目的恶性黑色素瘤（Malignant melanoma,MM）是全世界范围内最具攻击性的皮肤癌症之一,它是由黑素细胞衍生的癌症,具有很强的免疫原性。恶性黑色素瘤治疗效果不理想,数十年来,MM的治疗主要依赖于化疗药物,特别是达卡巴嗪及其口服类似物替莫唑胺,但是现有药物治疗效果不稳定且毒副作用大。本课题组围绕小鼠黑色素瘤的药物干预已进行了许多研究,其中2,3-吲哚醌是广泛存在于动物和人体的内源性活性物质^[1-2],化学结构明确,随着对其药理作用的深入研究,发现它具有广泛的生物学活性,已有研究证明ISA具有明确的镇痛、抗炎、抗病毒等作用^[3-6],且对多种肿瘤模型效果明显^[7]。因此,研究2,3-吲哚醌对小鼠黑色素瘤增殖的影响,有希望为治疗恶性黑色素瘤提供新的安全的药物。本研究通过ISA体内和体外干预小鼠黑色素瘤,研究其对小鼠黑色素瘤的增殖、凋亡的影响及机制,以及潜在的减轻化疗药物骨髓抑制的作用。为治疗恶性黑色素瘤提供理论及实验依据。方法1.体外实验:将B16细胞系分为四组:对照组,ISA组,阳性对照组（5-氟尿嘧啶组）,联合用药组,每组六孔。各组药物用量如下:对照组加入1%DMSO,ISA组加入用DMSO溶解的ISA终浓度为400μM（含1%DMSO）,5-氟尿嘧啶组加入5-Fu终浓度为200μM（含1%DMSO）,合用组分别加入两药使其终浓度分别为400μM和200μM（含1%DMSO）,处理48h。用流式细胞仪,定容300μL/孔,相同速度、固定收样时间120s/孔,进行细胞数目检测、细胞周期检测、凋亡检测、bcl-2表达检测。2.体内实验:将B16细胞按5×10⁵/只的数目接种在C57BL/6小鼠背部,随机分为四组:对照组（西黄蓍胶灌胃）,ISA组（ISA混悬液灌胃）,阳性对照组（5-氟尿嘧啶灌胃）,联合用药组（ISA和5-氟尿嘧啶同时灌胃）。每天记录肿瘤生长状况,灌胃两周后处死,取肿瘤组织称重、脾脏、骨髓器官等检测各群免疫细胞数目变化。结果1.体外结果显示,2,3-吲哚醌、5-氟尿嘧啶和二者联用都有明显的抑制小鼠黑色素瘤细胞增殖的作用（P<0.05）。2,3-吲哚醌能将细胞周期阻滞在S期（P<0.05）,且出现sub-G1凋亡峰,阳性对照5-氟尿嘧啶有明显的细胞周期阻滞的作用（P<0.05）,但是没有凋亡峰,联用后凋亡峰明显增加（P<0.05）,周期阻滞效果更明显。凋亡检测结果显示ISA能诱导B16细胞凋亡（P<0.05）,且呈剂量依赖性。Bcl-2检测结果显示ISA组Bcl-2平均荧光强度较对照组明显降低（P<0.05）。2.体内结果显示,ISA、5-氟尿嘧啶和二者联用都能明显抑制小鼠黑色素瘤的生长（P<0.05）,并且ISA对免疫系统无明显抑制（P>0.05）,甚至可以减轻5-氟尿嘧啶的骨髓抑制作用（P<0.05）。结论1.ISA在体外和体内都有明显的抑制小鼠黑色素瘤增殖的效果,说明2,3-吲哚醌能有效抑制小鼠黑色素瘤的增殖,主要机制可能与下调Bcl-2表达有关。2.ISA对正常免疫细胞数目无明显影响,但是可以减轻5-氟尿嘧啶的骨髓抑制作用,升高总白细胞、中性粒细胞、NK细胞数目等。