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【摘 要】为探讨山苦茶提取物对运动小鼠肝糖原和醛二酮的影响。方法 小鼠随机分为运动对照组和组。虫草组每天虫草混悬液灌胃， 对照组给予等量生理盐水。将30只SD 小鼠随机分为对照组和服药组，通过游泳训练6周后，测定力竭后对照组和服药组小鼠的肝糖原（LG）、肌糖原（MG）肝（肌）糖原和丙二醛（MDA）的生化指标。 结果表明：山苦茶组肝糖原（肌）含量显著高于对照组（P<0.05）；而丙二醛比对照组含量降低明显（ P<0.05） 。结论：说明山苦茶具有显著的抗疲劳效果， 能够提高小鼠的运动能力。
【关键词】山苦茶；丙二醛；肝糖原；肌糖原；小鼠
【中图分类号】R587.1 【文献标识码】B 【文章编号】1004-7484（2014）06-3468-01
山苦茶俗称为鹧鸪茶，系大戟科野生桐属，其主要分布在中国的海南岛、及雷州半岛一带。有研究报道，其含有丰富的多种矿物质、氨基酸等，具有清热解毒、利胆消食等功效，人们习惯把叶子晒干后泡制成茶，具有浓郁的海南地方特色和民族特色[1]。慢性疲劳已成为困扰人们的正常生活、工作，关于茶叶抗疲劳的已有报道表明绿茶、和普洱茶和乌龙茶等等，具有较好的抗疲劳作用[2]；本文以山苦茶作为原料，通过对运动小鼠的各项生化指标检测，探讨山苦茶对其作用效果。
1 材料与方法
1.1 实验动物 雄性昆明种小鼠， 体重25～ 30g， 由中山大学实验动物中心提供。按实验组分笼饲养， 同时购买基础饲料，自由进食和饮水，经过1周适应期后进行实验。
1.2 实验材料 材料为海南野生类型山苦茶， 由海南省当地农民提供。山苦茶提取物的制备将天然植物海南野生山苦茶加水浸泡1小时，煮沸2 次 每次1 h， 过滤，合并滤液，乙醇沉淀，静置48 h，回收滤液中的乙醇，浓缩滤液，使得每毫升滤液含生药0.10 g[2]。
1.3 实验方法
1.3.1 绞股蓝提取物的制备将天然植物海南野生绞股蓝加水浸泡1 h， 煮沸2 次， 每次1 h， 过滤，合并滤液，乙醇沉淀，静置48 h，回收滤液中的乙醇，浓缩滤液，使得每毫升滤液含生药0.10 g[3]
1.3.2 动物的给药和分组 将实验小白鼠随机分成2组：运动训练对照组、运动训练山苦茶预处理组， 并按每笼15只分笼饲养。给药组采用灌胃法给药， 按生药1.5 g/kg.d 的剂量进行灌胃（根据实验动物学和中药药理学， 按照60kg 成人用量9.3 倍进行计算）， 对照组灌胃相应剂量的生理盐水作为安慰剂。每天1次，连续6周。
1.3.3 训练方案训练组采用递增负荷式进行4周的游泳训练，每周游6 d，水温（31±1）℃，水深35cm。第1周每天游泳30 min，以后每周递加10min，至第6周游泳每天80min，第6周训练结束后处死，在处死前称重， 称重后进行最后1 次力竭性游泳， 记录游泳时间。力竭判断的标准为：当小鼠游至连续3 次没入水底，每次超过10 s，且放在平面上无法完成翻正反射视为力竭疲劳[4]。力竭运动后即刻处死。采用断头法采取血样后，用离心机以3 000 r/min 速度离心10 min，分离血清，检测 MDA. 然后立即取出肝脏和骨骼肌组织，置于冰生理盐水中洗净血液，检测LG和MG。
1.3 测试指标
根据实验研究的需要， 选择肝糖原（LG）、肌糖原（MG）肝（肌）糖原和丙二醛（MDA）的生化指标等作为测试指标，实验组和对照组进行对比测试.。
1.3.1 肌（ 肝） 糖原的测定 蒽酮比色法： 取出肝脏和骨骼肌组织， 用0.9%NaCl 溶液冲洗后， 再用滤纸吸干， 准确称取100g ， 放入盛有3mL30% KOH 的试管中， 置沸水浴30min， 取出冷却后， 将其转移至50mL 容量瓶中， 用水多次洗涤试管， 一并收入容量瓶， 加水至刻度， 摇匀待用。向样品管中加入1.0mL 去离子水， 空白管中加入2.0mL 去离子水， 标准管中加入2.0mL 标准葡萄糖液， 再向各试管中加入4.0mL 蒽酮比色液（ 当日配制） ， 摇匀， 置沸水浴10min， 冷却后在620nm 波长处测吸光值（ A） ， 空白管调零。
肌糖原含量（ g/100g 肌肉） = （ A 样品管/A 标准管ⅹ标准葡萄糖含量（mg）/1000ⅹ稀释倍数ⅹ100ⅹ0.9
上式中， 标准葡萄糖含量为0.10mg ； 稀释倍数为100； 0.9 为此法测得的葡萄糖含量换算成糖原含量的系数。
1.3.2 血丙二醛含量的测定： 采用硫代巴比妥酸法。分离血清， 按照试剂盒说明操作， 测定血丙二醛含量。
1.4 统计学分析
用SPSS12.0 统计软件对所测数据进行处理， 所有实验数据以均值±标准差（x±s）表示，均数间比较采用析因方差分析，P<0.05 有统计学意义。
2 结果
表2 绞股蓝对小鼠肝糖原和肌糖原的影响
组别 组数 肝糖原/（mgg-1） 肌糖原/（mg·g-1） 丙二醛nmol#ml-1）
对照组 15 3.05±4.16 1.06±1.02 4.93±0.73
山苦茶组 15 4.97±3.56* 2.32±0.94* 3.28±0.84*
* 与对照组比较P<0.05
3 讨论
目前寻找一种既能增强运动员的体能、延缓运动疲劳， 又能含有违禁成份以及毒副作用的药物或是食物，是现代运动医学界非常关注且热门的研究课题。运动性疲劳主要是指由运动引起身体能力下降的现象， 其产生的机制非常复杂， 有代谢产物堆積、能量耗竭、离子代谢紊乱、氧自由基损伤、保护性抑制等等多种学说。本文实验结果表明，山苦茶能够使运动小鼠无氧糖酵解增强，当机体缺氧或剧烈运动使肌肉局部血流相对不足时， 能量主要通过糖酵解获得。 运动能量重要的来源之一是糖原，糖原的储备量的提高则有助于提高运动耐力和延缓疲劳的产生，而肌糖原则是大强度运动的主要能量来源，在长时间大强度运动中， 运动前肌糖原的储量可以决定达到力竭的时间，并直接影响耐力训练和比赛的运动能力，因而，大多数专业人士认为 对一些以糖醇解供能为主的运动项目，赛前足够的肌糖原储备也是非常必要的，因为若肌糖原储量过低就会抑制乳酸生成和降低无氧代谢能力；肝糖原对运动能力的重要性反映则表现在耐力运动中， 在长时间亚极量的运动过程中，肌糖原首先被动员消耗，随着肌糖原的消耗的不断增加，为维持血糖水平，肝糖原分解加快，肝脏释放葡萄糖入血，导致肝糖原储备减少[5]. 本实验结果显示，山苦茶组小鼠肝糖原和肌糖原的含量明显高于各自的对照组，提示给小鼠服用山苦茶，对小鼠骨骼肌、肝细胞膜的正常结构和机能可能具有保护作用，可明显增加肝糖原及肌糖原的含量，增加其体内糖的储备量，以保证中枢神经系统、运动肌及红细胞等组织能量的充足供給，从而提高运动能力以及延缓运动性疲劳的发生。
近年研究表明， 运动造成骨骼肌脂质过氧化可导致肌纤维膜及线粒体膜等生物膜损伤， 从而引发细胞代谢和功能紊乱， 使肌肉工作能力下降进而产生疲劳[6]。本实验表明， 游泳运动可使机体血丙二醛含量有所增高， 提示机体脂质过氧化增强。脂质过氧化多为自由基（ free radical） 攻击生物膜造成的后果。山苦茶能显著降低血丙二醛含量， 说明其有抗氧化作用。
参考文献
[1] 刘国民.海南鹧鸪茶的民族植物学研究[J].海南师范大学学报，2007，20（6）：167.
[2] 梁勇，邵宛芳.云南绿茶的抗疲劳作用研究[J].食品工业科技，2011，32（1）：271.
[3] Rumley AG， Pettigrew AR， et al. Serum lactate dethydrogenaseand creatine kinase during marathon training [J]. Br J Sports Med，1985，19（13）：152-155.
[4] 龙碧波.海南野生绞股蓝抗运动性疲劳的实验研究[J].现代预防医学.2009 ，36 卷第4 期712-716.
[5] 龙碧波. 绞股蓝与运动性疲劳[J]. 中国临床康复， 2004， 8（30）： 6726-6727.
[6] Vol lestad NK， Sejerst ed OM. Biochemical correlat es of fat igue. A brief review[ J] . Eur J Appl Physiol Occup Physiol， 1988， 57（ 3） ： 336-347.
【关键词】山苦茶；丙二醛；肝糖原；肌糖原；小鼠
【中图分类号】R587.1 【文献标识码】B 【文章编号】1004-7484（2014）06-3468-01
山苦茶俗称为鹧鸪茶，系大戟科野生桐属，其主要分布在中国的海南岛、及雷州半岛一带。有研究报道，其含有丰富的多种矿物质、氨基酸等，具有清热解毒、利胆消食等功效，人们习惯把叶子晒干后泡制成茶，具有浓郁的海南地方特色和民族特色[1]。慢性疲劳已成为困扰人们的正常生活、工作，关于茶叶抗疲劳的已有报道表明绿茶、和普洱茶和乌龙茶等等，具有较好的抗疲劳作用[2]；本文以山苦茶作为原料，通过对运动小鼠的各项生化指标检测，探讨山苦茶对其作用效果。
1 材料与方法
1.1 实验动物 雄性昆明种小鼠， 体重25～ 30g， 由中山大学实验动物中心提供。按实验组分笼饲养， 同时购买基础饲料，自由进食和饮水，经过1周适应期后进行实验。
1.2 实验材料 材料为海南野生类型山苦茶， 由海南省当地农民提供。山苦茶提取物的制备将天然植物海南野生山苦茶加水浸泡1小时，煮沸2 次 每次1 h， 过滤，合并滤液，乙醇沉淀，静置48 h，回收滤液中的乙醇，浓缩滤液，使得每毫升滤液含生药0.10 g[2]。
1.3 实验方法
1.3.1 绞股蓝提取物的制备将天然植物海南野生绞股蓝加水浸泡1 h， 煮沸2 次， 每次1 h， 过滤，合并滤液，乙醇沉淀，静置48 h，回收滤液中的乙醇，浓缩滤液，使得每毫升滤液含生药0.10 g[3]
1.3.2 动物的给药和分组 将实验小白鼠随机分成2组：运动训练对照组、运动训练山苦茶预处理组， 并按每笼15只分笼饲养。给药组采用灌胃法给药， 按生药1.5 g/kg.d 的剂量进行灌胃（根据实验动物学和中药药理学， 按照60kg 成人用量9.3 倍进行计算）， 对照组灌胃相应剂量的生理盐水作为安慰剂。每天1次，连续6周。
1.3.3 训练方案训练组采用递增负荷式进行4周的游泳训练，每周游6 d，水温（31±1）℃，水深35cm。第1周每天游泳30 min，以后每周递加10min，至第6周游泳每天80min，第6周训练结束后处死，在处死前称重， 称重后进行最后1 次力竭性游泳， 记录游泳时间。力竭判断的标准为：当小鼠游至连续3 次没入水底，每次超过10 s，且放在平面上无法完成翻正反射视为力竭疲劳[4]。力竭运动后即刻处死。采用断头法采取血样后，用离心机以3 000 r/min 速度离心10 min，分离血清，检测 MDA. 然后立即取出肝脏和骨骼肌组织，置于冰生理盐水中洗净血液，检测LG和MG。
1.3 测试指标
根据实验研究的需要， 选择肝糖原（LG）、肌糖原（MG）肝（肌）糖原和丙二醛（MDA）的生化指标等作为测试指标，实验组和对照组进行对比测试.。
1.3.1 肌（ 肝） 糖原的测定 蒽酮比色法： 取出肝脏和骨骼肌组织， 用0.9%NaCl 溶液冲洗后， 再用滤纸吸干， 准确称取100g ， 放入盛有3mL30% KOH 的试管中， 置沸水浴30min， 取出冷却后， 将其转移至50mL 容量瓶中， 用水多次洗涤试管， 一并收入容量瓶， 加水至刻度， 摇匀待用。向样品管中加入1.0mL 去离子水， 空白管中加入2.0mL 去离子水， 标准管中加入2.0mL 标准葡萄糖液， 再向各试管中加入4.0mL 蒽酮比色液（ 当日配制） ， 摇匀， 置沸水浴10min， 冷却后在620nm 波长处测吸光值（ A） ， 空白管调零。
肌糖原含量（ g/100g 肌肉） = （ A 样品管/A 标准管ⅹ标准葡萄糖含量（mg）/1000ⅹ稀释倍数ⅹ100ⅹ0.9
上式中， 标准葡萄糖含量为0.10mg ； 稀释倍数为100； 0.9 为此法测得的葡萄糖含量换算成糖原含量的系数。
1.3.2 血丙二醛含量的测定： 采用硫代巴比妥酸法。分离血清， 按照试剂盒说明操作， 测定血丙二醛含量。
1.4 统计学分析
用SPSS12.0 统计软件对所测数据进行处理， 所有实验数据以均值±标准差（x±s）表示，均数间比较采用析因方差分析，P<0.05 有统计学意义。
2 结果
表2 绞股蓝对小鼠肝糖原和肌糖原的影响
组别 组数 肝糖原/（mgg-1） 肌糖原/（mg·g-1） 丙二醛nmol#ml-1）
对照组 15 3.05±4.16 1.06±1.02 4.93±0.73
山苦茶组 15 4.97±3.56* 2.32±0.94* 3.28±0.84*
* 与对照组比较P<0.05
3 讨论
目前寻找一种既能增强运动员的体能、延缓运动疲劳， 又能含有违禁成份以及毒副作用的药物或是食物，是现代运动医学界非常关注且热门的研究课题。运动性疲劳主要是指由运动引起身体能力下降的现象， 其产生的机制非常复杂， 有代谢产物堆積、能量耗竭、离子代谢紊乱、氧自由基损伤、保护性抑制等等多种学说。本文实验结果表明，山苦茶能够使运动小鼠无氧糖酵解增强，当机体缺氧或剧烈运动使肌肉局部血流相对不足时， 能量主要通过糖酵解获得。 运动能量重要的来源之一是糖原，糖原的储备量的提高则有助于提高运动耐力和延缓疲劳的产生，而肌糖原则是大强度运动的主要能量来源，在长时间大强度运动中， 运动前肌糖原的储量可以决定达到力竭的时间，并直接影响耐力训练和比赛的运动能力，因而，大多数专业人士认为 对一些以糖醇解供能为主的运动项目，赛前足够的肌糖原储备也是非常必要的，因为若肌糖原储量过低就会抑制乳酸生成和降低无氧代谢能力；肝糖原对运动能力的重要性反映则表现在耐力运动中， 在长时间亚极量的运动过程中，肌糖原首先被动员消耗，随着肌糖原的消耗的不断增加，为维持血糖水平，肝糖原分解加快，肝脏释放葡萄糖入血，导致肝糖原储备减少[5]. 本实验结果显示，山苦茶组小鼠肝糖原和肌糖原的含量明显高于各自的对照组，提示给小鼠服用山苦茶，对小鼠骨骼肌、肝细胞膜的正常结构和机能可能具有保护作用，可明显增加肝糖原及肌糖原的含量，增加其体内糖的储备量，以保证中枢神经系统、运动肌及红细胞等组织能量的充足供給，从而提高运动能力以及延缓运动性疲劳的发生。
近年研究表明， 运动造成骨骼肌脂质过氧化可导致肌纤维膜及线粒体膜等生物膜损伤， 从而引发细胞代谢和功能紊乱， 使肌肉工作能力下降进而产生疲劳[6]。本实验表明， 游泳运动可使机体血丙二醛含量有所增高， 提示机体脂质过氧化增强。脂质过氧化多为自由基（ free radical） 攻击生物膜造成的后果。山苦茶能显著降低血丙二醛含量， 说明其有抗氧化作用。
参考文献
[1] 刘国民.海南鹧鸪茶的民族植物学研究[J].海南师范大学学报，2007，20（6）：167.
[2] 梁勇，邵宛芳.云南绿茶的抗疲劳作用研究[J].食品工业科技，2011，32（1）：271.
[3] Rumley AG， Pettigrew AR， et al. Serum lactate dethydrogenaseand creatine kinase during marathon training [J]. Br J Sports Med，1985，19（13）：152-155.
[4] 龙碧波.海南野生绞股蓝抗运动性疲劳的实验研究[J].现代预防医学.2009 ，36 卷第4 期712-716.
[5] 龙碧波. 绞股蓝与运动性疲劳[J]. 中国临床康复， 2004， 8（30）： 6726-6727.
[6] Vol lestad NK， Sejerst ed OM. Biochemical correlat es of fat igue. A brief review[ J] . Eur J Appl Physiol Occup Physiol， 1988， 57（ 3） ： 336-347.