超抗原将抗原呈递细胞上的MHC Ⅱ类与TCR交联并激活大部分T细胞群,能够引起大比例的免疫反应。超抗原通过同时结合MHC Ⅱ和T细胞上的T细胞受体引起大量T细胞增殖。我们需要深化探究超抗原和T细胞的相互作用,这将帮助我们研究淋巴细胞对于自身抗原免疫耐受的机理。本文通过分别表达和纯化超抗原SEA和SEH、人源αβTCR/CD3复合物和p MHC蛋白再相互结合来研究超抗原与人源αβTCR/CD3复合物和p MHC的相互作用。首先,将超抗原SEA和SEH的基因片段分别插入到p ET-21a(+)质粒中,使其在大肠杆菌中表达;将同一种αβTCR的α、β亚基插入到同一个p EB6质粒中,将CD3的δ、ε、γ、ζ四个亚基插入到同一个pc DNA3.1质粒中,然后使其在哺乳动物细胞中表达;将pMHC Ⅱ基因片段插入到p Fast Bac Dual质粒中,使其在昆虫细胞中表达。之后通过亲和层析富集蛋白,再通过分子筛分离蛋白,并将纯化后的蛋白用于相互作用研究。首先,我们探究了超抗原与αβTCR/CD3复合物两者的相互作用,然后进行了超抗原、αβTCR/CD3复合物和p MHC蛋白三者的相互作用。最后,我们探讨了交联剂和Zn2+浓度对超抗原、αβTCR/CD3复合物和p MHC相互作用的影响。实验结果发现,超抗原SEA和SEH在原核表达系统中表达较为理想;人源的αβTCR/CD3复合物在哺乳动物细胞中的表达量较低,难以获得大量的蛋白;通过优化条件后p MHC在昆虫细胞中能够获得足够使用的蛋白。超抗原与αβTCR/CD3及对应的p MHC的相互作用研究中发现,SEH与2IAL TCR/CD3及p MHC的结合较好,可以用于透射电镜观察;交联剂可以提高形成的复合物产量但可能会使得复合物的形态发生变化从而会影响实验结果的分析。