背景：阴沟肠杆菌是一种重要的条件致病菌,易致免疫低下者感染。多粘菌素是对抗MDR和XDR革兰阴性菌感染的最后防线,尽管细菌对多粘菌素的耐药率很低,但近年也有阴沟肠杆菌对多粘菌素耐药的零散报道,值得关注。我们从临床感染患者分离到一株阴沟肠杆菌WCH121623,体外药敏对多粘菌素高度耐药,其耐药机制如何,值得积极探索。目的：初步探索阴沟肠杆菌WCH121623对多粘菌素耐药的相关机制,将为应对可能日益严峻的多粘菌素耐药和新抗菌药物的研发提供基础研究资料。方法：通过Tn5转座子随机插入、定点基因敲除和基因回补、替换了解与耐药相关的基因和耐药机制。利用鸟枪法克隆寻找耐药基因。使用转录组测序了解基因在转录水平的变化,并结合脂多糖电泳等表型分析初步探索阴沟肠杆菌的耐药机制。结果：首先通过Tn5转座子随机插入和质粒基因回补获得2个基因位点dedA和phoP,结合CCCP抑制实验和脂多糖电泳等结果提示,该菌对多粘菌素耐药可能与外排泵系统有关,随后定点基因敲除tolC基因及与其紧密相关的acrB基因,结果表明本菌对多粘菌素的耐药很可能源于AcrAB-TolC介导的外排泵机制而非经典的脂多糖修饰。通过基因替换证明tolC和phoP的基因突变不是本菌对多粘菌素耐药的全部原因。为进一步了解耐药发生的根本机制,使用鸟枪法随机克隆,建立本菌DNA质粒文库,在质粒文库中筛选出一个新的基因hp_01194,质粒转化该基因可使对多粘菌素敏感的阴沟肠杆菌变为高度耐药株,且表现出与WCH121623相同的耐药特性,实验结果也获得转录组测序的印证。结论：本研究初步证实阴沟肠杆菌WCH121623对多粘菌素高度耐药可能主要与AcrAB-TolC介导的外排泵机制有关,有别于经典的脂多糖修饰机制,本研究中新发现的耐药基因hp_01194可直接导致敏感菌株对多粘菌素耐药,可能是一种介导阴沟肠杆菌对多粘菌素耐药的新机制,待后续研究。