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摘要：为了完善草菇液体菌种的生产和应用，尽快使草菇实现工厂化栽培，本试验以天达V901为试材，通过摇瓶发酵，进行了草菇液体菌种培养条件优化研究。结果表明，液体培养条件下，适宜草菇菌丝生长的最佳碳源是淀粉，最佳氮源是蛋白胨，最佳碳氮比是10∶1，最佳淀粉浓度是3.0%。草菇菌丝生长的最适温度为30℃，最适初始pH为7.0。
关键词：草菇；液体培养；营养物质；培养条件；优化试验
中图分类号：S646.1+3文献标识号：A文章编号：1001-4942（2014）01-0058-03
草菇（Volvariellavolvacea）味道鲜美，营养丰富，素有“放一片，香一锅”之美誉，同时它还有抗肿瘤、增强机体抗病力的作用，是一种优良的食药兼用型营养保健食品[1]。由于我国草菇的出口量较大，素有“中国蘑菇”之称[2]。草菇是典型的高温型食用菌，在热带和亚热带地区被广泛栽培[3]。我国南方各省均有栽培，是我国南方的一种著名食用菌。近几年我国北方省区也逐步在夏季进行广泛栽培。
由于生产工艺、技术条件及资金的限制，目前我国多数食用菌生产企业仍然以固体制种为主，液体制种的应用只局限于杏鲍菇、金针菇和蟹味菇等品种[4]。而草菇一般都是传统方法栽培，多采用固体接种，生物学效率明显低于其他主要品种的食用菌[5]，故其制种技术和栽培技术急需改进。为了完善草菇液体菌种的生产和应用，尽快使草菇实现工厂化栽培，本试验通过摇瓶发酵，对草菇液体菌种培养条件进行了优化研究。1材料与方法
1.1供试菌株
天达V901，山东省农业科学院农业资源与环境研究所保藏。
1.2培养基
1.2.1种子培养基马铃薯200g，麸皮80g，葡萄糖20g，蛋白胨4g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁1.5g，水1000ml，pH自然。121℃灭菌20min。
1.2.2基础培养基葡萄糖20g，蛋白胨4g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁1.5g，水1000ml，pH自然。121℃灭菌20min。
1.3试验设计
液体培养条件对草菇菌丝生长的影响。
（1）在基础培养基的基础上，依次对碳源、氮源、碳源浓度及碳氮比进行优化试验。
（2）在最佳营养成分的基础上分别设定不同发酵初始pH值以及培养温度进行试验，筛选最佳初始pH值和培养温度。
1.4试验方法
1.4.1接种从试管斜面上挑取草菇菌丝接种到种子培养基中，150r/min、35℃恒温培养5天，接种到基础培养基上进行试验。
1.4.2培养条件250ml三角瓶中装入100ml培养液，接种后，35℃、150r/min培养5天，检测。
1.4.3检测方法（1）菌丝干重的测定[6]：取80ml发酵液离心收集菌丝，洗涤两次后涂布到表面皿上，80℃烘至恒重，称重。
（2）菌球数量测定：取1ml发酵液倒入平板中计数，取3次的平均值。
（3）菌球大小测定：随机取15个菌球，在平板上排成一排，测定总长度，计算出单个菌球的直径，测量3次取平均值[7]。
2结果与分析
2.1不同碳源物质对液体培养草菇菌丝生长的影响
从表1可以看出，以淀粉为碳源，菌丝生长最快，菌丝干重为9.14mg/ml；其次是麦芽糖，菌丝干重为8.12mg/ml；菌丝生长最慢的是葡萄糖，仅为4.01mg/ml。从菌球来看，淀粉为碳源，菌球小、数量多；其次是麦芽糖、果糖、糊精、蔗糖，以葡萄糖为碳源生长差，菌球数量最少。作为液体菌种，不仅要考虑菌丝量，还要综合考虑菌球的指标，菌球小、数量多、菌丝量大的液体菌种比较好，故最适碳源为淀粉。
2.2不同氮源物质对草菇菌丝生长的影响
从表2可以看出，以蛋白胨为氮源菌丝生长最快，菌丝干重为10.23mg/ml；其次是酵母粉，菌丝干重为8.12mg/ml；以硝酸铵为氮源菌丝生长最慢。从菌球来看，以蛋白胨和酵母粉为氮源，菌球数多且大小均匀；其次是以硝酸钾和尿素为氮源的培养基；以硫酸铵、硝酸铵为氮源，菌球数量少，几乎不长。综合分析，有机氮源比无机氮源更适于草菇菌丝生长，且以蛋白胨为氮源效果最好。
关键词：草菇；液体培养；营养物质；培养条件；优化试验
中图分类号：S646.1+3文献标识号：A文章编号：1001-4942（2014）01-0058-03
草菇（Volvariellavolvacea）味道鲜美，营养丰富，素有“放一片，香一锅”之美誉，同时它还有抗肿瘤、增强机体抗病力的作用，是一种优良的食药兼用型营养保健食品[1]。由于我国草菇的出口量较大，素有“中国蘑菇”之称[2]。草菇是典型的高温型食用菌，在热带和亚热带地区被广泛栽培[3]。我国南方各省均有栽培，是我国南方的一种著名食用菌。近几年我国北方省区也逐步在夏季进行广泛栽培。
由于生产工艺、技术条件及资金的限制，目前我国多数食用菌生产企业仍然以固体制种为主，液体制种的应用只局限于杏鲍菇、金针菇和蟹味菇等品种[4]。而草菇一般都是传统方法栽培，多采用固体接种，生物学效率明显低于其他主要品种的食用菌[5]，故其制种技术和栽培技术急需改进。为了完善草菇液体菌种的生产和应用，尽快使草菇实现工厂化栽培，本试验通过摇瓶发酵，对草菇液体菌种培养条件进行了优化研究。1材料与方法
1.1供试菌株
天达V901，山东省农业科学院农业资源与环境研究所保藏。
1.2培养基
1.2.1种子培养基马铃薯200g，麸皮80g，葡萄糖20g，蛋白胨4g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁1.5g，水1000ml，pH自然。121℃灭菌20min。
1.2.2基础培养基葡萄糖20g，蛋白胨4g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁1.5g，水1000ml，pH自然。121℃灭菌20min。
1.3试验设计
液体培养条件对草菇菌丝生长的影响。
（1）在基础培养基的基础上，依次对碳源、氮源、碳源浓度及碳氮比进行优化试验。
（2）在最佳营养成分的基础上分别设定不同发酵初始pH值以及培养温度进行试验，筛选最佳初始pH值和培养温度。
1.4试验方法
1.4.1接种从试管斜面上挑取草菇菌丝接种到种子培养基中，150r/min、35℃恒温培养5天，接种到基础培养基上进行试验。
1.4.2培养条件250ml三角瓶中装入100ml培养液，接种后，35℃、150r/min培养5天，检测。
1.4.3检测方法（1）菌丝干重的测定[6]：取80ml发酵液离心收集菌丝，洗涤两次后涂布到表面皿上，80℃烘至恒重，称重。
（2）菌球数量测定：取1ml发酵液倒入平板中计数，取3次的平均值。
（3）菌球大小测定：随机取15个菌球，在平板上排成一排，测定总长度，计算出单个菌球的直径，测量3次取平均值[7]。
2结果与分析
2.1不同碳源物质对液体培养草菇菌丝生长的影响
从表1可以看出，以淀粉为碳源，菌丝生长最快，菌丝干重为9.14mg/ml；其次是麦芽糖，菌丝干重为8.12mg/ml；菌丝生长最慢的是葡萄糖，仅为4.01mg/ml。从菌球来看，淀粉为碳源，菌球小、数量多；其次是麦芽糖、果糖、糊精、蔗糖，以葡萄糖为碳源生长差，菌球数量最少。作为液体菌种，不仅要考虑菌丝量，还要综合考虑菌球的指标，菌球小、数量多、菌丝量大的液体菌种比较好，故最适碳源为淀粉。
2.2不同氮源物质对草菇菌丝生长的影响
从表2可以看出，以蛋白胨为氮源菌丝生长最快，菌丝干重为10.23mg/ml；其次是酵母粉，菌丝干重为8.12mg/ml；以硝酸铵为氮源菌丝生长最慢。从菌球来看，以蛋白胨和酵母粉为氮源，菌球数多且大小均匀；其次是以硝酸钾和尿素为氮源的培养基；以硫酸铵、硝酸铵为氮源，菌球数量少，几乎不长。综合分析，有机氮源比无机氮源更适于草菇菌丝生长，且以蛋白胨为氮源效果最好。