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【摘要】 目的 探讨LXA4可能改善幼年肥胖大鼠血管内皮功能损伤的作用。方法 50只三周龄断乳的雌性SD大鼠随机分为对照组（NC组n=8）及高脂组（HF组n=42），分别给予普通饲料及高脂饲料喂养6周。每周测身长及体重，计算Lee’s指数。6周后，内眦取血测定大鼠血清总胆固醇（TC），甘油三酯（TG），高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）。然后将造模成功的肥胖大鼠随机分为3组：模型组（LM组n=8）、脂氧素小剂量组（LS组n=8）、脂氧素大剂量组（LB组n=8），LS组及LB组分别给予0.5ug/（kg﹒d），2ug/（kg﹒d）的LXA4腹腔注射2周，其余两组给予相同体积的生理盐水腹腔注射。2周后，采用硝酸盐还原法测定大鼠血清一氧化氮（NO）水平。结果 ①HF组的体重、Lee，s指数明显高于NC组，（P<0.05）。②与NC组比较，HF组的TC、TG、LDL升高，HDL明显下降（P<0.05）。③实验结束时，LM组血清NO含量较NC组明显下降，LS组及LB组血清中NO含量与LM组比较均有明显升高（P<0.05），LB较LS组升高更为明显。结论 脂氧素A4可能存在通过提高肥胖大鼠血清一氧化氮水平，改善肥胖大鼠血管内皮功能损伤的作用。
【关键词】 肥胖；幼年大鼠；血管内皮功能；一氧化氮
文章编号：1004-7484（2013）-02-0896-02
血管内皮功能损伤是动脉粥样硬化形成的早期的始动环节和关键步骤[1]。一氧化氮（NO）是心血管系统中至关重要的信号分子，内皮功能紊乱以内皮NO水平的减少为特征。脂氧素（lipoxins，LXs）是一类内源性的抗炎介质，具有强有力的抗炎，抗增殖作用，被称为炎症的“刹车信号”。LXs在哮喘、急性肺损伤、肾炎、皮肤炎症及急性肝衰竭等疾病中发挥重要的保护作用。本文通过不同剂量的脂氧素干预幼年肥胖大鼠前后的一氧化氮（NO）水平的变化，探讨脂氧素可能改善肥胖大鼠血管内皮功能损伤的机制，为肥胖引起的相关疾病的防治提供新的思路。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物 健康雌性性SD大鼠32只，体重（40-60）g3周龄（来自徐州医学院实验动物中心）。
1.1.2 主要药物、试剂 脂氧素A4[5（S），6（R）-LipoxinA4]，美国Cayman公司生产，临用前用生理盐水配成所需浓度；一氧化氮试剂盒为南京建成生物工程研究所产品；总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇及低密度脂蛋白胆固醇采用全自动日立7080生化分析仪检测。
1.2 方法
1.2.1 实验动物模型建立 将50只SD大鼠采用随机数字表法随机分为对照组及高脂组。对照组给予普通饲料（由徐州医学院实验动物中心提供），模型组及干预组给予高脂饲料（高脂饲料是在100g基础饲料中加入猪油15g，鸡蛋15g，浓缩鱼肝油10滴，豆芽250g，芝麻油1g，奶粉5g，花生5g，蔗糖9g）。饲养6周后，以高脂组大鼠体重高于对照组的体重的20%，且阴道未开口作为肥胖大鼠，依此依据鉴别造模是否成功。本实验得到所需肥胖大鼠24只，将肥胖大鼠依据随机数字表法随机分为：模型组、脂氧素小剂量组、脂氧素大剂量组，LS组及LB组分别给予腹腔注射LXA40.5ug/kg，2ug/kg，LM组及NC组分别给予等量的生理盐水，连续用药2周，实验期间，对照组给予普通饲料喂养，其余3组均予饲以高脂饲料，实验结束予全部动物处死。
1.2.2 相关指标的测定 ①Lee，s指数的测定：每周定时测量身长及体重，计算Lee，s指数。Lee’s指数=体重1/3*103/身长（其数值大小反映大鼠体脂含量），体重单位为g，体长为鼻尖至肝门的长度，单位为cm。②血脂测定：造模成功后，两组大鼠禁食12h，内眦取血，3000r/转离心10分钟留取血清，送至徐州医学院附属医院，采用全自动生化分析仪检测血清TC，TG，HDL-C，LDL-C。③血管内皮舒张因子NO：实验结束时，各组大鼠禁食12h，麻醉后心脏采血，采用硝酸还原间接测定法测定血清NO水平。
1.3 统计方法 各项指标均采用均数±标准差（χ±s）表示采用SPSS16.0对结果进行统计处理，多组数据采用单因素方差分析，两组数据采用独立t检验，以P<0.05认为有统计学意义。
2 结果
2.1 体重及Lee’s指数比较 6周末测得大鼠体重及身长，计算Lee’s指数。结果示HF组的体重高于NC组，HF组的Lee’s指数高于NC组，且P<0.05，差异有统计学意义，见表1。
3 讨论
肥胖可以引起内皮细胞功能障碍，而内皮功能障碍又被认为是造成动脉粥样硬化的始动因素[2]。已有研究证实，单纯性肥胖症儿童已存在着血管内皮损伤及动脉内膜及中层厚度的改变[3]。动物实验也证明喂以高胆固醇食物的大鼠其血管内皮细胞表面经常出现破损、指状突起等损伤表现[4]。儿童单纯性肥胖普遍存在着脂质代谢异常，表现为TC、TG、LDL增高，HDL降低。肥胖个体存在内皮依赖性的舒张功能障碍，且与血清TG、TC、LDL成正相关，与HDL成负相关。血管内皮功能障碍主要表现为血管内皮释放NO减少，内皮依赖性的舒张功能损伤。NO除了引起血管舒张外，还可以协同前列腺素（PGI2）抑制血小板聚集，对抗血小板A2（TXA2）引起的血小板激活，防止血栓形成，从而预防血栓形成及动脉粥样硬化疾病的进程[5]。王翼[6]等曾报道，单纯性肥胖儿童NO和NOS降低，内皮素（ET）和血压升高，随着肥胖的程度增加上述改变更明显。
脂氧素在人体内首先被发现的具有抗炎和促进炎症消退的脂类介质，在抑制皮肤炎症、缺血再灌注损伤、腹膜炎、结肠炎、哮喘、胃肠炎、角膜炎等炎症过程的病理转归中发挥着重要作用[7]。动脉粥样硬化疾病也是一种血管炎性疾病，目前也已经证实其发生与LXs的合称降低有关[8]。在管状动脉成形术引起的斑块破裂时，可见血管中LXs产生增多。研究显示LXS可以刺激内皮细胞前列腺素的释放，具有血管松弛效應。阿司匹林诱导的脂氧素（aspirin trig-gered lipoxins，ATL）对一氧化氮合酶的表达具有调节效应，LXs同时能刺激学内皮NO的释放从而调节血管张力，并通过“类抑素”的作用引起血管内皮的扩张。 制備肥胖动物实验模型方法较多，如电刺激损伤、谷氨酸单钠选择性损伤下丘脑等。但这些方法操作复杂，不易掌握，且为下丘脑性肥胖模型。我们采用刚断乳的21天雌性大鼠，造模成功时间约在出生后9周左右，而大鼠的在6-10周龄处于青春期，我们以高脂饮食诱发的幼年雌性营养性肥胖模型，能在一定程度上复制出青少年单纯性肥胖症，且此方法简单易行。肥胖大鼠造模成功同时发生脂质代谢紊乱，血管内皮功能损伤。大鼠血清NO活性降低，说明肥胖大鼠存在血管内皮功能紊乱。应用的LXA4干预后，血清NO水平升高，且给予LXA4大剂量组血清NO水平明显高于小剂量组，提示LA4可以提高肥胖幼年大鼠血清NO水平，改善由高脂饮食引起的血管内皮细胞功能损伤，而是否存在剂量依赖性有待进一步研究。传统的降脂药物如他汀类，有肝肾损害，肌损害，消化道反应及增加脑出血的发生率等副作用，但脂氧素无明显副作用，全身应用不降低血压、肾功能、免疫功能及骨髓造血功能等，具有良好的应用前景。
综上所述，脂氧素可改善实验性幼年肥胖大鼠因高脂饮食所致的血管内皮功能损伤。但脂氧素在肥胖儿童的临床使用安全性方面，仍需进一步研究。相信随着对其作用机制的研究，脂氧素很有希望成为一种新型的血管内皮保护药应用于临床。
参考文献
[1] Bolad I，Delafontanie P.Endothelial dysfunction：its role in hypertension coronary disease[J].Curr Opin Cardiol，2005，20（4）：270-274.
[2] 张浩，任国庆.内皮组细胞与冠状动脉粥样硬化关系的研究进展[J].实用医学杂志，2009，25（5）：814-816.
[3] Zhu WH，Huang XM，HJ，et al.Arterial intima medial thickening and endothelial dysfunction in obese china children [J].Eur T pediator，2005 164（6）：337-344.
[4] 金咏梅，都鹏飞.单纯性儿童内皮损伤与动脉粥样硬化 [J].实用全科医学，2007，5（1）：74-75.
[5] 赵敏，万燕萍.幼年肥胖大鼠内皮细胞功能障碍与炎症因子的关系[J].中国儿童保健杂志，2009，17（3）：312-314.
[6] 陈瑶，王翼，李艳.单纯性肥胖儿童血管内皮功能检测及意义[J].山东医药，2007，47（35）：4-6.
[7] 胡珊，毛应启梁，王彦青.脂氧素在炎症中作用的研究进展[J].国际药学研究杂志，2011，38（2）：109-111.
[8] Nascimento-Silva V，Arruda MA，Barja-Fidalgo C，et al.Aspirin-triggered lipoxin A4 blocks reactive oxygen species generation in endothelial cells：a novel antioxidative mechanism[J].T hromb Haemost，2007，97（1）：88-98.
【关键词】 肥胖；幼年大鼠；血管内皮功能；一氧化氮
文章编号：1004-7484（2013）-02-0896-02
血管内皮功能损伤是动脉粥样硬化形成的早期的始动环节和关键步骤[1]。一氧化氮（NO）是心血管系统中至关重要的信号分子，内皮功能紊乱以内皮NO水平的减少为特征。脂氧素（lipoxins，LXs）是一类内源性的抗炎介质，具有强有力的抗炎，抗增殖作用，被称为炎症的“刹车信号”。LXs在哮喘、急性肺损伤、肾炎、皮肤炎症及急性肝衰竭等疾病中发挥重要的保护作用。本文通过不同剂量的脂氧素干预幼年肥胖大鼠前后的一氧化氮（NO）水平的变化，探讨脂氧素可能改善肥胖大鼠血管内皮功能损伤的机制，为肥胖引起的相关疾病的防治提供新的思路。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物 健康雌性性SD大鼠32只，体重（40-60）g3周龄（来自徐州医学院实验动物中心）。
1.1.2 主要药物、试剂 脂氧素A4[5（S），6（R）-LipoxinA4]，美国Cayman公司生产，临用前用生理盐水配成所需浓度；一氧化氮试剂盒为南京建成生物工程研究所产品；总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇及低密度脂蛋白胆固醇采用全自动日立7080生化分析仪检测。
1.2 方法
1.2.1 实验动物模型建立 将50只SD大鼠采用随机数字表法随机分为对照组及高脂组。对照组给予普通饲料（由徐州医学院实验动物中心提供），模型组及干预组给予高脂饲料（高脂饲料是在100g基础饲料中加入猪油15g，鸡蛋15g，浓缩鱼肝油10滴，豆芽250g，芝麻油1g，奶粉5g，花生5g，蔗糖9g）。饲养6周后，以高脂组大鼠体重高于对照组的体重的20%，且阴道未开口作为肥胖大鼠，依此依据鉴别造模是否成功。本实验得到所需肥胖大鼠24只，将肥胖大鼠依据随机数字表法随机分为：模型组、脂氧素小剂量组、脂氧素大剂量组，LS组及LB组分别给予腹腔注射LXA40.5ug/kg，2ug/kg，LM组及NC组分别给予等量的生理盐水，连续用药2周，实验期间，对照组给予普通饲料喂养，其余3组均予饲以高脂饲料，实验结束予全部动物处死。
1.2.2 相关指标的测定 ①Lee，s指数的测定：每周定时测量身长及体重，计算Lee，s指数。Lee’s指数=体重1/3*103/身长（其数值大小反映大鼠体脂含量），体重单位为g，体长为鼻尖至肝门的长度，单位为cm。②血脂测定：造模成功后，两组大鼠禁食12h，内眦取血，3000r/转离心10分钟留取血清，送至徐州医学院附属医院，采用全自动生化分析仪检测血清TC，TG，HDL-C，LDL-C。③血管内皮舒张因子NO：实验结束时，各组大鼠禁食12h，麻醉后心脏采血，采用硝酸还原间接测定法测定血清NO水平。
1.3 统计方法 各项指标均采用均数±标准差（χ±s）表示采用SPSS16.0对结果进行统计处理，多组数据采用单因素方差分析，两组数据采用独立t检验，以P<0.05认为有统计学意义。
2 结果
2.1 体重及Lee’s指数比较 6周末测得大鼠体重及身长，计算Lee’s指数。结果示HF组的体重高于NC组，HF组的Lee’s指数高于NC组，且P<0.05，差异有统计学意义，见表1。
3 讨论
肥胖可以引起内皮细胞功能障碍，而内皮功能障碍又被认为是造成动脉粥样硬化的始动因素[2]。已有研究证实，单纯性肥胖症儿童已存在着血管内皮损伤及动脉内膜及中层厚度的改变[3]。动物实验也证明喂以高胆固醇食物的大鼠其血管内皮细胞表面经常出现破损、指状突起等损伤表现[4]。儿童单纯性肥胖普遍存在着脂质代谢异常，表现为TC、TG、LDL增高，HDL降低。肥胖个体存在内皮依赖性的舒张功能障碍，且与血清TG、TC、LDL成正相关，与HDL成负相关。血管内皮功能障碍主要表现为血管内皮释放NO减少，内皮依赖性的舒张功能损伤。NO除了引起血管舒张外，还可以协同前列腺素（PGI2）抑制血小板聚集，对抗血小板A2（TXA2）引起的血小板激活，防止血栓形成，从而预防血栓形成及动脉粥样硬化疾病的进程[5]。王翼[6]等曾报道，单纯性肥胖儿童NO和NOS降低，内皮素（ET）和血压升高，随着肥胖的程度增加上述改变更明显。
脂氧素在人体内首先被发现的具有抗炎和促进炎症消退的脂类介质，在抑制皮肤炎症、缺血再灌注损伤、腹膜炎、结肠炎、哮喘、胃肠炎、角膜炎等炎症过程的病理转归中发挥着重要作用[7]。动脉粥样硬化疾病也是一种血管炎性疾病，目前也已经证实其发生与LXs的合称降低有关[8]。在管状动脉成形术引起的斑块破裂时，可见血管中LXs产生增多。研究显示LXS可以刺激内皮细胞前列腺素的释放，具有血管松弛效應。阿司匹林诱导的脂氧素（aspirin trig-gered lipoxins，ATL）对一氧化氮合酶的表达具有调节效应，LXs同时能刺激学内皮NO的释放从而调节血管张力，并通过“类抑素”的作用引起血管内皮的扩张。 制備肥胖动物实验模型方法较多，如电刺激损伤、谷氨酸单钠选择性损伤下丘脑等。但这些方法操作复杂，不易掌握，且为下丘脑性肥胖模型。我们采用刚断乳的21天雌性大鼠，造模成功时间约在出生后9周左右，而大鼠的在6-10周龄处于青春期，我们以高脂饮食诱发的幼年雌性营养性肥胖模型，能在一定程度上复制出青少年单纯性肥胖症，且此方法简单易行。肥胖大鼠造模成功同时发生脂质代谢紊乱，血管内皮功能损伤。大鼠血清NO活性降低，说明肥胖大鼠存在血管内皮功能紊乱。应用的LXA4干预后，血清NO水平升高，且给予LXA4大剂量组血清NO水平明显高于小剂量组，提示LA4可以提高肥胖幼年大鼠血清NO水平，改善由高脂饮食引起的血管内皮细胞功能损伤，而是否存在剂量依赖性有待进一步研究。传统的降脂药物如他汀类，有肝肾损害，肌损害，消化道反应及增加脑出血的发生率等副作用，但脂氧素无明显副作用，全身应用不降低血压、肾功能、免疫功能及骨髓造血功能等，具有良好的应用前景。
综上所述，脂氧素可改善实验性幼年肥胖大鼠因高脂饮食所致的血管内皮功能损伤。但脂氧素在肥胖儿童的临床使用安全性方面，仍需进一步研究。相信随着对其作用机制的研究，脂氧素很有希望成为一种新型的血管内皮保护药应用于临床。
参考文献
[1] Bolad I，Delafontanie P.Endothelial dysfunction：its role in hypertension coronary disease[J].Curr Opin Cardiol，2005，20（4）：270-274.
[2] 张浩，任国庆.内皮组细胞与冠状动脉粥样硬化关系的研究进展[J].实用医学杂志，2009，25（5）：814-816.
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[6] 陈瑶，王翼，李艳.单纯性肥胖儿童血管内皮功能检测及意义[J].山东医药，2007，47（35）：4-6.
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