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【摘要】目的探讨红细胞免疫相关表面分子CD35与疟疾感染的相关性。方法选择桂西地区少数民族人群曾经感染或者正在感染疟疾的587例患者（疟疾易感组）和560例健康成年人（非易感组）作为观察对象，运用流式细胞术检测红细胞表面分子CD35的表达水平，以探讨疟疾感染与红细胞免疫功能的关系。结果疟疾易感组红细胞CD35平均荧光强度为（60.81±29.73），明显低于非易感组的（67.93±25.05），组间比较有统计学意义（t=43935，P=0.000）。结论桂西地区少数民族疟疾易感人群中，红细胞表面分子CD35与疟疾感染有着较为密切的联系，为疟疾感染的诊断和治疗提供了新思路，其具体作用机制有待进一步研究。
【关键词】疟疾；红细胞免疫；CD35
文章编号：1003-1383（2013）03-0321-03中图分类号：R34 文献标识码：A
疟疾是疟原虫寄生于人体所引起的传染病，广泛分布于热带、亚热带及温带边缘地区，在多数热带地区仍然是一种多见的公共健康问题，而桂西地处亚热带，也是疟疾的高发地区，其流行对该地区各民族分布产生了深远影响。近年来许多研究表明，疟疾的感染与红细胞的黏附功能有关[1]，许多病理特征都与疟原虫感染和红细胞相互作用有关。而红细胞膜表面存在着大量的黏附相关分子，它们可能是红细胞发挥抗疟免疫功能的重要分子基础[2]。因此，该课题成为医学界研究的热点之一，笔者曾经对相关课题作了初步研究[3～5]，本研究主要运用流式细胞术测定红细胞表面分子CD35表达水平，旨在探讨疟疾的感染与红细胞免疫功能的相关性，现报道如下。对象与方法1.实验对象以桂西地区经历过疟疾流行的人群为研究对象，按疟疾易感者和非易感者分为两个组，其中疟疾易感组587例，主要为曾经感染或者正在感染疟疾的患者，均为居住在桂西地区的少数民族人群。男345例，女242例，年龄20～75（43.2±15.3）岁。另选择560例健康成年人（非易感组）作
※基金项目：广西自然科学基金课题（桂科自0728247）；国家自然科学基金课题（81160212）。
作者简介：陈文成（1975-），男，广西宁明县人，硕士，暨南大学在读博士，从事临床微生物学及免疫学检验工作。E为对照，男357例，女203例，年龄20～72（44.8±13.8）岁，健康对照组为同一生活环境内、随机抽样的成年人，均未感染过疟疾。两组的年龄、性别、居住环境比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。
2.主要试剂所有试剂均从BD公司购买：CD35荧光抗体、同型对照IgG1抗体、校准微球。软件为BD FACSDivaTM，用BD FACSCantoTMⅡ流式细胞仪检测。
4.统计学方法所得数据用SPSS 13.0软件包进行分析，计量资料以（-±s）表示，两独立样本的比较用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。 结果 疟疾易感组红细胞CD35平均荧光强度为（6081±2973），明显低于非易感组的（6793±2505），组间比较有统计学意义（t=43935，P=0000）。说明红细胞表面分子CD35与疟疾感染有着较为密切的联系。封四图1为疟疾易感者红细胞CD35平均荧光强度检测图。讨论疟疾是种群进化进程中自然界对人类基因进行选择的重要因素之一，人类的基因组中，有的基因赋予了人类抵抗疟疾的能力，使他们能够在疟疾流行区中得以存活下来，这些基因在特定人群中也得以浓集，从而影响了人类的健康，也导致了某一群体中的这些基因特殊的平衡多态性[3]。桂西地区是壮族居住最密集的地区，也是地中海贫血等遗传性红细胞缺陷及疟疾的高发区[6]，疟疾危害在20世纪中期得到了有效控制，但在80年代该地区仍有三次大的流行，疟疾又开始死灰复燃，并有愈演愈烈之势[7]。
疟疾感染和红细胞免疫有密切联系，近年来国外有研究显示[8，9]，疟疾的感染与红细胞黏附功能有关。红细胞膜表面的一些受体是疟原虫侵入红细胞过程所必需的，已有研究表明红细胞补体受体Ⅰ（CR1）介导的免疫黏附功能、异常血红蛋白等红细胞疾病均与抵抗疟原虫感染免疫有关[10]。多年前，CR1又被认为是疟疾患者红细胞形成玫瑰花结的主要受体，恶性疟疾具有在试管中使未感染红细胞黏附感染细胞形成细胞团的能力，在非洲的众多研究中都发现，许多严重的疟疾患者都有这种细胞成团的现象[11]。因此，研究者对CR1基因多态性越来越感兴趣，不断探索CR1在严重疟疾致病中的作用。近年来的研究结果进一步支持CR1与严重疟疾的致病性有关，首先，Cockburn等发现，在巴布亚新几内亚，导致CR1低表达的基因型在疟疾高发区极常见，且与严重疟疾的保护相关联[9]。但在其它人群的研究中都给出矛盾的报道，如在泰国成人中，低表达CR1与严重疟疾保护有关；在冈比亚人群的研究中，低表达CR1对严重疟疾无保护作用[8]。这些不同的观察结果可能是因为CR1表达随年龄变化，不同疟疾高发区的流行型不同以及CR1与其他基因相互作用结果不同而异。因此，各地区有必要对CR1与疟疾的致病和保护作用作进一步深入的研究。
我们的研究结果显示：疟疾易感者和非易感者红细胞CD35平均荧光强度比较有统计学意义（P<0.01），疟疾易感者红细胞CD35分子的平均荧光强度明显低于非易感者，该地区疟疾易感者CR1低表达可能与疟疾的保护相关联。CR1是一个分子约为200KD的单链糖蛋白，是红细胞执行免疫功能的主要分子基础，其主要功能是通过CR1促进免疫复合物由循环中完全清除。无论是红细胞上CR1 的表达降低，还是红细胞黏附功能下降，均会引起机体免疫功能低下，而本研究结果显示疟疾易感者红细胞CD35分子的平均荧光强度明显低于健康对照者，提示红细胞免疫功能下降，有利于疟原虫侵入，这为疟疾感染的诊断和治疗提供了新思路。
目前，虽然有关红细胞的其他多种免疫功能并未得到普遍认可[11]，但已有相当数量的研究，尤其是近年来红细胞黏附作用在抗疟疾免疫方面的作用越来越受到人们关注[12]。而红细胞膜表面存在着大量的免疫相关分子，如CD35、CD44、CD47、CD55、CD58、CD59等，它们中有些可能是红细胞发挥抗疟免疫功能的重要分子基础，CD35是参与红细胞免疫-±s）
【关键词】疟疾；红细胞免疫；CD35
文章编号：1003-1383（2013）03-0321-03中图分类号：R34 文献标识码：A
疟疾是疟原虫寄生于人体所引起的传染病，广泛分布于热带、亚热带及温带边缘地区，在多数热带地区仍然是一种多见的公共健康问题，而桂西地处亚热带，也是疟疾的高发地区，其流行对该地区各民族分布产生了深远影响。近年来许多研究表明，疟疾的感染与红细胞的黏附功能有关[1]，许多病理特征都与疟原虫感染和红细胞相互作用有关。而红细胞膜表面存在着大量的黏附相关分子，它们可能是红细胞发挥抗疟免疫功能的重要分子基础[2]。因此，该课题成为医学界研究的热点之一，笔者曾经对相关课题作了初步研究[3～5]，本研究主要运用流式细胞术测定红细胞表面分子CD35表达水平，旨在探讨疟疾的感染与红细胞免疫功能的相关性，现报道如下。对象与方法1.实验对象以桂西地区经历过疟疾流行的人群为研究对象，按疟疾易感者和非易感者分为两个组，其中疟疾易感组587例，主要为曾经感染或者正在感染疟疾的患者，均为居住在桂西地区的少数民族人群。男345例，女242例，年龄20～75（43.2±15.3）岁。另选择560例健康成年人（非易感组）作
※基金项目：广西自然科学基金课题（桂科自0728247）；国家自然科学基金课题（81160212）。
作者简介：陈文成（1975-），男，广西宁明县人，硕士，暨南大学在读博士，从事临床微生物学及免疫学检验工作。E为对照，男357例，女203例，年龄20～72（44.8±13.8）岁，健康对照组为同一生活环境内、随机抽样的成年人，均未感染过疟疾。两组的年龄、性别、居住环境比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。
2.主要试剂所有试剂均从BD公司购买：CD35荧光抗体、同型对照IgG1抗体、校准微球。软件为BD FACSDivaTM，用BD FACSCantoTMⅡ流式细胞仪检测。
4.统计学方法所得数据用SPSS 13.0软件包进行分析，计量资料以（-±s）表示，两独立样本的比较用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。 结果 疟疾易感组红细胞CD35平均荧光强度为（6081±2973），明显低于非易感组的（6793±2505），组间比较有统计学意义（t=43935，P=0000）。说明红细胞表面分子CD35与疟疾感染有着较为密切的联系。封四图1为疟疾易感者红细胞CD35平均荧光强度检测图。讨论疟疾是种群进化进程中自然界对人类基因进行选择的重要因素之一，人类的基因组中，有的基因赋予了人类抵抗疟疾的能力，使他们能够在疟疾流行区中得以存活下来，这些基因在特定人群中也得以浓集，从而影响了人类的健康，也导致了某一群体中的这些基因特殊的平衡多态性[3]。桂西地区是壮族居住最密集的地区，也是地中海贫血等遗传性红细胞缺陷及疟疾的高发区[6]，疟疾危害在20世纪中期得到了有效控制，但在80年代该地区仍有三次大的流行，疟疾又开始死灰复燃，并有愈演愈烈之势[7]。
疟疾感染和红细胞免疫有密切联系，近年来国外有研究显示[8，9]，疟疾的感染与红细胞黏附功能有关。红细胞膜表面的一些受体是疟原虫侵入红细胞过程所必需的，已有研究表明红细胞补体受体Ⅰ（CR1）介导的免疫黏附功能、异常血红蛋白等红细胞疾病均与抵抗疟原虫感染免疫有关[10]。多年前，CR1又被认为是疟疾患者红细胞形成玫瑰花结的主要受体，恶性疟疾具有在试管中使未感染红细胞黏附感染细胞形成细胞团的能力，在非洲的众多研究中都发现，许多严重的疟疾患者都有这种细胞成团的现象[11]。因此，研究者对CR1基因多态性越来越感兴趣，不断探索CR1在严重疟疾致病中的作用。近年来的研究结果进一步支持CR1与严重疟疾的致病性有关，首先，Cockburn等发现，在巴布亚新几内亚，导致CR1低表达的基因型在疟疾高发区极常见，且与严重疟疾的保护相关联[9]。但在其它人群的研究中都给出矛盾的报道，如在泰国成人中，低表达CR1与严重疟疾保护有关；在冈比亚人群的研究中，低表达CR1对严重疟疾无保护作用[8]。这些不同的观察结果可能是因为CR1表达随年龄变化，不同疟疾高发区的流行型不同以及CR1与其他基因相互作用结果不同而异。因此，各地区有必要对CR1与疟疾的致病和保护作用作进一步深入的研究。
我们的研究结果显示：疟疾易感者和非易感者红细胞CD35平均荧光强度比较有统计学意义（P<0.01），疟疾易感者红细胞CD35分子的平均荧光强度明显低于非易感者，该地区疟疾易感者CR1低表达可能与疟疾的保护相关联。CR1是一个分子约为200KD的单链糖蛋白，是红细胞执行免疫功能的主要分子基础，其主要功能是通过CR1促进免疫复合物由循环中完全清除。无论是红细胞上CR1 的表达降低，还是红细胞黏附功能下降，均会引起机体免疫功能低下，而本研究结果显示疟疾易感者红细胞CD35分子的平均荧光强度明显低于健康对照者，提示红细胞免疫功能下降，有利于疟原虫侵入，这为疟疾感染的诊断和治疗提供了新思路。
目前，虽然有关红细胞的其他多种免疫功能并未得到普遍认可[11]，但已有相当数量的研究，尤其是近年来红细胞黏附作用在抗疟疾免疫方面的作用越来越受到人们关注[12]。而红细胞膜表面存在着大量的免疫相关分子，如CD35、CD44、CD47、CD55、CD58、CD59等，它们中有些可能是红细胞发挥抗疟免疫功能的重要分子基础，CD35是参与红细胞免疫-±s）