【摘 要】目的采用兩种不同的细胞冻存液对Vero细胞的冻存效果进行研究。方法 本实验主要研究甘油和二甲基亚砜这两种细胞冷冻保护剂，以及他们与血清、基础培养基的不同配比与细胞冻存效果之间的关系。 结果发现不同的细胞冻存液在一定的所占比例内与细胞复苏后的成活率有一定的相关性，即在一定比例的冷冻剂保护下，细胞冻存的效果才会达到最佳。结论保护剂，无论是DMSO，还是甘油，其比例只有在10%-15%之间，细胞复苏后的成活率才达到最佳状态，即有利于细胞的冻存。且冷冻解冻后的细胞呈现正常的分裂增殖生长模式。
　　【关键词】DMSO；甘油；Vero细胞；细胞冻存
　　细胞培养是研究活组织和活细胞的良好方法。长期传代势必会影响细胞对微生物及一些有害有毒物质没有抵抗能力，也会造成资源浪费[1]。目前最常用的细胞冻存剂是DMSO和甘油，因此本实验主要研究这两种冷冻保护剂对细胞冻存效果的比较。本研究以DMEM为细胞培养液， 以DMSO或甘油作为冷冻保护剂，并添加胎牛血清组成冷冻保护液[2-3]，通过两种冻存液的不同配方及其不同配比对细胞冻存效果的比较采取最佳冷冻保护剂的比例将细胞冻存，为以后的工作提供更多便利，同时也节省了大量的资源。
　　1.3冻存液配制
　　本实验研究针对2种不同细胞冻存液的不同配方及其不同比例来进一步研究两种不同细胞冻存液对BHK21细胞冻存效果的影响。本实验研究在培养基为10%的前提条件下来改变小牛血清和DMSO或甘油的比例来研究对BHK21细胞冻存效果的影响。
　　2.结果
　　两种不同细胞冻存液的比较
　　实验中所使用的冻存液成分中，基础培养液的比例适中保持10%，只改变血清和保护剂的比例。
　　无论甘油还是DMSO保护剂的比例都在10%-15%之间细胞的成活率最高，对最适比例范围内的保护剂比例做进一步细化，每个浓度做4个平行试验。从表中可以看出在保护剂为1%-15%范围内，随着冻存液中保护剂的增加细胞存活率在逐渐增加，但之后随着动存液中保护剂的增加，细胞存活率在减小，当DMSO的比例在50%时，细胞存活率为0。
　　3.讨论
　　冷冻保存是体外培养BHK21细胞的核心技术之一， 随着细胞传代数的增加，细胞的增殖分化能力和遗传稳定性都降低，适时地将细胞冻存， 既可以避免因长期体外培养而引起的细胞变异或污染等情况，又可以得到条件均一、生长状况良好的细胞， 为BHK21细胞体外培养的后续试验奠定了稳定的基础从结果来看，DMSO 比甘油更适合BHK21细胞的冷冻保存， 原因可能是因为甘油是一种渗透性较差的物质，不能够迅速进入细胞，复苏后缓慢移除[4]。试验表明，冻存液中添加10%-15%DMSO的更适合BHK21细胞的冻存。复苏后从细胞的存活力、贴壁率来看细胞的冻存效果。
　　【参考文献】
　　[1]张元兴，易小萍，张立，等.动物细胞培养工程[M].北京：化学工业出版社，2007：56.
　　[2]MINGARI M C GEROSA F CARRA G et al. Human interleukin-2 promotes proliferation of activate B cells via surfacerecepors similar to those of activated T cells [J].Nature1984：312-641.
　　[3]Lucci CM，Kacinskis，MA，Lopes LHR，etal. Effect of differentcryoprotectants on the structural preservation of follicles in frozenzebu bovine （Bos indicus）ovarian tissue[J].Theriogenology，2004（61）：1101-1114.
　　[4]H.L.Bank，K.G.Brockbank.Basic principles of cryobiology[J].J CardSurg，1987，2（1）：137-143.