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（兰州大学药学院甘肃 兰州 730000）
【摘要】目的：提取分离纯化具有抗氧化作用的蕨菜多糖，并对其进行红外鉴定，以初步确定蕨菜多糖的一级结构。方法：水提醇沉得蕨菜粗多糖,用Sevage法（氯仿：正丁醇＝4：1）除蛋白。再加无水乙醇使含醇量达到80%，静置过夜，5000r/min离心10min，残渣依次用体积分数95%乙醇、无水乙醇、丙酮、乙醚多次洗涤，冷冻干燥，得精制多糖，红外分析蕨菜多糖。结果结论：经红外分析后初步推测具有抗氧化作用的蕨菜多糖一级结构是具有β-D（1、4）连接的吡喃葡聚糖主链。
【关键词】六盘山蕨菜;多糖;红外分析
【中图分类号】R217.24 【文献标识码】A 【文章编号】1005-0515（2011）09-0166-02
蕨菜属羊齿科,多年生草本植物,别名如意菜、拳头菜等,是六盘山林区和山区常见的一种山野菜。蕨菜多糖具有多种生理活性［1］，表现出强的抗氧化活性。而且蕨菜生长周期短,适宜人工栽培,便于采集和加工,生产成本低。因此,蕨菜在医药和保健食品等方面极具开发潜力［2］。本文利用水浴回流提取、乙醇沉淀多糖、Sevage法去除蛋白质等工艺提取粗多糖；将得到的粗多糖通过有机溶剂离心洗涤，冷冻干燥进行分离纯化，收集得到精制多糖［3］；采用紫外分光光度计、红外光谱仪对多糖结构进行初步的光谱分析。以期能够为利用六盘山蕨菜植物资源奠定理论基础［3］－［8］。
1 材料与方法
1.1材料与仪器
蕨菜：采自六盘山区，80℃烘干，粉碎过80目药典筛。
试剂（分析纯）：葡萄糖，硫酸，苯酚，氯仿，无水乙醇，正丁醇，过硫酸钾，ABTS等。
仪器：红外分光光度计，UV7501紫外可见分光光度计，高速离心机，冷冻干燥器，索氏提取器
1.2 试验设计
1.2.1 蕨菜多糖的提取［9］ －［10］
称取干燥粉碎后的蕨菜细粉20g，置索氏提取器中，依次用石油醚提取至提取液无色为止。残渣挥干溶剂后，加入200ml蒸馏水回流提取2h,趁热过滤，重复3次。合并滤液，减压浓缩至原体积的1/2后，用4倍量的无水乙醇沉淀过夜，5000r/min离心10min，沉淀冷冻干燥为粗多糖。
1.2.2 蕨菜多糖的精制:将粗多糖加100ml热水溶解，用Sevage法（氯仿：正丁醇＝4：1）法除蛋白质；浓缩多糖溶液，加入无水乙醇使含醇量高达80%，静置过夜，5000r/min离心10min，沉淀依次用95%乙醇、无水乙醇、丙酮、乙醚多次洗涤，冷冻干燥，得到精制多糖。
1.2.3 多糖含量得测定:采用苯酚－硫酸法。
1.2.4 结构分析［11］ －［13］
1.2.4.1 紫外光谱分析：用紫外光谱扫描仪对多糖组分进行扫描， 测定蕨菜多糖的紫外吸收光谱。
1.2.4.2 红外光谱分析［14］：取1 mg 左右经干燥的多糖样品， 与100 ～ 200 mg 经干燥的KBr 粉末在玛瑙研钵中轻轻研磨均匀， 在红外灯下操作. 经压片机压成薄片， 随即上机测定， 于4 000 ～ 400 cm－1红外光谱仪扫描。
2 结果与分析
2.1 蕨菜多糖的提取结果：蕨菜粗多糖为浅灰色，无味。易溶于水，热水中溶解度增大。不溶于丙酮、乙醚等非极性溶剂。干燥粉碎后的蕨菜细粉20g按法提取得到多糖1.248g,最终测定多糖得率为6.24%。
2.2 紫外光谱分析：我们在蕨菜多糖的紫外吸收光谱的260nm和280nm处未观察到任何吸收峰；而此处的吸收峰主要是核酸和蛋白质［15］，所以我们确定用Sevage法除蛋白后的蕨菜多糖中不含核酸、蛋白质。
2.3 红外光谱分析：根据图（1）我们在蕨菜多糖的红外吸收光谱中，发现在3600－3200cm-1, 3000－2800cm-1, 1400－1200cm-1, 1200－800cm-1,均有多糖特征峰；在891 cm-1处的吸收峰表明多糖结构中存在β吡喃糖苷键，3400 cm-1处出现的强而宽的峰显示蕨菜多糖中存在－OH，1600 cm-1处的峰是CO伸缩振动引起的吸收［16］- ［18］。
图1蕨菜多糖的红外光谱
3 结论
依据上述光谱分析，再结合Smith降解法等化学方法［19］：我们初步确定蕨菜多糖的一级结构中主要含有葡萄糖、半乳糖、鼠李糖、木糖、甘露糖，而具有β-D（1、4）连接的吡喃葡聚糖主链。
参考文献
［1］ 王新华，赵恒田，盛庆军. 蕨类山野菜人工繁殖及其研究进展［J］. 北方园艺，2004（ 6） ：4-5.
［2］左茹娟，王铭裕，卫振华，等. 兴隆山自然保护区野菜资源利用现状与开发前景［J］. 中国野生植物资源，2006（ 6） ：26-28.
［3］许广波，李艳茹，石铁源，等. 延边地区野生蕨菜资源及其研究进展［J］. 中国野生植物资源，2000（ 6） ：30-31.
［4］李梅，刁治民，马海斌. 青海蕨菜资源及栽培技术［J］. 青海草业，2001（ 3） ：51-52.
［5］杨成生，朱红斌，薛睿，等. 采摘方式对蕨菜资源更新的影响［J］. 甘肃林业科技，2006（ 2） ：50-51.
［6］黄利斌，史纪明. 江苏森林野生蔬菜———蕨菜的开发利用［J］. 江苏绿化，1997（4）：9-10.
［7］郝丽珍，邵世勤，王萍，等. 蕨菜的营养成分及其利用研究［C］. 哈尔滨：中国园艺学会第四届青年学术讨论会论文
集，2000.
［8］许广波，李艳茹，石铁源，等. 延边地区野生蕨菜资源及其研究进展［J］. 中国野生植物资源，2000，19（6）：30-35.
［9］张帆，罗水忠，高宝莼，等. 蕨菜的化学成分研究［J］.天然产物研究与开发，2004，16（2）:121-123.
［10］井泽良,刘兴华,关文强.真菌寡聚糖单糖组成（ H PLC） 分析及诱导抗病活性初步研究［J］.食品研究与开发,2006,27（1）:53-56.
［11］刘长福,刘涛,刘秀梅.高效液相色谱法测定香菇多糖的分子量［J］.化学工程师,2005,118（7）:28-29.
［12］颜军, 郭晓强, 邬晓勇, 等. 非衍生化H PLC 法分析银耳多糖中单糖组成的初步研究［J］.食品科学,2007,28（7）:446-449.
［13］戴金凤,李磊.紫萁多糖单糖组成及摩尔比G C 分析［J］.江西农业大学学报,2001,23（4）:492-495.
［14］Edge C J,R adem acher T W ,W orm ald M R ,et al.Fast Sequencingof O ligosacchrides: the R eagent-array A nalysis M ethod ［J］. ProcN atlA cad Sci,1992,89（4）:6 338-6 342.
［15］李尔春 天然植物多糖的结构及活性研究进展〔J］.食品工程,2007，（1）;44一46
［16］ 孟聚诚，高芳，李广林，等.8301多糖的纯化及光谱分析［J］.中兽医医药杂志.1999,2;5 6
［17］ 顾林，姜军，孙靖.山药多糖的分离纯化及其结构鉴定〔J］.食品科技，2007,5:109-r112
［18］ 徐任生，叶阳，赵维民.天然产物化学（第二版）［M］. 北京:科学出版社，2004. 510
［19］ 黄桂东，钟先锋.阿拉伯半乳聚糖的研究进展「1］.食品与机械.2006,22（ 4），141一144
【摘要】目的：提取分离纯化具有抗氧化作用的蕨菜多糖，并对其进行红外鉴定，以初步确定蕨菜多糖的一级结构。方法：水提醇沉得蕨菜粗多糖,用Sevage法（氯仿：正丁醇＝4：1）除蛋白。再加无水乙醇使含醇量达到80%，静置过夜，5000r/min离心10min，残渣依次用体积分数95%乙醇、无水乙醇、丙酮、乙醚多次洗涤，冷冻干燥，得精制多糖，红外分析蕨菜多糖。结果结论：经红外分析后初步推测具有抗氧化作用的蕨菜多糖一级结构是具有β-D（1、4）连接的吡喃葡聚糖主链。
【关键词】六盘山蕨菜;多糖;红外分析
【中图分类号】R217.24 【文献标识码】A 【文章编号】1005-0515（2011）09-0166-02
蕨菜属羊齿科,多年生草本植物,别名如意菜、拳头菜等,是六盘山林区和山区常见的一种山野菜。蕨菜多糖具有多种生理活性［1］，表现出强的抗氧化活性。而且蕨菜生长周期短,适宜人工栽培,便于采集和加工,生产成本低。因此,蕨菜在医药和保健食品等方面极具开发潜力［2］。本文利用水浴回流提取、乙醇沉淀多糖、Sevage法去除蛋白质等工艺提取粗多糖；将得到的粗多糖通过有机溶剂离心洗涤，冷冻干燥进行分离纯化，收集得到精制多糖［3］；采用紫外分光光度计、红外光谱仪对多糖结构进行初步的光谱分析。以期能够为利用六盘山蕨菜植物资源奠定理论基础［3］－［8］。
1 材料与方法
1.1材料与仪器
蕨菜：采自六盘山区，80℃烘干，粉碎过80目药典筛。
试剂（分析纯）：葡萄糖，硫酸，苯酚，氯仿，无水乙醇，正丁醇，过硫酸钾，ABTS等。
仪器：红外分光光度计，UV7501紫外可见分光光度计，高速离心机，冷冻干燥器，索氏提取器
1.2 试验设计
1.2.1 蕨菜多糖的提取［9］ －［10］
称取干燥粉碎后的蕨菜细粉20g，置索氏提取器中，依次用石油醚提取至提取液无色为止。残渣挥干溶剂后，加入200ml蒸馏水回流提取2h,趁热过滤，重复3次。合并滤液，减压浓缩至原体积的1/2后，用4倍量的无水乙醇沉淀过夜，5000r/min离心10min，沉淀冷冻干燥为粗多糖。
1.2.2 蕨菜多糖的精制:将粗多糖加100ml热水溶解，用Sevage法（氯仿：正丁醇＝4：1）法除蛋白质；浓缩多糖溶液，加入无水乙醇使含醇量高达80%，静置过夜，5000r/min离心10min，沉淀依次用95%乙醇、无水乙醇、丙酮、乙醚多次洗涤，冷冻干燥，得到精制多糖。
1.2.3 多糖含量得测定:采用苯酚－硫酸法。
1.2.4 结构分析［11］ －［13］
1.2.4.1 紫外光谱分析：用紫外光谱扫描仪对多糖组分进行扫描， 测定蕨菜多糖的紫外吸收光谱。
1.2.4.2 红外光谱分析［14］：取1 mg 左右经干燥的多糖样品， 与100 ～ 200 mg 经干燥的KBr 粉末在玛瑙研钵中轻轻研磨均匀， 在红外灯下操作. 经压片机压成薄片， 随即上机测定， 于4 000 ～ 400 cm－1红外光谱仪扫描。
2 结果与分析
2.1 蕨菜多糖的提取结果：蕨菜粗多糖为浅灰色，无味。易溶于水，热水中溶解度增大。不溶于丙酮、乙醚等非极性溶剂。干燥粉碎后的蕨菜细粉20g按法提取得到多糖1.248g,最终测定多糖得率为6.24%。
2.2 紫外光谱分析：我们在蕨菜多糖的紫外吸收光谱的260nm和280nm处未观察到任何吸收峰；而此处的吸收峰主要是核酸和蛋白质［15］，所以我们确定用Sevage法除蛋白后的蕨菜多糖中不含核酸、蛋白质。
2.3 红外光谱分析：根据图（1）我们在蕨菜多糖的红外吸收光谱中，发现在3600－3200cm-1, 3000－2800cm-1, 1400－1200cm-1, 1200－800cm-1,均有多糖特征峰；在891 cm-1处的吸收峰表明多糖结构中存在β吡喃糖苷键，3400 cm-1处出现的强而宽的峰显示蕨菜多糖中存在－OH，1600 cm-1处的峰是CO伸缩振动引起的吸收［16］- ［18］。
图1蕨菜多糖的红外光谱
3 结论
依据上述光谱分析，再结合Smith降解法等化学方法［19］：我们初步确定蕨菜多糖的一级结构中主要含有葡萄糖、半乳糖、鼠李糖、木糖、甘露糖，而具有β-D（1、4）连接的吡喃葡聚糖主链。
参考文献
［1］ 王新华，赵恒田，盛庆军. 蕨类山野菜人工繁殖及其研究进展［J］. 北方园艺，2004（ 6） ：4-5.
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［5］杨成生，朱红斌，薛睿，等. 采摘方式对蕨菜资源更新的影响［J］. 甘肃林业科技，2006（ 2） ：50-51.
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［7］郝丽珍，邵世勤，王萍，等. 蕨菜的营养成分及其利用研究［C］. 哈尔滨：中国园艺学会第四届青年学术讨论会论文
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［8］许广波，李艳茹，石铁源，等. 延边地区野生蕨菜资源及其研究进展［J］. 中国野生植物资源，2000，19（6）：30-35.
［9］张帆，罗水忠，高宝莼，等. 蕨菜的化学成分研究［J］.天然产物研究与开发，2004，16（2）:121-123.
［10］井泽良,刘兴华,关文强.真菌寡聚糖单糖组成（ H PLC） 分析及诱导抗病活性初步研究［J］.食品研究与开发,2006,27（1）:53-56.
［11］刘长福,刘涛,刘秀梅.高效液相色谱法测定香菇多糖的分子量［J］.化学工程师,2005,118（7）:28-29.
［12］颜军, 郭晓强, 邬晓勇, 等. 非衍生化H PLC 法分析银耳多糖中单糖组成的初步研究［J］.食品科学,2007,28（7）:446-449.
［13］戴金凤,李磊.紫萁多糖单糖组成及摩尔比G C 分析［J］.江西农业大学学报,2001,23（4）:492-495.
［14］Edge C J,R adem acher T W ,W orm ald M R ,et al.Fast Sequencingof O ligosacchrides: the R eagent-array A nalysis M ethod ［J］. ProcN atlA cad Sci,1992,89（4）:6 338-6 342.
［15］李尔春 天然植物多糖的结构及活性研究进展〔J］.食品工程,2007，（1）;44一46
［16］ 孟聚诚，高芳，李广林，等.8301多糖的纯化及光谱分析［J］.中兽医医药杂志.1999,2;5 6
［17］ 顾林，姜军，孙靖.山药多糖的分离纯化及其结构鉴定〔J］.食品科技，2007,5:109-r112
［18］ 徐任生，叶阳，赵维民.天然产物化学（第二版）［M］. 北京:科学出版社，2004. 510
［19］ 黄桂东，钟先锋.阿拉伯半乳聚糖的研究进展「1］.食品与机械.2006,22（ 4），141一144