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【摘要】Tim-3是重要的免疫调控分子，在肿瘤免疫逃逸中的作用值得深入探讨。结合临床资料分析该分子表达与胃癌进展的关系。结果发现，无论健康对照组还是胃癌患者，在外周淋巴细胞群体中Tim-3主要表达于NK细胞而非B细胞或T细胞。扩大样本进一步分析发现，胃癌患者NK细胞上Tim-3表达则显著高于健康组，两者存在统计学差异。这提示NK上Tim-3表达可能参与了胃癌病理进程。临床样本统计学分析发现，Tim-3在胃癌患者外周血NK细胞上的表达水平与肿瘤分期以及肿瘤淋巴结转移密切相关。本研究提示NK上Tim-3在胃癌的发生发展中诱导高表达，可能是评估胃癌进展的潜在指标。
【关键词】胃癌;Tim-3;NK
【中图分类号】R4 【文献标识码】B 【文章编号】1671-8801（2014）011- 0108-02
胃癌是一种常见的恶性肿瘤，严重危害人民群众的身体健康，已成为重要的社会问题。近年来，虽然手术、放化疗等常规手段取得了很大的进步，但是无论是生存质量还是生存期方面，对于进展期胃癌均没有实质性提升。肿瘤经过漫长的时间，绝大部分散在出现的肿瘤细胞都能被机体免疫系统清除，但是一旦肿瘤细胞通过某种机制逃脱了免疫监视，在器官形成集落式生长，则免疫系统很难再将其彻底清除。实质上，经过漫长的时间，肿瘤集落不断生长并与机体免疫逐渐相互适应，免疫系统甚至扮演了“帮凶”的角色。因此，免疫与肿瘤的关系非常密切，从免疫学角度看肿瘤发展对于认清肿瘤发生发展的规律大有帮助。
目前关于Tim-3与NK细胞的研究还存在较大争议，特别是NK细胞上Tim-3表达的临床意义报道甚少。本论文首先检测了胃癌患者及健康人外周血NK细胞上 Tim-3的表达情况，分析Tim-3在NK细胞上的表达水平与胃癌患者临床病理特征的关系，探讨NK细胞上的Tim-3在胃癌发生发展中的临床意义。
一，材料与方法
自山东省章丘市人民医院消化科和普外科收集初诊胃癌患者62例，经手术或活检病理确诊胃癌。正常对照组32例，为医院体检中心健康体检者，男24例，女8例。所采集的外周血为入院血常规（EDTA抗凝）检测后的多余血液，没有对患者造成二次创伤，且经医院伦理备案批准。采血前未经手术和放化疗治疗，并排除自身免疫性疾病、糖尿病等长期慢性疾病。初诊胃癌患者为入院第2天清晨抽取空腹静脉血1-2ml，以EDTA抗凝管保存。正常对照组为来本院健康体检的人群，排除慢性疾病的健康人群，样品是血常规检测后废弃的标本。
所有数据应用GraphPad Prism 5软件进行统计学分析。计量资料用均数±标准差表示，两组均数比较采用t检验，多组均数的比较采用单因素方差分析，计数资料比较采用Fisher确切概率法检验。检验水准α=0.05。
二，结果
流式细胞仪检测Tim-3在胃癌患者与健康对照组外周血 CD3+T细胞、CD19+B细胞和 CD56+NK 细胞上的表达情况。结果Tim-3在胃癌患者及正常对照组外周血 CD3+T细胞基本不表达，在CD19+B细胞上低表达，而在CD56+NK细胞高表达。Tim-3 在胃癌患者外周血CD19+B 细胞上的表达（11.48±6.29，%）高于对照组（6.68±4.11，%），差异无统计学意义。进一步扩大临床样本，分析62例胃癌患者及32例正常对照组外周血CD56+NK细胞上Tim-3的表达情况。结果胃癌患者外周血CD56+NK细胞上Tim-3的表达强度（2211±108.8，MFI）高于正常对照组（1258±59.31，MFI），差异有统计学意义（P=0.0174）。
将62例胃癌患者Tim-3在外周血 NK 细胞上的表达情况与其年龄、性别和临床分期等病理特征进行分析。以Tim-3在胃癌患者外周血 CD56+NK细胞上的中位数（MFI=2110）为阈值：≥2110为高表达组，<2110为低表达组。显示：Tim-3在 NK 细胞上的表达量在不同分期的各组中存在显著差异（P<0.05），在年龄、性别各组中的差异无显著性。
为了进一步了解肿瘤微环境中NK细胞表达 Tim-3情况，本部分对胃癌癌灶和对应的癌远端正常组织中浸润的 CD45+CD56+NK细胞上该分子表达情况进行了流式检测。结果所示：4例不同胃癌患者癌灶中CD45+CD56+NK细胞上 Tim-3 表达平均荧光强度平均数为2895，标准误为292.3;对应的癌旁正常组织中CD45+CD56+NK细胞上Tim-3表达平均荧光强度平均数为2302，标准误为102.5。两者相比，虽然癌灶中NK细胞上Tim-3表达高于对应的癌旁正常，但两者之间并不存在统计学差异。有一个非常有意思的发现，无论癌组织还是癌旁组织中NK细胞均能分为Tim-3+和Tim-3-NK两个明显的亚群。这两个亚群的功能特征值的深入研究。
三，讨论
Tim-3是Ⅰ型跨膜蛋白，属于新发现的Tim家族成员。Tim-3最初认为其特异性表达于Th1细胞，随着研究深入，该分子在CD8+Tc1 细胞、CD4+Th17、Treg，甚至在固有免疫细胞DC、单核巨噬细胞等免疫细胞均发现不同程度表达。Tim-3可与其配体半乳凝素-9（Galectin-9，Gal-9）结合，负向调节Th1细胞介导的免疫应答，在肿瘤免疫中也发挥着重要作用。
本论文首先分析了胃癌患者外周血淋巴细胞上 Tim-3 表达水平。结果显示，胃癌患者及健康对照组中 Tim-3在主要表达于 CD56+NK细胞，在CD19+B细胞和 CD3+T细胞几乎检测不到，提示NK上Tim-3才是发挥功能的主体。进一步比较分析发现，胃癌患者Tim-3水平显著高于正常对照。临床样本分析发现，Tim-3表达水平与胃癌临床分期密切相关。进展晚期胃癌患者NK上Tim-3水平也显著多于早期胃癌。上述结果提示，NK上Tim-3在促进胃癌病理发展中发挥了重要作用，该分子在NK细胞上的表达情况可能作为评估胃癌患者病情的临床指标。
综上，胃癌患者NK细胞上的Tim-3表达与肿瘤负荷密切相关，且T-bet是调控该分子表达的关键因子。临床分析表明NK上Tim-3表达水平与肿瘤分期相关，该分子是重要的临床进展指标。
参考文献：
【1】邹小农等，2003-2007年中国胃癌发病与死亡情况分析[J]，肿瘤，2012，02
【2】季加孚等，胃癌新辅助化疗的现状与展望[J]，中国肿瘤临床，2012，39
【关键词】胃癌;Tim-3;NK
【中图分类号】R4 【文献标识码】B 【文章编号】1671-8801（2014）011- 0108-02
胃癌是一种常见的恶性肿瘤，严重危害人民群众的身体健康，已成为重要的社会问题。近年来，虽然手术、放化疗等常规手段取得了很大的进步，但是无论是生存质量还是生存期方面，对于进展期胃癌均没有实质性提升。肿瘤经过漫长的时间，绝大部分散在出现的肿瘤细胞都能被机体免疫系统清除，但是一旦肿瘤细胞通过某种机制逃脱了免疫监视，在器官形成集落式生长，则免疫系统很难再将其彻底清除。实质上，经过漫长的时间，肿瘤集落不断生长并与机体免疫逐渐相互适应，免疫系统甚至扮演了“帮凶”的角色。因此，免疫与肿瘤的关系非常密切，从免疫学角度看肿瘤发展对于认清肿瘤发生发展的规律大有帮助。
目前关于Tim-3与NK细胞的研究还存在较大争议，特别是NK细胞上Tim-3表达的临床意义报道甚少。本论文首先检测了胃癌患者及健康人外周血NK细胞上 Tim-3的表达情况，分析Tim-3在NK细胞上的表达水平与胃癌患者临床病理特征的关系，探讨NK细胞上的Tim-3在胃癌发生发展中的临床意义。
一，材料与方法
自山东省章丘市人民医院消化科和普外科收集初诊胃癌患者62例，经手术或活检病理确诊胃癌。正常对照组32例，为医院体检中心健康体检者，男24例，女8例。所采集的外周血为入院血常规（EDTA抗凝）检测后的多余血液，没有对患者造成二次创伤，且经医院伦理备案批准。采血前未经手术和放化疗治疗，并排除自身免疫性疾病、糖尿病等长期慢性疾病。初诊胃癌患者为入院第2天清晨抽取空腹静脉血1-2ml，以EDTA抗凝管保存。正常对照组为来本院健康体检的人群，排除慢性疾病的健康人群，样品是血常规检测后废弃的标本。
所有数据应用GraphPad Prism 5软件进行统计学分析。计量资料用均数±标准差表示，两组均数比较采用t检验，多组均数的比较采用单因素方差分析，计数资料比较采用Fisher确切概率法检验。检验水准α=0.05。
二，结果
流式细胞仪检测Tim-3在胃癌患者与健康对照组外周血 CD3+T细胞、CD19+B细胞和 CD56+NK 细胞上的表达情况。结果Tim-3在胃癌患者及正常对照组外周血 CD3+T细胞基本不表达，在CD19+B细胞上低表达，而在CD56+NK细胞高表达。Tim-3 在胃癌患者外周血CD19+B 细胞上的表达（11.48±6.29，%）高于对照组（6.68±4.11，%），差异无统计学意义。进一步扩大临床样本，分析62例胃癌患者及32例正常对照组外周血CD56+NK细胞上Tim-3的表达情况。结果胃癌患者外周血CD56+NK细胞上Tim-3的表达强度（2211±108.8，MFI）高于正常对照组（1258±59.31，MFI），差异有统计学意义（P=0.0174）。
将62例胃癌患者Tim-3在外周血 NK 细胞上的表达情况与其年龄、性别和临床分期等病理特征进行分析。以Tim-3在胃癌患者外周血 CD56+NK细胞上的中位数（MFI=2110）为阈值：≥2110为高表达组，<2110为低表达组。显示：Tim-3在 NK 细胞上的表达量在不同分期的各组中存在显著差异（P<0.05），在年龄、性别各组中的差异无显著性。
为了进一步了解肿瘤微环境中NK细胞表达 Tim-3情况，本部分对胃癌癌灶和对应的癌远端正常组织中浸润的 CD45+CD56+NK细胞上该分子表达情况进行了流式检测。结果所示：4例不同胃癌患者癌灶中CD45+CD56+NK细胞上 Tim-3 表达平均荧光强度平均数为2895，标准误为292.3;对应的癌旁正常组织中CD45+CD56+NK细胞上Tim-3表达平均荧光强度平均数为2302，标准误为102.5。两者相比，虽然癌灶中NK细胞上Tim-3表达高于对应的癌旁正常，但两者之间并不存在统计学差异。有一个非常有意思的发现，无论癌组织还是癌旁组织中NK细胞均能分为Tim-3+和Tim-3-NK两个明显的亚群。这两个亚群的功能特征值的深入研究。
三，讨论
Tim-3是Ⅰ型跨膜蛋白，属于新发现的Tim家族成员。Tim-3最初认为其特异性表达于Th1细胞，随着研究深入，该分子在CD8+Tc1 细胞、CD4+Th17、Treg，甚至在固有免疫细胞DC、单核巨噬细胞等免疫细胞均发现不同程度表达。Tim-3可与其配体半乳凝素-9（Galectin-9，Gal-9）结合，负向调节Th1细胞介导的免疫应答，在肿瘤免疫中也发挥着重要作用。
本论文首先分析了胃癌患者外周血淋巴细胞上 Tim-3 表达水平。结果显示，胃癌患者及健康对照组中 Tim-3在主要表达于 CD56+NK细胞，在CD19+B细胞和 CD3+T细胞几乎检测不到，提示NK上Tim-3才是发挥功能的主体。进一步比较分析发现，胃癌患者Tim-3水平显著高于正常对照。临床样本分析发现，Tim-3表达水平与胃癌临床分期密切相关。进展晚期胃癌患者NK上Tim-3水平也显著多于早期胃癌。上述结果提示，NK上Tim-3在促进胃癌病理发展中发挥了重要作用，该分子在NK细胞上的表达情况可能作为评估胃癌患者病情的临床指标。
综上，胃癌患者NK细胞上的Tim-3表达与肿瘤负荷密切相关，且T-bet是调控该分子表达的关键因子。临床分析表明NK上Tim-3表达水平与肿瘤分期相关，该分子是重要的临床进展指标。
参考文献：
【1】邹小农等，2003-2007年中国胃癌发病与死亡情况分析[J]，肿瘤，2012，02
【2】季加孚等，胃癌新辅助化疗的现状与展望[J]，中国肿瘤临床，2012，39