【摘 要】
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将鸭瘟强毒AV1221株一百倍稀释，接种12日龄鸭胚绒毛尿囊腔，增殖病毒。根据GenBank中已发表鸭瘟弱毒株序列，设计合成四条引物，以病毒DNA为模板，用PCR方法，分段扩增UL24-TK(414bp)、U
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将鸭瘟强毒AV1221株一百倍稀释，接种12日龄鸭胚绒毛尿囊腔，增殖病毒。根据GenBank中已发表鸭瘟弱毒株序列，设计合成四条引物，以病毒DNA为模板，用PCR方法，分段扩增UL24-TK(414bp)、UL24-25(1813bp)基因片段，并用巢式PCR进行目的DNA的筛选。将扩增得到的基因克隆到pMD18-T载体上，经蓝白斑和PCR鉴定筛选出阳性克隆进行序列测定，用生物学软件将所测序列进行编辑，然后将其与弱毒序列和其它α-疱疹病毒进行比较。结果显示：鸭瘟病毒AV1221株UL24基因ORF全长为1230bp，编码409个氨基酸，与参考序列比较，核苷酸同源性为99.8％，有三个核苷酸位点发生变异，氨基酸的同源性为99.8％，仅有一个核苷酸位点发生变异，与禽疱疹病毒的亲缘性较近。上述结果表明，UL24基因在不同毒株间高度保守。
采用生物学软件分析UL24蛋白的抗原性选取其中一段抗原性较好的区域，命名为UL24-1，重新设计一对引物，引物两端有Ecoli Ⅰ和HindⅢ酶切位点，采用PCR方法克隆该片段。将所得的片断插入pET-32a(+)载体，构建重组质粒，重组质粒经PCR和酶切鉴定为阳性后，转化入宿主菌BL21。IPTG诱导表达，经SDS-PAGE分析表明，在33KD处出现了与预期大小相符的目的条带。对表达蛋白做可溶性分析，证实该蛋白主要以包涵体形式存在。
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