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摘要：目的：用分光光度法测定蜂胶软胶囊中总黄酮含量，并对测量不确定度进行全面评定，分析不确定度的来源。
方法：依照蜂胶软胶囊中总黄酮的含量测定过程，分析来自于溶液配制、称量、玻璃仪器及仪器测量过程中诸多不确定因素对测量结果的影响，量化不确定度的各个分量，计算合成不确定度及扩展不确定度。
结果：
芦丁作为标准品测定浓度与吸光度关系的回归方程：y=0.02723x-0.02070；其扩展不确定度U=0.37%，k=2；总黄酮（以芦丁计）为2.74%。
结论：得出测定的扩展不确定度，从而可知测量方法简便，灵敏度和准确度均较高。
关键词：蜂胶软胶囊 总黄酮 分光光度法 测量不确定度
Doi：10.3969/j.issn.1671-8801.2013.08.027
【中图分类号】R4 【文献标识码】A 【文章编号】1671-8801（2013）08-0027-02
蜂胶是蜂产品中一类十分重要的天然物质，它对多种疾病具有十分明显的医疗保健功效。蜂胶的化学成分极为复杂，从蜂胶中分离出的最多的功效成分是类黄酮物质。本中心测定蜂胶中总黄酮依据《保健食品检验与评价技术规范》（2003版）中总黄酮含量的测定方法进行测定。依据《检测和校准实验室能力的通用要求》及其它实验室认可文件的要求，检测实验室应具有并应用测量不确定度的程序对检测结果的测量不确定度进行评定，并参照《化学分析中不确定度的评估指南》要求，建立紫外分光光度法进行总黄酮含量的不确定度评定的一般模式，根据评定结果确认方法制定的可行性范围的一般方法。
1 测定方法描述
1.1 测定方法。
1.1.1 芦丁标准溶液：称取5.0mg芦丁，加甲醇溶解并定容至100ml，即得50μg/ml。
1.1.2 标准曲线：吸取芦丁标准溶液：0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml于10ml比色管中，加甲醇至刻度，摇匀，于360nm比色，计算回归方程。
1.1.3 样品测定：称取一定量的样品，加乙醇定容至25ml，摇匀后，超声提取20min，放置，吸取上清液1.0ml，于蒸发皿中，加1g聚酰胺粉吸附，于水浴上挥去乙醇，然后转入层析柱。先用20ml苯洗，苯液弃去，然后用甲醇洗脱黄酮，定容至25ml。此液于波长360nm测定吸收值，以回归方程，计算样品中总黄酮含量。
1.2 主要仪器。
1.4 识别不确定度来源。
A类标准不确定度：通过实验测得数据，以统计分析方法评定的不确定度，结果以实验标准差表征。
B类标准不确定度：根据经验、资料及假设的不确定度以概率分布估计获得的标准偏差表征。
1.4.1 本实验方法质量不确定度因素有四个方面的来源：
（1）由天平校准产生的不确定度，属于B类不确定度。包括天平的灵敏性及线性。
（2）称量的重复性，属于A类，采用先称量容器或称量纸，再称量样品的方法称量，该不确定度应考虑2次。
（3）对照品的纯度及摩尔质量引入的不确定度，属于B类。
（4）样品的均匀性，本实验略。
1.4.2 容器体积的不确定度主要有2个来源：
1.5.6 标准曲线拟合引入的不确定度。用紫外分光光度计对标准系列进行测定，每个浓度分别测量2次，绘制标准曲线，再测定处理后的样品中的总黄酮浓度。则u（c0）由以下部分组成：从标准曲线求c0时产生的不确定度u1，标准储备液配制成5个不同浓度标准溶液时产生的不确定度u2，重复性测量产生的不确定度u3，仪器校准的不确定度u4。
5个标准溶液的测定结果如表1所示：
根据表1中的标准溶液质量浓度和吸收度，设拟合标准方程为：
Y=bx+a
计算得 a=-0.02070 b=0.02723 r=0.99911
数学模型为 y=0.02723x-0.02070
对处理后的样品中总黄酮含量进行6次测定，测定结果如表2。
2 讨论
从不确定度分量图可以看出，蜂胶软胶囊总黄酮含量测定的测量不确定度因素中，影响最大的是合成标准，其次是样品重复性及标准曲线产生的不确定度。因而，要求分析人员要熟练掌握蜂胶软胶囊总黄酮测定时的各项操作技术，同时还要熟练掌握移液、定容过程中的各项要领，并严格按照方法规定的检测条件进行测定。
参考文献
[1] 《保健食品检验与技术评价规范》2003年版
[2] 检验和校准实验室能力的通用要求[S].GB/T15481-2000
[3] 实验室认可准则[S].CNAS-RL01
[4] 能力验证规则[S].CNAS-RL02；2006
[5] 测量不确定度评价和报告通用要求[S].CNAS-RL07；2006
[6] 玻璃仪器的计量单位.广州广电计量检测股份有限公司/信息产业部电子602计量站
方法：依照蜂胶软胶囊中总黄酮的含量测定过程，分析来自于溶液配制、称量、玻璃仪器及仪器测量过程中诸多不确定因素对测量结果的影响，量化不确定度的各个分量，计算合成不确定度及扩展不确定度。
结果：
芦丁作为标准品测定浓度与吸光度关系的回归方程：y=0.02723x-0.02070；其扩展不确定度U=0.37%，k=2；总黄酮（以芦丁计）为2.74%。
结论：得出测定的扩展不确定度，从而可知测量方法简便，灵敏度和准确度均较高。
关键词：蜂胶软胶囊 总黄酮 分光光度法 测量不确定度
Doi：10.3969/j.issn.1671-8801.2013.08.027
【中图分类号】R4 【文献标识码】A 【文章编号】1671-8801（2013）08-0027-02
蜂胶是蜂产品中一类十分重要的天然物质，它对多种疾病具有十分明显的医疗保健功效。蜂胶的化学成分极为复杂，从蜂胶中分离出的最多的功效成分是类黄酮物质。本中心测定蜂胶中总黄酮依据《保健食品检验与评价技术规范》（2003版）中总黄酮含量的测定方法进行测定。依据《检测和校准实验室能力的通用要求》及其它实验室认可文件的要求，检测实验室应具有并应用测量不确定度的程序对检测结果的测量不确定度进行评定，并参照《化学分析中不确定度的评估指南》要求，建立紫外分光光度法进行总黄酮含量的不确定度评定的一般模式，根据评定结果确认方法制定的可行性范围的一般方法。
1 测定方法描述
1.1 测定方法。
1.1.1 芦丁标准溶液：称取5.0mg芦丁，加甲醇溶解并定容至100ml，即得50μg/ml。
1.1.2 标准曲线：吸取芦丁标准溶液：0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml于10ml比色管中，加甲醇至刻度，摇匀，于360nm比色，计算回归方程。
1.1.3 样品测定：称取一定量的样品，加乙醇定容至25ml，摇匀后，超声提取20min，放置，吸取上清液1.0ml，于蒸发皿中，加1g聚酰胺粉吸附，于水浴上挥去乙醇，然后转入层析柱。先用20ml苯洗，苯液弃去，然后用甲醇洗脱黄酮，定容至25ml。此液于波长360nm测定吸收值，以回归方程，计算样品中总黄酮含量。
1.2 主要仪器。
1.4 识别不确定度来源。
A类标准不确定度：通过实验测得数据，以统计分析方法评定的不确定度，结果以实验标准差表征。
B类标准不确定度：根据经验、资料及假设的不确定度以概率分布估计获得的标准偏差表征。
1.4.1 本实验方法质量不确定度因素有四个方面的来源：
（1）由天平校准产生的不确定度，属于B类不确定度。包括天平的灵敏性及线性。
（2）称量的重复性，属于A类，采用先称量容器或称量纸，再称量样品的方法称量，该不确定度应考虑2次。
（3）对照品的纯度及摩尔质量引入的不确定度，属于B类。
（4）样品的均匀性，本实验略。
1.4.2 容器体积的不确定度主要有2个来源：
1.5.6 标准曲线拟合引入的不确定度。用紫外分光光度计对标准系列进行测定，每个浓度分别测量2次，绘制标准曲线，再测定处理后的样品中的总黄酮浓度。则u（c0）由以下部分组成：从标准曲线求c0时产生的不确定度u1，标准储备液配制成5个不同浓度标准溶液时产生的不确定度u2，重复性测量产生的不确定度u3，仪器校准的不确定度u4。
5个标准溶液的测定结果如表1所示：
根据表1中的标准溶液质量浓度和吸收度，设拟合标准方程为：
Y=bx+a
计算得 a=-0.02070 b=0.02723 r=0.99911
数学模型为 y=0.02723x-0.02070
对处理后的样品中总黄酮含量进行6次测定，测定结果如表2。
2 讨论
从不确定度分量图可以看出，蜂胶软胶囊总黄酮含量测定的测量不确定度因素中，影响最大的是合成标准，其次是样品重复性及标准曲线产生的不确定度。因而，要求分析人员要熟练掌握蜂胶软胶囊总黄酮测定时的各项操作技术，同时还要熟练掌握移液、定容过程中的各项要领，并严格按照方法规定的检测条件进行测定。
参考文献
[1] 《保健食品检验与技术评价规范》2003年版
[2] 检验和校准实验室能力的通用要求[S].GB/T15481-2000
[3] 实验室认可准则[S].CNAS-RL01
[4] 能力验证规则[S].CNAS-RL02；2006
[5] 测量不确定度评价和报告通用要求[S].CNAS-RL07；2006
[6] 玻璃仪器的计量单位.广州广电计量检测股份有限公司/信息产业部电子602计量站