其余各组间相互比较无统计学意义（P>0.05）。各组间不同时间游泳速度比較均无统计学意义（P>0.05）。
2.2 HE染色 组间比较无统计学意义（P>0.05）。
2.3免疫组化结果 手术组ChAT阳性细胞数较少，组间ChAT阳性细胞数C组与A组、B组及D组的P值分别为：0.011，0.030及0.049，（P<0.05）有统计学意义（P<0.05）；其余各组间比较无统计学意义（P>0.05）。
3.讨论
本试验结果未提示单次使用氯胺酮会引起认知减退，D组比C组记忆力有明显改善，说明红景天苷可以改善大鼠的认知功能[3]，但是两组的变化趋势一致，都有记忆减退，并于术后第三天达高峰，以后逐渐恢复，与曹剑等的模型相符，然而S组并未在术后第七天恢复至对照组水平。
各组之间病理学HE染色片比较，无统计学意义，说明腹部手术并不会导致大鼠脑组织形态学变化，也可能是样本量较少而导致无明显差异。
本试验中C组大鼠海马区ChAT阳性细胞数目减少，表明手术可能影响到大鼠胆碱能系统，并因此使大鼠的认知功能降低；而补充了红景天苷的大鼠可缓解这一变化。本实验观察对象仅为20月龄的老年鼠，未观察其他年龄的相关改变，尚不了解红景天苷是否对其他年龄段大鼠有同样的作用。
参考文献：
[1]王晓梅，吴焕淦，赵琛，等.红景天抗衰老作用研究概况[J].江苏中医药，2006（04）：60-62
[2]张晓丹，余自云，张茹.红景天属植物的化学成分研究进展[J].航空航天医药，2006（01）：61-63
[3]曹剑，李鹏，易斌，等。老年和成年大鼠术后认知功能障碍模型的建立与比较[J].重庆医学，2010，39（17）：2292-2293