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摘要[目的] 建立马罗匹坦注射液中磺丁倍他环糊精钠的含量测定方法。[方法] 采用分子排阻色谱法，以0.1 mol/L硝酸钾溶液-甲醇（65∶35）为流动相，采用分子排阻色谱法检测马罗匹注射液中磺丁倍他环糊精钠的含量。[结果] 磺丁倍他环糊精钠与相邻峰的分离度均大于3.0；在6～180 μg范围内峰面积与浓度呈良好的线性关系（r=0.999 9，n=8）；在80%、100%、120% 3种添加水平下的平均回收率分别为95.96%（RSD=0.5%，n=3）、98.41% （RSD=0.4%，n=3）、97.77%（RSD=0.5%，n=3）。[结论] 该方法专属性强、准确度好、适应范围宽，可作为马罗匹坦注射液中磺丁倍他环糊精钠的含量测定方法。
关键词磺丁倍他环糊精钠；马罗匹坦注射液；分子排阻色谱法
中图分类号S859.79文献标识码
A文章编号0517-6611（2015）21-154-03
马罗匹坦是1型神经激肽（NK1）的受体拮抗剂，可通过抑制P物质（引起呕吐的关键性神经递质）而作用于中枢神经系统。马罗匹坦注射液可以用于预防和治疗犬的急性呕吐。
磺丁倍他环糊精钠（SBECD）作为赋形剂添加于马罗匹坦注射液中，由于其对含氮类药物具有特殊的亲和力和包合性，因此主要用于提高药物的溶解性和生物利用度。但是，有研究发现重复给药时容易出现肾脏蓄积，因此需要对制剂中SBECD的含量进行准确控制。笔者采用分子排阻色谱法测定了马罗匹坦注射液中SBECD的含量，并对其进行了方法学考察。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1主要试剂。磺丁倍他环糊精钠对照品，纯度95.8%，购自美国辉瑞公司；马罗匹坦注射液购自美国辉瑞公司；甲醇，色谱纯；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。
1.1.2主要仪器。高效液相色谱仪， 2695型，配有410示差折光检测器和EmpowerⅡ工作站，为美国Waters公司产品；电子分析天平，AE240型，为瑞士METTLERTOLEDO公司产品。
1.2方法
1.2.1色谱条件。色谱柱为YMCDiol60（8.0 mm×300 mm，5 μm），柱温为35 ℃；流动相为0.1 mol/L硝酸钾溶液-甲醇（65∶35），流速2.0 ml/min；示差折光检测器，检测器温度为35 ℃；进样量为10 μl。
1.2.2溶液制备。
1.2.2.1SBECD对照品储备液。取SBECD对照品约600 mg，精密称量，置于10 ml量瓶中，加入流动相使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度约为60 mg/ml的对照品储备液。
1.2.2.2样品溶液。精密量取马罗匹坦注射液1 ml，置于10 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得样品溶液。
1.2.2.3陰性样品溶液。按照马罗匹坦注射液的处方，配制不含有SBECD的阴性样品；按照“1.2.2.2”中样品溶液的制备方法，配制阴性样品溶液。
1.2.3方法学考察。
1.2.3.1专属性考察。精密量取对照品储备液1 ml，置于10 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，即得对照品溶液。精密量取对照品溶液和阴性样品溶液各10 μl，按照“1.2.1”中的色谱条件进行测定，记录色谱图。
1.2.3.2线性关系考察。精密量取对照品储备液0.1、0.2、0.3、0.5、1.0、1.5、2.0、3.0 ml，分别置于10 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得到浓度分别为0.6、1.2、1.8、3.0、6.0、9.0、12.0、18.0 mg/ml的对照品溶液。按照“1.2.1”中的色谱条件，进样测定，记录色谱图，以浓度X（mg/ml）对峰面积Y作图，并进行统计学处理。
1.2.3.3精密度试验。精密量取对照品储备液1 ml置于10 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得到浓度约为6 mg/ml的对照品溶液，按照“1.2.1”中的色谱条件进样测定，连续进样6次，计算SBECD峰面积的RSD。
1.2.3.4稳定性试验。 取制备的样品溶液，分别于0、8、16、24、32、48 h按照“1.2.1”中的色谱条件进样测定，计算SBECD峰面积的RSD。
1.2.3.5加样回收率试验。按照“1.2.1”中的色谱条件，对马罗匹坦注射液中SBECD的含量进行测定，结果其含量为62.13 mg/ml。
精密量取马罗匹坦注射液0.5 ml，共量取9份，分别置于10 ml量瓶中；每3份为1组，将上述9份样品分为3组，每组分别精密加入SBECD对照品储备液0.4、0.5、0.6 ml，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得到添加水平约为80%、100%和120%的3组样品，按照“1.2.1”中的色谱条件分别进样测定，计算加样回收率。
1.2.3.6检出限和定量限。按照“1.2.2”中对照品储备液的配制方法制备不同浓度的SBECD对照品溶液，按照“1.2.1”中的色谱条件进样测定，计算信噪比。信噪比为3和10时的浓度即分别为SBECD的检出限和定量限。
1.2.4样品含量的测定。 按照“1.2.2”中对照品储备液的配制方法，制备浓度约为6 mg/ml的SBECD对照品溶液，精密吸取样品溶液和对照品溶液各10 μl，按照“1.2.1”中的色谱条件进行测定，记录色谱图，按照外标法以峰面积计算马罗匹坦注射液中SBECD的含量。
2结果与分析
2.1方法学考察
2.1.1专属性考察。从图1可以看出，阴性样品在SBECD色谱峰位置处无吸收峰，表明样品中的其他成分对SBECD的测定结果无干扰。 2.1.2SBECD的标准曲线。从图2可以看出，在0.6～18.0 mg/ml的范围内，SBECD浓度X与峰面积Y之间呈良好的线性关系。回归方程Y=23 119X-1 685.5 （r=0.999 9，n=8）。
2.1.3精密度试验。 连续进样6次，SBECD峰面积的RSD=0.3%（n=6），结果表明该方法的精密度良好。
2.1.4稳定性试验。稳定性试验结果表明，48 h内SBECD峰面积的RSD为0.2%（n=6），表明样品溶液在48 h内稳定。
2.1.5加样回收率。由表1可知，在80%～120%的添加水平下，SBECD的回收率为95%～98%。
2.1.6检出限和定量限。当SBECD浓度为0.3 mg/ml时，信噪比为13.2；当SBECD浓度为0.1 mg/ml时，信噪比为4.6。因此，该方法的检出限约为0.1 mg/ml，定量限约为0.3 mg/ml。
2.2样品含量应用笔者建立的方法对马罗匹坦注射液中的SBECD含量进行测定，结果见表2。从图3可以看出，SBECD峰与其他峰的分离度良好，结果准確可靠，说明该方法可作为马罗匹坦注射液中SBECD含量的测定方法。
3讨论
为了获得最佳的测定效果，笔者还对其他4种色谱条件进行了比较。条件①：流动相为0.1 mol/L硝酸钾水溶液-乙腈（65∶35），其他色谱条件同“1.2.1”；条件②：流动相为水-甲醇（95∶5），其他色谱条件同“1.2.1”；条件③：流动相为水-甲醇（85∶15），色谱柱为XTerra RP18（150 mm×4.6 mm，5 μm），其他色谱条件同“1.2.1”；条件④ ：流动相为0.1 mol/L硝酸钾水溶液-甲醇（45∶55），其他色谱条件同“1.2.1”。试验发现，条件①中SBECD峰与相邻峰的分离度
小于1.5，且溶剂峰影响显著；条件②中SBECD峰会受到枸
橼酸马罗匹坦峰干扰，二者几乎同时出峰；条件③中SBECD峰在色谱柱上几乎无保留，出峰时间约为1.1 min，且紧邻溶剂峰；条件④中SBECD峰与相邻峰分离度尚可，但该条件的耐用性较差，当在一定范围内变化流动相的比例时，SBECD峰与相邻峰的分离度变化较大，甚至无法实现基线分离。
为了比较条件④与“1.2.1”中色谱条件的耐用性，笔者在±5%的范围内变化流动相的比例，并考察了SBECD峰与相邻峰的分离度。结果发现，在±5%的范围内变化条件④的流动相比例，即0.1 mol/L硝酸钾水溶液-甲醇的比例分别为40∶60、45∶55、50∶50时，SBECD峰与相邻峰的分离度分别为1.5、2.5、1.3；当在±5%的范围内变化“1.2.1”中色谱条件的流动相比例，即0.1 mol/L硝酸钾水溶液-甲醇的比例分别为60∶40、65∶35、70∶30时，SBECD峰与相邻峰的分离度分别为3.7、4.2、3.6。通过比较发现，“1.2.1”的色谱条件下，SBECD峰与相邻峰的分离度优于条件④，而且当在一定范围内变化流动相的比例时SBECD峰仍能与相邻峰实现良好的分离。
4小结
笔者建立的方法专属性强、准确度好、适用范围宽，可作为马罗匹坦注射液中SBECD的含量测定方法。该研究也为类似制剂中SBECD的质量控制提供了研究资料。
参考文献
[1]
李闻新.新型药用辅料磺丁基醚β环糊精的质量控制方法研究[D].石家庄：河北医科大学，2013：91-106.
[2] 毛勇，邓媛，李皎.高效液相色谱法测定混合环糊精中α环糊精的含量[J].中国食品添加剂，2010（3）：237-239.
[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：二部[S].北京：中国医药科技出版社，2010.
关键词磺丁倍他环糊精钠；马罗匹坦注射液；分子排阻色谱法
中图分类号S859.79文献标识码
A文章编号0517-6611（2015）21-154-03
马罗匹坦是1型神经激肽（NK1）的受体拮抗剂，可通过抑制P物质（引起呕吐的关键性神经递质）而作用于中枢神经系统。马罗匹坦注射液可以用于预防和治疗犬的急性呕吐。
磺丁倍他环糊精钠（SBECD）作为赋形剂添加于马罗匹坦注射液中，由于其对含氮类药物具有特殊的亲和力和包合性，因此主要用于提高药物的溶解性和生物利用度。但是，有研究发现重复给药时容易出现肾脏蓄积，因此需要对制剂中SBECD的含量进行准确控制。笔者采用分子排阻色谱法测定了马罗匹坦注射液中SBECD的含量，并对其进行了方法学考察。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1主要试剂。磺丁倍他环糊精钠对照品，纯度95.8%，购自美国辉瑞公司；马罗匹坦注射液购自美国辉瑞公司；甲醇，色谱纯；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。
1.1.2主要仪器。高效液相色谱仪， 2695型，配有410示差折光检测器和EmpowerⅡ工作站，为美国Waters公司产品；电子分析天平，AE240型，为瑞士METTLERTOLEDO公司产品。
1.2方法
1.2.1色谱条件。色谱柱为YMCDiol60（8.0 mm×300 mm，5 μm），柱温为35 ℃；流动相为0.1 mol/L硝酸钾溶液-甲醇（65∶35），流速2.0 ml/min；示差折光检测器，检测器温度为35 ℃；进样量为10 μl。
1.2.2溶液制备。
1.2.2.1SBECD对照品储备液。取SBECD对照品约600 mg，精密称量，置于10 ml量瓶中，加入流动相使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度约为60 mg/ml的对照品储备液。
1.2.2.2样品溶液。精密量取马罗匹坦注射液1 ml，置于10 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得样品溶液。
1.2.2.3陰性样品溶液。按照马罗匹坦注射液的处方，配制不含有SBECD的阴性样品；按照“1.2.2.2”中样品溶液的制备方法，配制阴性样品溶液。
1.2.3方法学考察。
1.2.3.1专属性考察。精密量取对照品储备液1 ml，置于10 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，即得对照品溶液。精密量取对照品溶液和阴性样品溶液各10 μl，按照“1.2.1”中的色谱条件进行测定，记录色谱图。
1.2.3.2线性关系考察。精密量取对照品储备液0.1、0.2、0.3、0.5、1.0、1.5、2.0、3.0 ml，分别置于10 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得到浓度分别为0.6、1.2、1.8、3.0、6.0、9.0、12.0、18.0 mg/ml的对照品溶液。按照“1.2.1”中的色谱条件，进样测定，记录色谱图，以浓度X（mg/ml）对峰面积Y作图，并进行统计学处理。
1.2.3.3精密度试验。精密量取对照品储备液1 ml置于10 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得到浓度约为6 mg/ml的对照品溶液，按照“1.2.1”中的色谱条件进样测定，连续进样6次，计算SBECD峰面积的RSD。
1.2.3.4稳定性试验。 取制备的样品溶液，分别于0、8、16、24、32、48 h按照“1.2.1”中的色谱条件进样测定，计算SBECD峰面积的RSD。
1.2.3.5加样回收率试验。按照“1.2.1”中的色谱条件，对马罗匹坦注射液中SBECD的含量进行测定，结果其含量为62.13 mg/ml。
精密量取马罗匹坦注射液0.5 ml，共量取9份，分别置于10 ml量瓶中；每3份为1组，将上述9份样品分为3组，每组分别精密加入SBECD对照品储备液0.4、0.5、0.6 ml，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得到添加水平约为80%、100%和120%的3组样品，按照“1.2.1”中的色谱条件分别进样测定，计算加样回收率。
1.2.3.6检出限和定量限。按照“1.2.2”中对照品储备液的配制方法制备不同浓度的SBECD对照品溶液，按照“1.2.1”中的色谱条件进样测定，计算信噪比。信噪比为3和10时的浓度即分别为SBECD的检出限和定量限。
1.2.4样品含量的测定。 按照“1.2.2”中对照品储备液的配制方法，制备浓度约为6 mg/ml的SBECD对照品溶液，精密吸取样品溶液和对照品溶液各10 μl，按照“1.2.1”中的色谱条件进行测定，记录色谱图，按照外标法以峰面积计算马罗匹坦注射液中SBECD的含量。
2结果与分析
2.1方法学考察
2.1.1专属性考察。从图1可以看出，阴性样品在SBECD色谱峰位置处无吸收峰，表明样品中的其他成分对SBECD的测定结果无干扰。 2.1.2SBECD的标准曲线。从图2可以看出，在0.6～18.0 mg/ml的范围内，SBECD浓度X与峰面积Y之间呈良好的线性关系。回归方程Y=23 119X-1 685.5 （r=0.999 9，n=8）。
2.1.3精密度试验。 连续进样6次，SBECD峰面积的RSD=0.3%（n=6），结果表明该方法的精密度良好。
2.1.4稳定性试验。稳定性试验结果表明，48 h内SBECD峰面积的RSD为0.2%（n=6），表明样品溶液在48 h内稳定。
2.1.5加样回收率。由表1可知，在80%～120%的添加水平下，SBECD的回收率为95%～98%。
2.1.6检出限和定量限。当SBECD浓度为0.3 mg/ml时，信噪比为13.2；当SBECD浓度为0.1 mg/ml时，信噪比为4.6。因此，该方法的检出限约为0.1 mg/ml，定量限约为0.3 mg/ml。
2.2样品含量应用笔者建立的方法对马罗匹坦注射液中的SBECD含量进行测定，结果见表2。从图3可以看出，SBECD峰与其他峰的分离度良好，结果准確可靠，说明该方法可作为马罗匹坦注射液中SBECD含量的测定方法。
3讨论
为了获得最佳的测定效果，笔者还对其他4种色谱条件进行了比较。条件①：流动相为0.1 mol/L硝酸钾水溶液-乙腈（65∶35），其他色谱条件同“1.2.1”；条件②：流动相为水-甲醇（95∶5），其他色谱条件同“1.2.1”；条件③：流动相为水-甲醇（85∶15），色谱柱为XTerra RP18（150 mm×4.6 mm，5 μm），其他色谱条件同“1.2.1”；条件④ ：流动相为0.1 mol/L硝酸钾水溶液-甲醇（45∶55），其他色谱条件同“1.2.1”。试验发现，条件①中SBECD峰与相邻峰的分离度
小于1.5，且溶剂峰影响显著；条件②中SBECD峰会受到枸
橼酸马罗匹坦峰干扰，二者几乎同时出峰；条件③中SBECD峰在色谱柱上几乎无保留，出峰时间约为1.1 min，且紧邻溶剂峰；条件④中SBECD峰与相邻峰分离度尚可，但该条件的耐用性较差，当在一定范围内变化流动相的比例时，SBECD峰与相邻峰的分离度变化较大，甚至无法实现基线分离。
为了比较条件④与“1.2.1”中色谱条件的耐用性，笔者在±5%的范围内变化流动相的比例，并考察了SBECD峰与相邻峰的分离度。结果发现，在±5%的范围内变化条件④的流动相比例，即0.1 mol/L硝酸钾水溶液-甲醇的比例分别为40∶60、45∶55、50∶50时，SBECD峰与相邻峰的分离度分别为1.5、2.5、1.3；当在±5%的范围内变化“1.2.1”中色谱条件的流动相比例，即0.1 mol/L硝酸钾水溶液-甲醇的比例分别为60∶40、65∶35、70∶30时，SBECD峰与相邻峰的分离度分别为3.7、4.2、3.6。通过比较发现，“1.2.1”的色谱条件下，SBECD峰与相邻峰的分离度优于条件④，而且当在一定范围内变化流动相的比例时SBECD峰仍能与相邻峰实现良好的分离。
4小结
笔者建立的方法专属性强、准确度好、适用范围宽，可作为马罗匹坦注射液中SBECD的含量测定方法。该研究也为类似制剂中SBECD的质量控制提供了研究资料。
参考文献
[1]
李闻新.新型药用辅料磺丁基醚β环糊精的质量控制方法研究[D].石家庄：河北医科大学，2013：91-106.
[2] 毛勇，邓媛，李皎.高效液相色谱法测定混合环糊精中α环糊精的含量[J].中国食品添加剂，2010（3）：237-239.
[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：二部[S].北京：中国医药科技出版社，2010.