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摘要：目的 建立补心软脉颗粒的质量控制方法。方法 采用薄层色谱法对制剂中的麦冬、山萸肉、水蛭、银杏叶、虎杖进行定性鉴别，采用高效液相色谱法对制剂中红景天苷、马钱苷的含量进行测定。结果 薄层色谱能够检出麦冬、山萸肉、水蛭、银杏叶、虎杖。红景天苷在0.290 2～2.902 4 μg范围内线性关系良好，平均回收率（n=6）为99.64%（RSD=2.72%），马钱苷在0.083 1～0.831 2 μg范围内线性关系良好，平均回收率（n=6）为100.12%（RSD=2.27%）。结论 本方法简便、准确，重复性好，可有效控制补心软脉颗粒的质量。
关键词：补心软脉颗粒；薄层色谱法；高效液相色谱法；红景天苷；马钱苷
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）10-0046-03
补心软脉颗粒为江苏省中医院院内制剂，由红景天、麦冬、山萸肉、水蛭、银杏叶、虎杖6味中药组成，具有补益心肾、化瘀通络的功能，临床用于气阴两虚、痰血阻络型冠心病心绞痛。本研究采用薄层色谱法对制剂中的麦冬、山萸肉、水蛭、银杏叶、虎杖进行定性鉴别，采用高效液相色谱法（HPLC）对制剂中红景天苷、马钱苷进行定量研究，为建立该制剂的质量控制方法提供参考依据。
1 仪器与试药
Waters 2695-2996高效液相色谱系统，2998PAD检测器， Empower工作站（Waters公司）；色谱柱为Hedera C18（4.6 mm×250 mm，5 ?m）；BP-211D型电子分析天平（德国赛多利斯公司）；超声仪（SK6200H，上海科导超声仪器有限公司）；939薄层制板器（重庆市南岸贝尔德仪器技术厂）；凝胶成像分析仪（WD-9413A型，北京市六一仪器厂）。
红景天苷、马钱苷对照品为含量测定用，均购自于四川维克奇生物科技有限公司，批号分别为100826、111127；对照药材麦冬、山萸肉、水蛭、银杏叶、虎杖均购自中国药品生物制品检定所，批号分别为121013-200908、121495-200702、121061-200904、121160-201003、120980-201005；制剂所用饮片经检验，均符合2010年版《中华人民共和国药典》（一部）项下相关要求和规定。液相测定用甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。补心软脉颗粒（江苏省中医院，批号121210、121215、121220，规格10 g/袋），阴性样品按补心软脉颗粒制备工艺自制。
2 方法与结果
2.1 薄层色谱鉴别
2.1.1 麦冬 取补心软脉颗粒10 g，加5%HCl 50 mL水解1 h，取出，趁热过滤，滤液放冷后用二氯甲烷萃取2次，每次50 mL，合并二氯甲烷液，挥干，残渣加甲醇1 mL溶解，作为供试品溶液；取缺麦冬的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备麦冬阴性对照溶液；取麦冬对照药材3 g，加甲醇50 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣自“加5%HCl 50 mL”起同法制成对照药材溶液。吸取上述3种溶液各10 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯-甲酸（4∶4∶1.6）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105 ℃加热至斑点清晰，置紫外光（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性未见干扰。
2.1.2 山萸肉 取补心软脉颗粒10 g，加无水乙醇25 mL，超声30 min，滤过，滤液浓缩至5 mL，作为供试品溶液；取缺山萸肉的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备山萸肉阴性对照溶液；取山萸肉对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。吸取上述3种溶液各10 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-乙醇-冰醋酸（50∶10∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，105 ℃加热至斑点清晰，置日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的斑点，阴性未见干扰。
2.1.3 水蛭 取补心软脉颗粒5 g，加无水乙醇50 mL，超声30 min，滤过，滤液浓缩至5 mL，作为供试品溶液；取缺水蛭的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备水蛭阴性对照溶液；取水蛭对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。吸取上述3种溶液各10 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯（4∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10 %硫酸乙醇溶液，105 ℃加热至斑点清晰，置紫外光（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性未见干扰。
2.1.4 银杏叶 取补心软脉颗粒5 g，加甲醇25 mL，加热回流30 min，取出，趁热过滤，滤液蒸干，残渣加水25 mL使溶解，用二氯甲烷萃取2次，每次50 mL，合并水层液，挥干，残渣加甲醇5 mL溶解，作为供试品溶液；取缺银杏叶的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备银杏叶阴性对照溶液；取银杏叶对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。吸取上述3种溶液各5 ?L，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以40%乙酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3%AlCl3乙醇溶液，热风吹干，置紫外光（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性未见干扰。
2.1.5 虎杖 取补心软脉颗粒5 g，加5%HCl 50 mL水解1 h，取出，趁热过滤，放冷，滤液用二氯甲烷萃取2次，每次50 mL，合并二氯甲烷液，挥干，残渣加二氯甲烷5 mL使溶解，作为供试品溶液；取缺虎杖的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备虎杖的阴性对照溶液；取虎杖对照药材0.2 g，加甲醇50 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣自“加5%HCl 50 mL”起同法制成对照药材溶液。吸取上述3种溶液各10 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性未见干扰。
关键词：补心软脉颗粒；薄层色谱法；高效液相色谱法；红景天苷；马钱苷
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）10-0046-03
补心软脉颗粒为江苏省中医院院内制剂，由红景天、麦冬、山萸肉、水蛭、银杏叶、虎杖6味中药组成，具有补益心肾、化瘀通络的功能，临床用于气阴两虚、痰血阻络型冠心病心绞痛。本研究采用薄层色谱法对制剂中的麦冬、山萸肉、水蛭、银杏叶、虎杖进行定性鉴别，采用高效液相色谱法（HPLC）对制剂中红景天苷、马钱苷进行定量研究，为建立该制剂的质量控制方法提供参考依据。
1 仪器与试药
Waters 2695-2996高效液相色谱系统，2998PAD检测器， Empower工作站（Waters公司）；色谱柱为Hedera C18（4.6 mm×250 mm，5 ?m）；BP-211D型电子分析天平（德国赛多利斯公司）；超声仪（SK6200H，上海科导超声仪器有限公司）；939薄层制板器（重庆市南岸贝尔德仪器技术厂）；凝胶成像分析仪（WD-9413A型，北京市六一仪器厂）。
红景天苷、马钱苷对照品为含量测定用，均购自于四川维克奇生物科技有限公司，批号分别为100826、111127；对照药材麦冬、山萸肉、水蛭、银杏叶、虎杖均购自中国药品生物制品检定所，批号分别为121013-200908、121495-200702、121061-200904、121160-201003、120980-201005；制剂所用饮片经检验，均符合2010年版《中华人民共和国药典》（一部）项下相关要求和规定。液相测定用甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。补心软脉颗粒（江苏省中医院，批号121210、121215、121220，规格10 g/袋），阴性样品按补心软脉颗粒制备工艺自制。
2 方法与结果
2.1 薄层色谱鉴别
2.1.1 麦冬 取补心软脉颗粒10 g，加5%HCl 50 mL水解1 h，取出，趁热过滤，滤液放冷后用二氯甲烷萃取2次，每次50 mL，合并二氯甲烷液，挥干，残渣加甲醇1 mL溶解，作为供试品溶液；取缺麦冬的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备麦冬阴性对照溶液；取麦冬对照药材3 g，加甲醇50 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣自“加5%HCl 50 mL”起同法制成对照药材溶液。吸取上述3种溶液各10 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯-甲酸（4∶4∶1.6）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105 ℃加热至斑点清晰，置紫外光（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性未见干扰。
2.1.2 山萸肉 取补心软脉颗粒10 g，加无水乙醇25 mL，超声30 min，滤过，滤液浓缩至5 mL，作为供试品溶液；取缺山萸肉的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备山萸肉阴性对照溶液；取山萸肉对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。吸取上述3种溶液各10 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-乙醇-冰醋酸（50∶10∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，105 ℃加热至斑点清晰，置日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的斑点，阴性未见干扰。
2.1.3 水蛭 取补心软脉颗粒5 g，加无水乙醇50 mL，超声30 min，滤过，滤液浓缩至5 mL，作为供试品溶液；取缺水蛭的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备水蛭阴性对照溶液；取水蛭对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。吸取上述3种溶液各10 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯（4∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10 %硫酸乙醇溶液，105 ℃加热至斑点清晰，置紫外光（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性未见干扰。
2.1.4 银杏叶 取补心软脉颗粒5 g，加甲醇25 mL，加热回流30 min，取出，趁热过滤，滤液蒸干，残渣加水25 mL使溶解，用二氯甲烷萃取2次，每次50 mL，合并水层液，挥干，残渣加甲醇5 mL溶解，作为供试品溶液；取缺银杏叶的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备银杏叶阴性对照溶液；取银杏叶对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。吸取上述3种溶液各5 ?L，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以40%乙酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3%AlCl3乙醇溶液，热风吹干，置紫外光（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性未见干扰。
2.1.5 虎杖 取补心软脉颗粒5 g，加5%HCl 50 mL水解1 h，取出，趁热过滤，放冷，滤液用二氯甲烷萃取2次，每次50 mL，合并二氯甲烷液，挥干，残渣加二氯甲烷5 mL使溶解，作为供试品溶液；取缺虎杖的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备虎杖的阴性对照溶液；取虎杖对照药材0.2 g，加甲醇50 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣自“加5%HCl 50 mL”起同法制成对照药材溶液。吸取上述3种溶液各10 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性未见干扰。