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摘要：目的 建立同时测定补心软脉颗粒中红景天苷、马钱苷和虎杖苷含量的一测多评分析方法，并验证此方法在该制剂中应用的准确性和可行性。方法 以红景天苷为内标物，采用外标法测定补心软脉颗粒中红景天苷的含量，建立其与马钱苷和虎杖苷的相对校正因子，通过该校正因子对马钱苷和虎杖苷进行含量计算，从而实现一测多评。同时采用常规的外标法测定补心软脉颗粒中这3种成分的含量，并将一测多评法的计算值与外标法的实测值进行比较。结果 10批补心软脉颗粒一测多评法的计算结果与外标法的实测值之间没有显著差异，表明试验所得的相对校正因子具有很好的重现性和可信度。结论 一测多评法可用于补心软脉颗粒多指标质量评价研究。
关键词：补心软脉颗粒；一测多评；相对校正因子；红景天苷；马钱苷；虎杖苷
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2014.09.027
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2014）09-0093-05
补心软脉颗粒处方源于江苏省中医院心内科经验方，由红景天、山萸肉、虎杖等6味药组成，功效补益心肾、化瘀通络，用于治疗气阴两虚夹有瘀血的冠心病心绞痛。红景天苷是红景天有效成分之一，具有加快心肌收缩速度、增强心肌收缩力、降低平均动脉压作用[1]。环烯醚萜类是山萸肉主要有效成分[2]，其中以马钱苷活性较高，可增强心肌收缩性、提高心脏效率、扩张外周血管、增强心脏泵血功能。虎杖苷是虎杖主要有效成分之一，具有抑制心肌细胞收缩、抑制血小板聚集、抗脂质过氧化、抗休克等作用，还能减轻组织器官损伤[3]。故红景天苷、马钱苷和虎杖苷可作为补心软脉颗粒质量控制的指标成分。虎杖苷对照品不稳定、易分解[4]，马钱苷对照品价格较高，而红景天苷稳定又较易得到。因此，本研究以红景天苷为内标物，通过外标法测定其含量，建立该成分与马钱苷、虎杖苷的相对较正因子，并对方法的准确性和可行性进行探索和评价，实现该制剂多指标成分的同步监测。
1 仪器与试药
Agilent1260高效液相色谱系统，DAD检测器；AgilentChem Station工作站；Waters2695-2998高效液相色谱系统，2998PAD检测器，Empower工作站（Waters公司）。色谱柱为Hedera C18（4.6 mm×250 mm， 5 μm）、Hypersil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）、Kromasil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）、Agilent C18（4.6 mm×250 mm， 5 μm）柱。BP-211D型电子分析天平（德国赛多利斯公司）；超声波仪（SK6200H，上海科导超声仪器有限公司，功率250 W，频率53 kHz）。
对照品红景天苷（批号100826，含量>98%）、马钱苷（批号111127，含量>98%）、虎杖苷（批号110509）购自四川维克奇生物科技有限公司，样品由江苏省中医院制剂部制备，色谱甲醇，超纯水，其余试剂为分析纯。
2 方法与结果
2.1 方法原理
在一定的线性范围内，成分的量（浓度或质量）与检测器响应成正比，即f=W/A（W表示成分的量，A表示响应值）[5]。在补心软脉颗粒的多指标质量评价时，以红景天苷为内标物，计算其与马钱苷和虎杖苷的相对校正因子，可通过相对校正因子计算马钱苷和虎杖苷的含量，从而实现一测多评。公式如下：
2.2 一测多评方法学考察
2.2.1 对照品溶液的制备 取红景天苷、马钱苷、虎杖苷对照品适量，精密称定，分别置25 mL容量瓶中，甲醇定容，配制成各对照品储备液。分别精密吸取红景天苷对照品储备液2 mL、马钱苷对照品储备液0.5 mL、虎杖苷对照品储备液0.5 mL，置于同一5 mL容量瓶中，甲醇定容，即得红景天苷145.12 μg/mL、马钱苷41.56 μg/mL、虎杖苷43.0 μg/mL的混合对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备 取补心软脉颗粒约1.2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定质量，超声30 min，取出，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，0.45 μm滤膜滤过，取续滤液，即得。
2.2.3 阴性对照溶液的制备 参照补心软脉颗粒制备工艺，分别制备缺红景天、山萸肉、虎杖的3个阴性样品，按“2.2.2”项下方法制备，即得。
2.2.4 色谱条件 色谱柱：Hedera-C18柱（4.6 mm×
2.2.5 检测波长的选择 红景天苷、马钱苷、虎杖苷的全波长紫外吸收因为所使用的高效液相色谱仪配备DAD或PAD检测器，可以调用不同的波长。所以采用在目标成分各自的最大吸收波长下对其进行定量检测。
2.2.6 线性范围考察 精密吸取上述混合对照品溶液2、3、5、8、10、12、20 μL进样分析，以进样量对峰面积积分值进行回归处理，得到3种成分的回归方程及线性范围。红景天苷：Y=376.17X-0.0276， r=0.999 5，线性范围为0.2902～2.902 4 μg；马钱苷：Y=1564X-4.369 3，r=0.999 9，线性范围为0.083 1～0.831 2 μg；虎杖苷：Y=3406.1X-2.9343， r=0.999 7，线性范围为0.086～0.860 0 μg。结果表明，各成分在各自范围内呈良好的线性关系。
2.2.7 精密度试验 精密吸取混合对照品溶液5 μL，连续进样6次，记录红景天苷、马钱苷和虎杖苷的峰面积，计算，结果3种成分峰面积的RSD分别为1.21%、1.64%、1.97%，表明仪器精密度良好。
2.2.8 重复性试验 取同一批补心软脉颗粒（批号121215）约1.2 g，平行6份，精密称定，按“2.2.2”项下方法制备，精密吸取供试品溶液5 μL，按“2.2.4”项下色谱条件测定，计算，结果红景天苷、马钱苷和虎杖苷平均含量为2.888、0.959、3.272 mg/g，RSD分别为2.32%、1.95%、2.53%，表明该方法重复性良好。
关键词：补心软脉颗粒；一测多评；相对校正因子；红景天苷；马钱苷；虎杖苷
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2014.09.027
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2014）09-0093-05
补心软脉颗粒处方源于江苏省中医院心内科经验方，由红景天、山萸肉、虎杖等6味药组成，功效补益心肾、化瘀通络，用于治疗气阴两虚夹有瘀血的冠心病心绞痛。红景天苷是红景天有效成分之一，具有加快心肌收缩速度、增强心肌收缩力、降低平均动脉压作用[1]。环烯醚萜类是山萸肉主要有效成分[2]，其中以马钱苷活性较高，可增强心肌收缩性、提高心脏效率、扩张外周血管、增强心脏泵血功能。虎杖苷是虎杖主要有效成分之一，具有抑制心肌细胞收缩、抑制血小板聚集、抗脂质过氧化、抗休克等作用，还能减轻组织器官损伤[3]。故红景天苷、马钱苷和虎杖苷可作为补心软脉颗粒质量控制的指标成分。虎杖苷对照品不稳定、易分解[4]，马钱苷对照品价格较高，而红景天苷稳定又较易得到。因此，本研究以红景天苷为内标物，通过外标法测定其含量，建立该成分与马钱苷、虎杖苷的相对较正因子，并对方法的准确性和可行性进行探索和评价，实现该制剂多指标成分的同步监测。
1 仪器与试药
Agilent1260高效液相色谱系统，DAD检测器；AgilentChem Station工作站；Waters2695-2998高效液相色谱系统，2998PAD检测器，Empower工作站（Waters公司）。色谱柱为Hedera C18（4.6 mm×250 mm， 5 μm）、Hypersil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）、Kromasil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）、Agilent C18（4.6 mm×250 mm， 5 μm）柱。BP-211D型电子分析天平（德国赛多利斯公司）；超声波仪（SK6200H，上海科导超声仪器有限公司，功率250 W，频率53 kHz）。
对照品红景天苷（批号100826，含量>98%）、马钱苷（批号111127，含量>98%）、虎杖苷（批号110509）购自四川维克奇生物科技有限公司，样品由江苏省中医院制剂部制备，色谱甲醇，超纯水，其余试剂为分析纯。
2 方法与结果
2.1 方法原理
在一定的线性范围内，成分的量（浓度或质量）与检测器响应成正比，即f=W/A（W表示成分的量，A表示响应值）[5]。在补心软脉颗粒的多指标质量评价时，以红景天苷为内标物，计算其与马钱苷和虎杖苷的相对校正因子，可通过相对校正因子计算马钱苷和虎杖苷的含量，从而实现一测多评。公式如下：
2.2 一测多评方法学考察
2.2.1 对照品溶液的制备 取红景天苷、马钱苷、虎杖苷对照品适量，精密称定，分别置25 mL容量瓶中，甲醇定容，配制成各对照品储备液。分别精密吸取红景天苷对照品储备液2 mL、马钱苷对照品储备液0.5 mL、虎杖苷对照品储备液0.5 mL，置于同一5 mL容量瓶中，甲醇定容，即得红景天苷145.12 μg/mL、马钱苷41.56 μg/mL、虎杖苷43.0 μg/mL的混合对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备 取补心软脉颗粒约1.2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定质量，超声30 min，取出，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，0.45 μm滤膜滤过，取续滤液，即得。
2.2.3 阴性对照溶液的制备 参照补心软脉颗粒制备工艺，分别制备缺红景天、山萸肉、虎杖的3个阴性样品，按“2.2.2”项下方法制备，即得。
2.2.4 色谱条件 色谱柱：Hedera-C18柱（4.6 mm×
2.2.5 检测波长的选择 红景天苷、马钱苷、虎杖苷的全波长紫外吸收因为所使用的高效液相色谱仪配备DAD或PAD检测器，可以调用不同的波长。所以采用在目标成分各自的最大吸收波长下对其进行定量检测。
2.2.6 线性范围考察 精密吸取上述混合对照品溶液2、3、5、8、10、12、20 μL进样分析，以进样量对峰面积积分值进行回归处理，得到3种成分的回归方程及线性范围。红景天苷：Y=376.17X-0.0276， r=0.999 5，线性范围为0.2902～2.902 4 μg；马钱苷：Y=1564X-4.369 3，r=0.999 9，线性范围为0.083 1～0.831 2 μg；虎杖苷：Y=3406.1X-2.9343， r=0.999 7，线性范围为0.086～0.860 0 μg。结果表明，各成分在各自范围内呈良好的线性关系。
2.2.7 精密度试验 精密吸取混合对照品溶液5 μL，连续进样6次，记录红景天苷、马钱苷和虎杖苷的峰面积，计算，结果3种成分峰面积的RSD分别为1.21%、1.64%、1.97%，表明仪器精密度良好。
2.2.8 重复性试验 取同一批补心软脉颗粒（批号121215）约1.2 g，平行6份，精密称定，按“2.2.2”项下方法制备，精密吸取供试品溶液5 μL，按“2.2.4”项下色谱条件测定，计算，结果红景天苷、马钱苷和虎杖苷平均含量为2.888、0.959、3.272 mg/g，RSD分别为2.32%、1.95%、2.53%，表明该方法重复性良好。